Evaluatie van virale replicatie door tonatevirus (TONV) en zikavirus (ZIKV), binnen een ex vivo trofoblast- en placentamodel (ZITOPEx)
Studie Overzicht
Toestand
Conditie
Gedetailleerde beschrijving
De analyse zal voor elk bestudeerd virus + controle + favipiravir betrekking hebben op 1 placenta in het 1e trimester en 1 placenta op termijn.
Er worden 2 experimenten per virus gepland.
Studietype
Contacten en locaties
Deelname Criteria
Geschiktheidscriteria
Leeftijden die in aanmerking komen voor studie
Accepteert gezonde vrijwilligers
Bemonsteringsmethode
Studie Bevolking
Beschrijving
Inclusiecriteria:
- Patiënt ouder dan 18 jaar
- Eenlingzwangerschap normaal beloop, voldragen, bevalling via keizersnede OF
- Trofoblast van vrijwillige zwangerschapsafbreking (IVG), na endo-uteriene aspiratie
Uitsluitingscriteria:
- Behoefte aan pathologisch, genetisch of bacteriologisch onderzoek van de placenta
- Meerling zwangerschap
- HBV+ (Hepatitis B-positief), HCV+ (Hepatitis C-positief), bekende CMV-seroconversie tijdens de zwangerschap (CytoMégaloVirus)
- Immunosuppressie (medicijnen, corticosteroïden, etc.)
- suikerziekte
- Pre-eclampsie
- Intra-uteriene groeivertraging (IUGR),
- Vasculaire of placentale pathologie.
- Weigering om deel te nemen
- Patiënt onder curatele / curatele / beveiligingsmaatregel
- Patiënt onder AME (rijksgeneeskundige hulp)
Studie plan
Hoe is de studie opgezet?
Ontwerpdetails
Cohorten en interventies
Groep / Cohort |
Interventie / Behandeling |
|---|---|
|
Menselijke placenta's en trofoblasten (biologisch afval) van ongecompliceerde zwangerschappen.
De placenta's worden na een bevalling middels een keizersnede verzameld na mondelinge en schriftelijke informatie door afgifte van het informatieblad voor vrouwen die een voldragen eenlingzwangerschap hebben doorgemaakt. Evenzo worden trofoblasten verzameld na endo-uteriene aspiratie in het kader van vrijwillige zwangerschapsafbreking.
|
C6/36-cellen zullen worden gekweekt in L15-kweekmedium (Leibovitz's L-15-medium), aangevuld met 5% FBS (foetaal runderserum) en 1% penicilline/streptomycine bij 28°C in een bevochtigde atmosfeer die 5% C02 bevat.
ZIKV en TONV worden geëxpandeerd en getitreerd met behulp van C6/36-cellen.
De virale voorraad wordt verdeeld in porties van 100 µl en bewaard bij -80°C.
Placentaweefsels worden binnen een uur na levering behandeld. De chorionvilli worden ontleed in secties van 5 mm en de weefsels worden overvloedig gewassen, minimaal 3 keer met een standaard kweekmedium (RPMI-1640 aangevuld met 10% door warmte geïnactiveerd foetaal kalfsserum (FCS), 1% L-glutamine en 1% penicilline /streptomycine) om maternale bloed, vliezen en bloedstolsels te verwijderen. Collageengelsponzen worden in putjes met 6 putjes geplaatst die 3 ml kweekmedium bevatten (RPMI-1640 aangevuld met 15% door warmte geïnactiveerd foetaal runderserum (FCS), 1% penicilline/streptomycine, 0,1% gentamycine, 1% amfotericine B , 1% L-glutamine, 1% niet-essentieel aminozuur, 1% natriumpyruvaat) per putje. Chorionvilli worden ontleed in secties van 5 mm en bovenop collageengelsponzen geplaatst op het grensvlak tussen kweekmedium en lucht. De weefsels worden gelyseerd door mechanische verstoring in een lysisbuffer + 4% TCEP (Tris(2-carboxyethyl)fosfinehydrochloride) (Machery-Nagel ref: 740395.107) met het Precellys-systeem. De gelyseerde weefsels worden verdund in 100 mg/ml Macherey-Nagel lysisbuffer, verdeeld in porties en bewaard bij -80°C tot extractie. Totaal RNA zal in tweevoud worden geëxtraheerd met behulp van de Nucleospin 96 RNA Core-kit (Macherey Nagel ref: 740466.4), volgens de instructies van de leverancier. Standaardmonsters, controles en ZIKV- en TONV-viraal RNA zullen onder dezelfde omstandigheden parallel worden geëxtraheerd en getest. Het geëxtraheerde RNA zal worden onderworpen aan reverse transcriptase, met behulp van de Superscript One-Step RT-qPCR-kit (Invitrogen ref: 11732088) volgens de aanbevelingen van de fabrikant, met een sonde en primer die specifiek zijn voor ZIKV en TONV. |
Wat meet het onderzoek?
