Viruksen replikaation arviointi Tonate-viruksen (TONV) ja Zika-viruksen (ZIKV) toimesta ex Vivo Trophoblast- ja Placental -mallissa (ZITOPEx)
Tutkimuksen yleiskatsaus
Tila
Ehdot
Yksityiskohtainen kuvaus
Analyysi koskee jokaista tutkittua virusta + kontrollia + favipiraviiria 1 istukassa ensimmäisen raskauskolmanneksen aikana ja 1 istukan aikana.
Virusta kohden suunnitellaan 2 koetta.
Opintotyyppi
Yhteystiedot ja paikat
Osallistumiskriteerit
Kelpoisuusvaatimukset
Opintokelpoiset iät
Hyväksyy terveitä vapaaehtoisia
Näytteenottomenetelmä
Tutkimusväestö
Kuvaus
Sisällyttämiskriteerit:
- Yli 18-vuotias potilas
- Yksittäinen raskaus normaalin kulun aikana, synnytys keisarinleikkauksella TAI
- Trofoblasti vapaaehtoisesta raskauden keskeytyksestä (IVG) kohdunsisäisen aspiraation jälkeen
Poissulkemiskriteerit:
- Istukan patologisen, geneettisen tai bakteriologisen tutkimuksen tarve
- Moniraskaus
- HBV+ (hepatiitti B positiivinen), HCV+ (hepatiitti C positiivinen), tunnettu CMV serokonversio raskauden aikana (CytoMégaloVirus)
- Immunosuppressio (lääkkeet, kortikosteroidit jne.)
- Diabetes
- Preeklampsia
- Kohdunsisäinen kasvun hidastuminen (IUGR),
- Verisuonten tai istukan patologia.
- Kieltäytyminen osallistumasta
- Potilas holhouksen/huollon/turvatoimen alaisena
- AME-potilas (valtion lääkeapu)
Opintosuunnitelma
Miten tutkimus on suunniteltu?
Suunnittelun yksityiskohdat
Kohortit ja interventiot
Ryhmä/Kohortti |
Interventio / Hoito |
|---|---|
|
Ihmisen istukka ja trofoblastit (biologiset jätteet) komplisoitumattomista raskauksista.
Istukat kerätään synnytyksen jälkeen keisarinleikkauksella suullisen ja kirjallisen tiedon jälkeen toimittamalla tiedote niille naisille, joilla on ollut normaali yksittäinen raskaus. Samoin trofoblastit kerätään kohdunsisäisen aspiraation jälkeen vapaaehtoisen raskauden keskeytyksen yhteydessä.
|
C6/36-soluja viljellään L15-viljelyalustassa (Leibovitzin L-15-elatusaine), jota on täydennetty 5 % FBS:llä (Fetal Bovine Serum) ja 1 % penisilliini/streptomysiinillä 28 °C:ssa kosteassa ilmakehässä, joka sisältää 5 % C02:ta.
ZIKV ja TONV laajennetaan ja titrataan C6/36-kennoilla.
Virusvarasto jaetaan 100 ul:n eriin ja säilytetään -80 °C:ssa.
Istukan kudokset käsitellään tunnin sisällä synnytyksestä. Korionvilli leikataan 5 mm:n osiksi ja kudokset pestään runsaasti, vähintään 3 kertaa tavallisella viljelyväliaineella (RPMI-1640, jota on täydennetty 10 % lämpöinaktivoidulla vasikansikiön seerumilla (FCS), 1 % L-glutamiinilla ja 1 % penisilliinillä /Streptomysiini) äidin veren, kalvojen ja verihyytymien poistamiseen. Kollageenigeelisienet asetetaan 6-kuoppalevyn kuoppiin, jotka sisältävät 3 ml viljelyalustaa (RPMI-1640 täydennettynä 15 % lämpöinaktivoidulla naudan sikiön seerumilla (FCS), 1 % penisilliini/streptomysiini, 0 1 % gentamysiini, 1 % amfoterisiini B , 1 % L-glutamiinia, 1 % ei-välttämätöntä aminohappoa, 1 % natriumpyruvaattia) kuoppaa kohti. Korionvillit leikataan 5 mm:n osiin ja asetetaan kollageenigeelisienien päälle viljelyalustan ja ilman väliseen rajapintaan. Kudokset hajotetaan mekaanisesti hajottamalla lyysipuskurissa + 4 % TCEP (tris(2-karboksietyyli)fosfiinihydrokloridi) (Machery-Nagel viite: 740395.107) Precellys-järjestelmän kanssa. Lyysatut kudokset laimennetaan 100 mg/ml Macherey-Nagel-lyysipuskuria, jaetaan eriin ja säilytetään -80 °C:ssa uuttamiseen asti. Kokonais-RNA uutetaan kahtena kappaleena käyttämällä Nucleospin 96 RNA Core -pakkausta (Macherey Nagel viite: 740466.4), toimittajan ohjeita noudattaen. Vakionäytteet, kontrollit ja ZIKV- ja TONV-virus-RNA uutetaan ja testataan rinnakkain samoissa olosuhteissa. Uutettu RNA altistetaan käänteiskopioijalle käyttämällä Superscript One-Step RT-qPCR -kittiä (Invitrogen viite: 11732088) valmistajan suositusten mukaisesti ZIKV- ja TONV-spesifisellä koettimella ja alukkeella. |
Mitä tutkimuksessa mitataan?
Ensisijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
TONV:n ja ZIKV:n replikaatiopotentiaalin arvioimiseksi istukan infektion jälkeen ex vivo.
Aikaikkuna: sisällyttäminen
|
Määritä TONV:n ja ZIKV:n viruskuorma (RT-qtPCR) istukan infektion jälkeen ex vivo RNA-kopioina/ml
|
sisällyttäminen
|
Toissijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
Vahvista ex vivo istukkamalli TONV:lle.
Aikaikkuna: Inkluusio
|
Istukan eksplanttien viruskuorman analyysi TONV:n varalta RNA-kopioina/ml
|
Inkluusio
|
|
Vertaa istukan virusinfektiota eri raskausaikoina (ensimmäinen kolmannes ja raskausaika).
Aikaikkuna: ensimmäinen kolmannes
|
Viruskuorman analyysi termin mukaan RNA-kopioina/ml
|
ensimmäinen kolmannes
|
|
Vertaa istukan virusinfektiota eri raskausaikoina (ensimmäinen kolmannes ja raskausaika).
Aikaikkuna: ensimmäinen kolmannes
|
Eri sytokiinien geeniekspression analyysi termin mukaan RNA-kopioina/ml
|
ensimmäinen kolmannes
|
|
Vertaa istukan virusinfektiota eri raskausaikoina (ensimmäinen kolmannes ja raskausaika).
Aikaikkuna: ensimmäinen kolmannes
|
Histologisten leesioiden analyysi termin mukaan RNA-kopioina/ml
|
ensimmäinen kolmannes
|
|
Vertaa istukan virusinfektiota eri raskausaikoina (ensimmäinen kolmannes ja raskausaika).
Aikaikkuna: termi
|
Viruskuorman analyysi termin mukaan RNA-kopioina/ml
|
termi
|
|
Vertaa TONV:n istukan infektiota ZIKV:hen.
Aikaikkuna: sisällyttäminen
|
Viruskuorman analyysi viruksesta riippuen (ZIKV vs TONV) RNA-kopioina/ml
|
sisällyttäminen
|
|
Vertaa TONV:n istukan infektiota ZIKV:hen.
Aikaikkuna: sisällyttäminen
|
Eri sytokiinien geeniekspression analyysi viruksesta riippuen (ZIKV vs TONV) RNA-kopioina/ml
|
sisällyttäminen
|
|
Vertaa TONV:n istukan infektiota ZIKV:hen.
Aikaikkuna: sisällyttäminen
|
Histologisten leesioiden analyysi viruksesta riippuen (ZIKV vs TONV) RNA-kopioina/ml
|
sisällyttäminen
|
|
Korosta TONV:n solukohteita.
Aikaikkuna: sisällyttäminen
|
TONV-solujen histologinen analyysi ja leimaus RNA-kopioina/ml
|
sisällyttäminen
|
|
Korosta TONV:n solukohteita.
Aikaikkuna: sisällyttäminen
|
Istukan solujen histologinen analyysi ja leimaus RNA-kopioina/ml
|
sisällyttäminen
|
Yhteistyökumppanit ja tutkijat
Opintojen ennätyspäivät
Opi tärkeimmät päivämäärät
Opiskelun aloitus (Arvioitu)
Ensisijainen valmistuminen (Arvioitu)
Opintojen valmistuminen (Arvioitu)
Opintoihin ilmoittautumispäivät
Ensimmäinen lähetetty
Ensimmäinen toimitettu, joka täytti QC-kriteerit
Ensimmäinen Lähetetty (Todellinen)
Tutkimustietojen päivitykset
Viimeisin päivitys julkaistu (Todellinen)
Viimeisin lähetetty päivitys, joka täytti QC-kriteerit
Viimeksi vahvistettu
Lisää tietoa
Tähän tutkimukseen liittyvät termit
Avainsanat
Muita asiaankuuluvia MeSH-ehtoja
Muut tutkimustunnusnumerot
- 2020-A01318-31
Yksittäisten osallistujien tietojen suunnitelma (IPD)
Aiotko jakaa yksittäisten osallistujien tietoja (IPD)?
Lääke- ja laitetiedot, tutkimusasiakirjat
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää lääkevalmistetta
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää laitetuotetta
Nämä tiedot haettiin suoraan verkkosivustolta clinicaltrials.gov ilman muutoksia. Jos sinulla on pyyntöjä muuttaa, poistaa tai päivittää tutkimustietojasi, ota yhteyttä register@clinicaltrials.gov. Heti kun muutos on otettu käyttöön osoitteessa clinicaltrials.gov, se päivitetään automaattisesti myös verkkosivustollemme .