前のヴィヴォのトロホブラストおよび胎盤モデル内での Tonate ウイルス (TONV) およびジカウイルス (ZIKV) によるウイルス複製の評価 (ZITOPEx)

胎盤は、正期産で正常な単胎妊娠をした女性のための情報ノートの配達による口頭および書面による情報の後、帝王切開による出生後に収集されます。

同様に、栄養芽層は、自発的な妊娠中絶との関連で、子宮内吸引後に収集されます。

• 細胞株とウイルス
• ヒト胎盤培養外植片の感染
• qRT-PCRによる組織中のウイルス量の測定

胎盤組織は分娩後 1 時間以内に取り扱われます。 絨毛膜絨毛は 5 mm のセクションに解剖され、標準的な培養液 (10% 熱不活性化牛胎児血清 (FCS)、1% L-グルタミンおよび 1% ペニシリンを添加した RPMI-1640) で最低 3 回、組織を十分に洗浄します。 /ストレプトマイシン) 母体の血液、膜および血餅を除去します。

コラーゲンゲルスポンジは、3mLの培養培地を含む6ウェルプレートウェルに配置されます(RPMI-1640は、15%熱不活化ウシ胎児血清(FCS)、1%ペニシリン/ストレプトマイシン、0.1%ゲンタマイシン、1%アムホテリシンBを添加、1% L-グルタミン、1% 非必須アミノ酸、1% ピルビン酸ナトリウム) ウェルあたり。 絨毛膜絨毛は 5 mm のセクションに解剖され、培養液と空気の間の界面でコラーゲン ゲル スポンジの上に配置されます。

組織は、溶解バッファー + 4%TCEP (トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン塩酸塩) (Machery-Nagel ref: 740395.107) での機械的破壊によって溶解されます。 プレセリスシステム搭載。 溶解した組織を 100 mg/mL の Macherey-Nagel 溶解バッファーで希釈し、分注して、抽出まで -80 °C で保存します。 全 RNA は Nucleospin 96 RNA コア キット (Macherey Nagel ref: 740466.4) を使用して重複して抽出されます。 サプライヤーの指示に従ってください。

標準サンプル、コントロール、ZIKV および TONV ウイルス RNA を抽出し、同じ条件下で並行してテストします。 抽出された RNA は、メーカーの推奨に従って、ZIKV および TONV に固有のプローブとプライマーを使用して、Superscript One-Step RT-qPCR キット (Invitrogen ref: 11732088) を使用して、逆転写酵素にかけられます。