Primaire uitkomstmaten
Uitkomstmaat |
Maatregel Beschrijving |
Tijdsspanne |
|---|---|---|
|
Om het replicatiepotentieel van TONV en ZIKV na placenta-infectie ex vivo te beoordelen.
Tijdsspanne: opname
|
Bepaal de virale belasting (RT-qtPCR) van TONV en ZIKV na placenta-infectie, ex vivo in RNA-kopieën/ml
|
opname
|
Secundaire uitkomstmaten
Uitkomstmaat |
Maatregel Beschrijving |
Tijdsspanne |
|---|---|---|
|
Valideer het ex vivo placenta-model voor TONV.
Tijdsspanne: Opname
|
Analyse van virale belasting in placenta-explantaten voor TONV in RNA-kopieën/ml
|
Opname
|
|
Vergelijk virale infectie van de placenta bij verschillende zwangerschapsduur (eerste trimester en termijn).
Tijdsspanne: eerste trimester
|
Analyse van de virale belasting volgens de term in RNA-kopieën/ml
|
eerste trimester
|
|
Vergelijk virale infectie van de placenta bij verschillende zwangerschapsduur (eerste trimester en termijn).
Tijdsspanne: eerste trimester
|
Analyse van genexpressie van de verschillende cytokines volgens de term in RNA-kopieën/ml
|
eerste trimester
|
|
Vergelijk virale infectie van de placenta bij verschillende zwangerschapsduur (eerste trimester en termijn).
Tijdsspanne: eerste trimester
|
Analyse van de histologische laesies volgens de term in RNA-kopieën/ml
|
eerste trimester
|
|
Vergelijk virale infectie van de placenta bij verschillende zwangerschapsduur (eerste trimester en termijn).
Tijdsspanne: termijn
|
Analyse van de virale belasting volgens de term in RNA-kopieën/ml
|
termijn
|
|
Vergelijk de placenta-infectie van TONV versus ZIKV.
Tijdsspanne: opname
|
Analyse van virale belasting afhankelijk van het virus (ZIKV vs TONV) in RNA-kopieën/ml
|
opname
|
|
Vergelijk de placenta-infectie van TONV versus ZIKV.
Tijdsspanne: opname
|
Analyse van genexpressie van verschillende cytokines afhankelijk van het virus (ZIKV vs TONV) in RNA-kopieën/ml
|
opname
|
|
Vergelijk de placenta-infectie van TONV versus ZIKV.
Tijdsspanne: opname
|
Analyse van histologische laesies afhankelijk van het virus (ZIKV versus TONV) in RNA-kopieën/ml
|
opname
|
|
Markeer de cellulaire doelen van TONV.
Tijdsspanne: opname
|
Histologische analyse en labeling van TONV-cellen in RNA-kopieën/ml
|
opname
|
|
Markeer de cellulaire doelen van TONV.
Tijdsspanne: opname
|
Histologische analyse en labeling van placentacellen in RNA-kopieën/ml
|
opname
|
Medewerkers en onderzoekers
Studie record data
Bestudeer belangrijke data
Studie start (Geschat)
Primaire voltooiing (Geschat)
Studie voltooiing (Geschat)
Studieregistratiedata
Eerst ingediend
Eerst ingediend dat voldeed aan de QC-criteria
Eerst geplaatst (Werkelijk)
Updates van studierecords
Laatste update geplaatst (Werkelijk)
Laatste update ingediend die voldeed aan QC-criteria
Laatst geverifieerd
Meer informatie
Termen gerelateerd aan deze studie
Trefwoorden
Aanvullende relevante MeSH-voorwaarden
Andere studie-ID-nummers
- 2020-A01318-31
Plan Individuele Deelnemersgegevens (IPD)
Bent u van plan om gegevens van individuele deelnemers (IPD) te delen?
Informatie over medicijnen en apparaten, studiedocumenten
Bestudeert een door de Amerikaanse FDA gereguleerd geneesmiddel
Bestudeert een door de Amerikaanse FDA gereguleerd apparaatproduct
Deze informatie is zonder wijzigingen rechtstreeks van de website clinicaltrials.gov gehaald. Als u verzoeken heeft om uw onderzoeksgegevens te wijzigen, te verwijderen of bij te werken, neem dan contact op met register@clinicaltrials.gov. Zodra er een wijziging wordt doorgevoerd op clinicaltrials.gov, wordt deze ook automatisch bijgewerkt op onze website .