Evaluering av viral replikering av tonatvirus (TONV) og zikavirus (ZIKV), i en ex Vivo trofoblast- og placentamodell (ZITOPEx)
Studieoversikt
Status
Forhold
Detaljert beskrivelse
Analysen vil relatere for hvert virus studert + kontroll + favipiravir til 1 placenta i 1. trimester og 1 placenta ved termin.
2 eksperimenter per virus vil bli planlagt.
Studietype
Kontakter og plasseringer
Deltakelseskriterier
Kvalifikasjonskriterier
Alder som er kvalifisert for studier
Tar imot friske frivillige
Prøvetakingsmetode
Studiepopulasjon
Beskrivelse
Inklusjonskriterier:
- Pasient over 18 år
- Singleton graviditet av normalt forløp, ved termin, fødsel ved keisersnitt ELLER
- Trofoblast fra frivillig avbrudd av svangerskapet (IVG), etter endo-uterin aspirasjon
Ekskluderingskriterier:
- Behov for patologisk, genetisk eller bakteriologisk undersøkelse av morkaken
- Flergangsgraviditet
- HBV+ (hepatitt B-positiv), HCV+ (hepatitt C-positiv), kjent CMV-serokonversjon under graviditet (CytoMégaloVirus)
- Immunsuppresjon (medikamenter, kortikosteroider, etc.)
- Diabetes
- Preeklampsi
- Intrauterin veksthemming (IUGR),
- Vaskulær eller placenta patologi.
- Nekter å delta
- Pasient under vergemål / kurator / sikkerhetstiltak
- Pasient under AME (statlig medisinsk hjelpemiddel)
Studieplan
Hvordan er studiet utformet?
Designdetaljer
Kohorter og intervensjoner
Gruppe / Kohort |
Intervensjon / Behandling |
|---|---|
|
Menneskelige morkaker og trofoblaster (biologisk avfall) fra ukompliserte graviditeter.
Morkakene hentes etter fødsel ved keisersnitt etter muntlig og skriftlig informasjon ved levering av informasjonsskriv for kvinner som har hatt et normalt enslig svangerskap ved termin. Tilsvarende samles trofoblaster etter endo-uterin aspirasjon i sammenheng med frivillig avbrudd av svangerskapet.
|
C6/36-celler vil bli dyrket i L15-kulturmedium (Leibovitz sitt L-15-medium), supplert med 5 % FBS (Fetal Bovine Serum) og 1 % penicillin/streptomycin ved 28°C i en fuktet atmosfære inneholdende 5 % C02.
ZIKV og TONV vil bli utvidet og titrert ved bruk av C6/36-celler.
Den virale stammen vil bli delt opp i 100 µL alikvoter og lagret ved -80 °C.
Placentavev vil bli håndtert innen en time etter levering. Chorionvilli vil bli dissekert i 5 mm seksjoner og vevene vaskes rikelig, minimum 3 ganger med et standard dyrkningsmedium (RPMI-1640 supplert med 10 % varmeinaktivert føtalt kalveserum (FCS), 1 % L-glutamin og 1 % penicillin /Streptomycin) for å fjerne mors blod, membraner og blodpropp. Kollagengelsvamper vil bli plassert i 6-brønners platebrønner som inneholder 3mL kulturmedium (RPMI-1640 supplert med 15 % varmeinaktivert føtalt bovint serum (FCS), 1 % Penicillin/streptomycin, 0 1 % Gentamycin, 1 % Amfotericin B , 1 % L-glutamin, 1 % ikke-essensiell aminosyre, 1 % natriumpyruvat) per brønn. Chorionic villi vil bli dissekert i 5 mm seksjoner og plassert på toppen av kollagen gel svamper i grensesnittet mellom kulturmedium og luft. Vevene vil bli lysert ved mekanisk forstyrrelse i en lyseringsbuffer + 4% TCEP (Tris(2-karboksyetyl)fosfinhydroklorid) (Machery-Nagel ref: 740395.107) med Precellys-systemet. Det lyserte vevene vil bli fortynnet i 100 mg/ml Macherey-Nagel lyseringsbuffer, alikvotert og lagret ved -80°C frem til ekstraksjon. Totalt RNA vil bli ekstrahert i duplikat ved hjelp av Nucleospin 96 RNA Core-settet (Macherey Nagel ref: 740466.4), følge leverandørens anvisninger. Standardprøver, kontroller og ZIKV og TONV viralt RNA vil bli ekstrahert og testet parallelt under de samme forholdene. Det ekstraherte RNA vil bli utsatt for revers transkriptase, ved bruk av Superscript One-Step RT-qPCR-settet (Invitrogen ref: 11732088) i henhold til produsentens anbefalinger, med en probe og primer spesifikk for ZIKV og TONV. |
Hva måler studien?
