Frekvence polymorfismů genu FCGR3A u pacientů s poruchami spektra neuromyelitis optica, anti-oligodendrocyty myelinové proteinové onemocnění a roztroušené sklerózy. (PoGe)

Receptory FCG (FCGR) jsou proteiny exprimované různými imunitními buňkami, které se vážou na část Imunoglobulinu G (IgG). Hrají klíčovou roli v vrozené a adaptivní imunitě, regulují zánětlivé reakce a zabraňují autoimunity. Genetické studie ukázaly, že změny genů FCGR mohou tyto funkce ovlivnit, měnit kapacitu fagocytózy a zánětlivou odpověď.

Jedním zvláště relevantním polymorfismem je SNP RS396991 v genu FCGR3A, který kóduje receptor exprimovaný na NK buňkách, monocytech a makrofázích. Tento SNP způsobuje substituci aminokyseliny fenylalaninu (F) valinem (V) v poloze 158, což modifikuje afinitu receptoru k IgG. Varianta 158V je spojena se zvýšenou zánětlivou odpovědí, zatímco 158F je spojena se sníženou clearance imunitního komplexu, což přispívá k patogenezi autoimunitních onemocnění, jako je lupus, revmatoidní artritida a sarkoidóza.

Neuromyelitis Optica Spectrum Disorder (NMOSD) a myelinový oligodendrocyt glykoproteinový protilátkový onemocnění (MOGAD) jsou dvě zánětlivé poruchy centrálního nervového systému, často závažné a opakující se. NMOSD je charakterizován autoprotilátky proti aquaporinu-4 (AQP4), zatímco MOGAD je spojen s autoprotilátky proti Glykoproteinu MOG. V současné době neexistují žádné údaje o frekvenci polymorfismu RS396991 v italské populaci postižené těmito nemocemi.

Primárním cílem této studie je posoudit frekvenci genetického polymorfismu FCGR3A-V158F u kohorty italských pacientů postižených NMOSD a MOGAD. Zahrnuta bude také srovnávací skupina složená z pacientů s diagnostikovanou roztroušenou sklerózou (MS).

Studie bude zahrnovat dospělé pacienty s diagnózou MS, NMOSD nebo MOGADu a péče v různých klinických centrech v oblasti Lazio. Budou vybráni pacienti z zúčastněných klinických center a jejich lékařské záznamy, jak založené na papírech, tak digitální, budou přezkoumány sběr klinických a neuroimagingových údajů. Tato data budou organizována v databázi Excelu a budou zahrnovat informace, jako je věk, pohlaví, etnické pozadí, index tělesné hmotnosti, stav kouření, přítomnost dalších autoimunitních onemocnění a neurologické komorbidity. Další zaznamenané informace budou zahrnovat diagnózu (NMOSD, MS nebo MOGAD), věk při nástupu onemocnění, doba trvání nemoci, stav protilátek (AQP4 +/- a MOG +/-), předchozí terapie modifikující onemocnění a jejich trvání, jakož i údaje o MRI a skóre statusu postižení (EDSS).

Pro genetickou analýzu bude každý pacient zahrnutý do studie podrobit krevnímu odběru přibližně 5 ml periferní žilní krve (shromážděné v EDTA) během rutinních krevních testů. Vzorek bude použit pro extrakci DNA, po podepsaném informovaném souhlasu pacienta. Genetická vyšetřování bude prováděna v sekci genomické medicíny Ministerstva života a veřejného zdraví na Università Cattolica del Sacro Cuore v Římě. Vzorky DNA budou uloženy anonymně po dobu až 10 let od začátku projektu, přičemž přístup je omezen na oprávněný personál. Pacienti nebo jejich rodiny mohou kdykoli požádat o zničení své DNA.

Bude přijato celkem 50 pacientů s 12měsíční dobou zápisu a celkovou dobou trvání studie 24 měsíců. Sekundárním cílem je identifikovat potenciální rozdíly v klinických charakteristikách pacientů s NMOSD a MOGAD, kteří exprimují polymorfismus ve srovnání s těmi, kteří tak neučiní.

Genetické analýzy budou prováděny v části genomické medicíny, ministerstva života a veřejného zdraví, Università Cattolica del Sacro Cuore (Řím). Extrahovaná DNA bude uložena anonymně s alfanumerickým kódem po dobu maximálně 10 let od data zahájení projektu ve stejné instituci. Přístup k vzorkům a údajům bude mít pouze omezený počet oprávněných pracovníků, s výhradou schválení hlavního vyšetřovatele (Prof. Massimiliano Mirabella). Pokud je to požádáno pacientem nebo jejich rodinou, může být DNA kdykoli zničena.

Extrakce DNA bude prováděna pomocí soupravy pro izolaci genomické DNA z průvodce (Promega) a kvantifikováno pomocí spektrofotometru (Thermo Fisher) a agarózové gelové elektroforézy. Detekce polymorfismu RS396991 v genu FCGR3A u pacientů s NMOSD, MS a MOGAD bude provedena pomocí Sangerova sekvenování a využívající primery popsané Mahaweni et al. (14).

Přítomnost variabilních oblastí čísel kopírování (CNR) v genu FCGR3A bude hodnocena pomocí MLPA (MRC Holland) a bude vyhrazena pouze pro pacienty, kteří testují negativní polymorfismus RS396991 pomocí Sangerovy metody.