Оценка репликации вируса тонатным вирусом (TONV) и вирусом Зика (ZIKV) в модели трофобласта и плаценты ex Vivo (ZITOPEx)
Обзор исследования
Статус
Условия
Подробное описание
Анализ будет относиться для каждого изучаемого вируса + контроль + фавипиравир к 1 плаценте в 1-м триместре и 1 плаценте в сроке.
Будет запланировано 2 эксперимента на каждый вирус.
Тип исследования
Контакты и местонахождение
Критерии участия
Критерии приемлемости
Возраст, подходящий для обучения
Принимает здоровых добровольцев
Метод выборки
Исследуемая популяция
Описание
Критерии включения:
- Пациент старше 18 лет
- Одноплодная беременность нормального течения, в срок, роды путем кесарева сечения ИЛИ
- Трофобласт от добровольного прерывания беременности (IVG) после внутриматочной аспирации
Критерий исключения:
- Необходимость патологоанатомического, генетического или бактериологического исследования плаценты
- Многоплодная беременность
- HBV+ (положительный гепатит B), HCV+ (положительный гепатит C), известная сероконверсия ЦМВ во время беременности (CytoMégaloVirus)
- Иммуносупрессия (лекарственные препараты, кортикостероиды и др.)
- Диабет
- Преэклампсия
- задержка внутриутробного развития (ЗВУР),
- Сосудистая или плацентарная патология.
- Отказ от участия
- Пациент под опекой / попечительством / мерой безопасности
- Пациент по ОМС (государственная медицинская помощь)
Учебный план
Как устроено исследование?
Детали дизайна
Когорты и вмешательства
Группа / когорта |
Вмешательство/лечение |
|---|---|
|
Человеческие плаценты и трофобласты (биологические отходы) от неосложненных беременностей.
Плаценты будут собраны после родов путем кесарева сечения после устной и письменной информации путем вручения информационной записки для женщин, у которых была нормальная одноплодная беременность в срок. Точно так же трофобласты собираются после внутриматочной аспирации в контексте добровольного прерывания беременности.
|
Клетки C6/36 будут культивировать в культуральной среде L15 (среда Лейбовица L-15), дополненной 5% FBS (эмбриональной бычьей сывороткой) и 1% пенициллином/стрептомицином, при 28°C во влажной атмосфере, содержащей 5% CO2.
ZIKV и TONV будут расширены и оттитрованы с использованием клеток C6/36.
Вирусный запас будет разделен на аликвоты по 100 мкл и будет храниться при температуре -80°C.
Плацентарные ткани будут обработаны в течение одного часа после родов. Ворсинки хориона рассекают на срезы по 5 мм, а ткани обильно промывают, минимум 3 раза, стандартной культуральной средой (RPMI-1640 с добавлением 10% термоинактивированной фетальной телячьей сыворотки (FCS), 1% L-глютамина и 1% пенициллина). /Streptomycin) для удаления материнской крови, мембран и тромбов. Губки с коллагеновым гелем помещают в 6-луночные лунки планшета, содержащие 3 мл культуральной среды (RPMI-1640 с добавлением 15% инактивированной нагреванием эмбриональной телячьей сыворотки (FCS), 1% пенициллина/стрептомицина, 0,1% гентамицина, 1% амфотерицина B). , 1% L-глутамина, 1% заменимых аминокислот, 1% пирувата натрия) на лунку. Ворсинки хориона разрезают на срезы по 5 мм и помещают поверх губок с коллагеновым гелем на границе между культуральной средой и воздухом. Ткани будут лизироваться механическим разрушением в лизирующем буфере + 4% TCEP (трис(2-карбоксиэтил)фосфингидрохлорид) (Machery-Nagel ref: 740395.107) с системой Precellys. Лизированные ткани будут разбавлены в 100 мг/мл буфера для лизиса Машери-Нагеля, разделены на аликвоты и сохранены при -80°C до экстракции. Общая РНК будет извлечена в двух повторах с использованием набора Nucleospin 96 RNA Core (Macherey Nagel ref: 740466.4), следуя инструкциям поставщика. Стандартные образцы, контроли и вирусная РНК ZIKV и TONV будут извлечены и протестированы параллельно в тех же условиях. Выделенную РНК подвергают обратной транскриптазе с использованием набора Superscript One-Step RT-qPCR kit (Invitrogen ref: 11732088) в соответствии с рекомендациями производителя, с зондом и праймером, специфичным для ZIKV и TONV. |
Что измеряет исследование?
