在离体滋养细胞和胎盘模型中通过 Tonate 病毒 (TONV) 和寨卡病毒 (ZIKV) 评估病毒复制 (ZITOPEx)

胎盘将在剖腹产分娩后收集，在口头和书面信息后，通过为足月正常单胎妊娠的妇女提供信息说明，收集胎盘。

同样，在自愿终止妊娠的情况下，在子宫内抽吸后收集滋养细胞。

• 细胞系和病毒
• 人胎盘培养外植体的感染
• 通过 qRT-PCR 测定组织中的病毒载量

胎盘组织将在分娩后一小时内处理。 绒毛膜绒毛将被解剖成 5 毫米的切片，组织用标准培养基（RPMI-1640 补充有 10% 热灭活胎牛血清 (FCS)、1% L-谷氨酰胺和 1% 青霉素）充分洗涤至少 3 次/链霉素）去除母体血液、胎膜和血块。

将胶原凝胶海绵置于含有 3mL 培养基（RPMI-1640 补充有 15% 热灭活胎牛血清 (FCS)、1% 青霉素/链霉素、0 1% 庆大霉素、1% 两性霉素 B）的 6 孔板孔中, 1% L-谷氨酰胺, 1% 非必需氨基酸, 1% 丙酮酸钠）每孔。 绒毛膜绒毛将被解剖成 5 毫米的部分，并放置在培养基和空气之间界面处的胶原凝胶海绵顶部。

组织将在裂解缓冲液 + 4%TCEP（三（2-羧乙基）膦盐酸盐）（Machery-Nagel 参考号：740395.107）中通过机械破碎来裂解 使用 Precellys 系统。 裂解的组织将在 100 mg/mL 的 Macherey-Nagel 裂解缓冲液中稀释，分装并储存在 -80°C 直至提取。 使用 Nucleospin 96 RNA Core 试剂盒（Macherey Nagel 参考号：740466.4）一式两份提取总 RNA， 按照供应商的说明。

将在相同条件下平行提取和测试标准样本、对照以及 ZIKV 和 TONV 病毒 RNA。 根据制造商的建议，使用 Superscript One-Step RT-qPCR 试剂盒（Invitrogen 参考号：11732088），使用针对 ZIKV 和 TONV 的探针和引物，对提取的 RNA 进行逆转录酶处理。