Primære resultatmål
Resultatmål |
Tiltaksbeskrivelse |
Tidsramme |
|---|---|---|
|
For å vurdere replikasjonspotensialet til TONV og ZIKV etter placentainfeksjon ex vivo.
Tidsramme: inkludering
|
Bestem virusmengden (RT-qtPCR) av TONV og ZIKV etter placentainfeksjon, ex vivo i RNA-kopier/ml
|
inkludering
|
Sekundære resultatmål
Resultatmål |
Tiltaksbeskrivelse |
Tidsramme |
|---|---|---|
|
Valider ex vivo placentamodellen for TONV.
Tidsramme: Inkludering
|
Analyse av viral belastning i placentale eksplantater for TONV i RNA-kopier/ml
|
Inkludering
|
|
Sammenlign virusinfeksjon i morkaken ved forskjellige graviditetsperioder (første trimester og termin).
Tidsramme: første trimester
|
Analyse av virusmengden etter begrepet i RNA-kopier/ml
|
første trimester
|
|
Sammenlign virusinfeksjon i morkaken ved forskjellige graviditetsperioder (første trimester og termin).
Tidsramme: første trimester
|
Analyse av genuttrykk av de forskjellige cytokinene i henhold til begrepet i RNA-kopier/ml
|
første trimester
|
|
Sammenlign virusinfeksjon i morkaken ved forskjellige graviditetsperioder (første trimester og termin).
Tidsramme: første trimester
|
Analyse av de histologiske lesjonene etter begrepet i RNA-kopier/mL
|
første trimester
|
|
Sammenlign virusinfeksjon i morkaken ved forskjellige graviditetsperioder (første trimester og termin).
Tidsramme: begrep
|
Analyse av virusmengden etter begrepet i RNA-kopier/ml
|
begrep
|
|
Sammenlign placentainfeksjon av TONV versus ZIKV.
Tidsramme: inkludering
|
Analyse av viral belastning avhengig av viruset (ZIKV vs TONV) i RNA-kopier/ml
|
inkludering
|
|
Sammenlign placentainfeksjon av TONV versus ZIKV.
Tidsramme: inkludering
|
Analyse av genuttrykk av forskjellige cytokiner avhengig av viruset (ZIKV vs TONV) i RNA-kopier/mL
|
inkludering
|
|
Sammenlign placentainfeksjon av TONV versus ZIKV.
Tidsramme: inkludering
|
Analyse av histologiske lesjoner avhengig av viruset (ZIKV vs TONV) i RNA-kopier/ml
|
inkludering
|
|
Fremhev de cellulære målene til TONV.
Tidsramme: inkludering
|
Histologisk analyse og merking av TONV-celler i RNA-kopier/ml
|
inkludering
|
|
Fremhev de cellulære målene til TONV.
Tidsramme: inkludering
|
Histologisk analyse og merking av placentaceller i RNA-kopier/ml
|
inkludering
|
Samarbeidspartnere og etterforskere
Studierekorddatoer
Studer hoveddatoer
Studiestart (Antatt)
Primær fullføring (Antatt)
Studiet fullført (Antatt)
Datoer for studieregistrering
Først innsendt
Først innsendt som oppfylte QC-kriteriene
Først lagt ut (Faktiske)
Oppdateringer av studieposter
Sist oppdatering lagt ut (Faktiske)
Siste oppdatering sendt inn som oppfylte QC-kriteriene
Sist bekreftet
Mer informasjon
Begreper knyttet til denne studien
Nøkkelord
Ytterligere relevante MeSH-vilkår
Andre studie-ID-numre
- 2020-A01318-31
Plan for individuelle deltakerdata (IPD)
Planlegger du å dele individuelle deltakerdata (IPD)?
Legemiddel- og utstyrsinformasjon, studiedokumenter
Studerer et amerikansk FDA-regulert medikamentprodukt
Studerer et amerikansk FDA-regulert enhetsprodukt
Denne informasjonen ble hentet direkte fra nettstedet clinicaltrials.gov uten noen endringer. Hvis du har noen forespørsler om å endre, fjerne eller oppdatere studiedetaljene dine, vennligst kontakt register@clinicaltrials.gov. Så snart en endring er implementert på clinicaltrials.gov, vil denne også bli oppdatert automatisk på nettstedet vårt. .