Первичные показатели результатов
Мера результата |
Мера Описание |
Временное ограничение |
|---|---|---|
|
Оценить репликационный потенциал TONV и ZIKV после инфицирования плаценты ex vivo.
Временное ограничение: включение
|
Определите вирусную нагрузку (RT-qtPCR) TONV и ZIKV после инфицирования плаценты ex vivo в копиях РНК/мл
|
включение
|
Вторичные показатели результатов
Мера результата |
Мера Описание |
Временное ограничение |
|---|---|---|
|
Подтвердите ex vivo плацентарную модель для TONV.
Временное ограничение: Включение
|
Анализ вирусной нагрузки в эксплантатах плаценты на TONV в копиях РНК/мл
|
Включение
|
|
Сравните вирусную инфекцию плаценты на разных сроках беременности (первый триместр и доношенная).
Временное ограничение: первый триместр
|
Анализ вирусной нагрузки по срокам в копиях РНК/мл
|
первый триместр
|
|
Сравните вирусную инфекцию плаценты на разных сроках беременности (первый триместр и доношенная).
Временное ограничение: первый триместр
|
Анализ экспрессии генов различных цитокинов в зависимости от количества копий РНК/мл
|
первый триместр
|
|
Сравните вирусную инфекцию плаценты на разных сроках беременности (первый триместр и доношенная).
Временное ограничение: первый триместр
|
Анализ гистологических поражений по срокам в копиях РНК/мл
|
первый триместр
|
|
Сравните вирусную инфекцию плаценты на разных сроках беременности (первый триместр и доношенная).
Временное ограничение: срок
|
Анализ вирусной нагрузки по срокам в копиях РНК/мл
|
срок
|
|
Сравните плацентарную инфекцию TONV и ZIKV.
Временное ограничение: включение
|
Анализ вирусной нагрузки в зависимости от вируса (ZIKV vs TONV) в копиях РНК/мл
|
включение
|
|
Сравните плацентарную инфекцию TONV и ZIKV.
Временное ограничение: включение
|
Анализ экспрессии генов различных цитокинов в зависимости от вируса (ZIKV vs TONV) в копиях РНК/мл
|
включение
|
|
Сравните плацентарную инфекцию TONV и ZIKV.
Временное ограничение: включение
|
Анализ гистологических поражений в зависимости от вируса (ZIKV vs TONV) в копиях РНК/мл
|
включение
|
|
Выделите сотовые цели TONV.
Временное ограничение: включение
|
Гистологический анализ и маркировка клеток TONV в копиях РНК/мл
|
включение
|
|
Выделите сотовые цели TONV.
Временное ограничение: включение
|
Гистологический анализ и мечение клеток плаценты в копиях РНК/мл
|
включение
|
Соавторы и исследователи
Даты записи исследования
Изучение основных дат
Начало исследования (Оцененный)
Первичное завершение (Оцененный)
Завершение исследования (Оцененный)
Даты регистрации исследования
Первый отправленный
Впервые представлено, что соответствует критериям контроля качества
Первый опубликованный (Действительный)
Обновления учебных записей
Последнее опубликованное обновление (Действительный)
Последнее отправленное обновление, отвечающее критериям контроля качества
Последняя проверка
Дополнительная информация
Термины, связанные с этим исследованием
Ключевые слова
Дополнительные соответствующие термины MeSH
Другие идентификационные номера исследования
- 2020-A01318-31
Планирование данных отдельных участников (IPD)
Планируете делиться данными об отдельных участниках (IPD)?
Информация о лекарствах и устройствах, исследовательские документы
Изучает лекарственный продукт, регулируемый FDA США.
Изучает продукт устройства, регулируемый Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США.
Эта информация была получена непосредственно с веб-сайта clinicaltrials.gov без каких-либо изменений. Если у вас есть запросы на изменение, удаление или обновление сведений об исследовании, обращайтесь по адресу register@clinicaltrials.gov. Как только изменение будет реализовано на clinicaltrials.gov, оно будет автоматически обновлено и на нашем веб-сайте. .