Częstotliwość polimorfizmów genów FCGR3A u pacjentów z zaburzeniami spektrum zapalenia neuromyelitowego, chorobą przeciwciała białka mielinowego przeciw oligodendrocytowej i stwardnienie rozsianego. (PoGe)

Receptory FCG (FCGR) to białka wyrażane przez różne komórki odpornościowe, które wiążą się z częścią FC immunoglobuliny G (IgG). Odgrywają kluczową rolę w wrodzonej i adaptacyjnej odporności, regulując odpowiedzi zapalne i zapobiegając autoimmunizacji. Badania genetyczne wykazały, że zmiany genów FCGR mogą wpływać na te funkcje, zmieniając zdolność fagocytozy i odpowiedź zapalną.

Jednym szczególnie istotnym polimorfizmem jest SNP RS396991 w genie FCGR3A, który koduje receptor wyrażany na komórkach NK, monocytach i makrofagach. Ten SNP powoduje zastąpienie aminokwasu fenyloalaniny (F) valiną (V) w pozycji 158, modyfikując powinowactwo receptora do IgG. Wariant 158V jest związany z zwiększoną odpowiedzią zapalną, podczas gdy 158F jest powiązany ze zmniejszonym klirensem kompleksu immunologicznym, przyczyniając się do patogenezy chorób autoimmunologicznych, takich jak toczeń, reumatoidalne zapalenie stawów i sarkoidoza.

Zaburzenie zapalenia neuromyelitowego Optica Spectrum (NMOSD) i choroba związana z glikoproteiną glikoprotrocytową mieliny (MOGAD) to dwa zaburzenia zapalne ośrodkowego układu nerwowego, często ciężkie i nawracające. NMOSD charakteryzuje się autoprzeciwciałami przeciwko akwaporynie-4 (AQP4), podczas gdy Mogad jest związany z autoprzeciwciałami przeciwko glikoproteinowi MOG. Obecnie nie ma danych na temat częstotliwości polimorfizmu RS396991 we włoskiej populacji dotkniętych tymi chorobami.

Głównym celem tego badania jest ocena częstotliwości polimorfizmu genetycznego FCGR3A-V158F w kohorcie włoskich pacjentów dotkniętych NMOSD i MOGAD. Uwzględniono również grupę porównawczą złożoną z pacjentów ze zdiagnozowanym stwardnieniem rozsianym (MS).

W badaniu wzięło udział dorosłych pacjentów, u których zdiagnozowano MS, NMOSD lub MOGAD, otrzymując opiekę w różnych ośrodkach klinicznych w regionie Lazio. Pacjenci z uczestniczących centrów klinicznych zostaną wybrani, a ich dokumentacja medyczna, zarówno papierowa, jak i cyfrowa, zostaną przeanalizowani w celu zebrania danych klinicznych i neuroobrazowych. Dane te będą zorganizowane w bazie danych Excel i będą zawierać informacje takie jak wiek, płeć, pochodzenie etniczne, wskaźnik masy ciała, status palenia, obecność innych chorób autoimmunologicznych i współistniejące nieneurologiczne. Dodatkowe zarejestrowane informacje będą obejmować diagnozę (NMOSD, MS lub MOGAD), wiek na początku choroby, czas trwania choroby, status przeciwciał (AQP4 +/- i MOG +/-), wcześniejsze terapie modyfikujące chorobę i ich czas trwania, a także dane MRI i rozszerzone wyniki w skali statusu niepełnosprawności (EDS).

W przypadku analizy genetycznej każdy pacjent objęty badaniem przejdzie przyciąganie krwi o około 5 ml krwi obwodowej (zebrane w EDTA) podczas rutynowych badań krwi. Próbka zostanie wykorzystana do ekstrakcji DNA, po podpisanej świadomej zgody pacjenta. Badania genetyczne zostaną przeprowadzone w sekcji medycyny genomowej Departamentu Nauk Przyrodniczych i Zdrowia Publicznego na Università Cattolica del Sacro Cuore w Rzymie. Próbki DNA będą przechowywane anonimowo przez okres do 10 lat od początku projektu, a dostęp jest ograniczony do upoważnionego personelu. Pacjenci lub ich rodziny mogą w dowolnym momencie poprosić o zniszczenie DNA.

W sumie rekrutowano 50 pacjentów, z 12-miesięcznym okresem rejestracji i całkowitym okresem badania 24 miesięcy. Drugim celem jest określenie potencjalnych różnic w cechach klinicznych pacjentów z NMOSD i MOGAD, którzy wyrażają polimorfizm w porównaniu z tymi, którzy tego nie robią.

Analizy genetyczne zostaną przeprowadzone w części medycyny genomowej, Departamentu Nauk o Życie i Zdrowia Publicznego, Università Cattolika del Sacro Cuore (ROME). Wyodrębnione DNA będzie przechowywane anonimowo z kodeksem alfanumerycznym przez maksymalnie 10 lat od daty rozpoczęcia projektu w tej samej instytucji. Tylko ograniczona liczba upoważnionego personelu będzie miała dostęp do próbek i danych, z zastrzeżeniem zatwierdzenia głównego badacza (prof. Massimiliano Mirabella). Na żądanie pacjenta lub jego rodziny DNA można zniszczyć w dowolnym momencie.

Ekstrakcja DNA zostanie wykonana przy użyciu zestawu izolacji genomowego DNA Wizard (Promega) i określono ilościowo za pomocą spektrofotometru (Thermo Fisher) i elektroforezy żelu agarozowego. Wykrywanie polimorfizmu RS396991 w genie FCGR3A u pacjentów z NMOSD, MS i MOGAD zostanie przeprowadzone przy użyciu sekwencjonowania Sanger, wykorzystując startery opisane przez Mahaweni i in. (14).

Obecność regionów zmiennych liczb kopii (CNR) w genie FCGR3A będzie oceniana za pomocą MLPA (MRC Holland) i będzie zarezerwowana tylko dla pacjentów, którzy testują ujemne dla polimorfizmu RS396991 przy użyciu metody Sanger.