Diagnostisk værdi af knoglemarvstryptase i systemisk mastocytose (EvaTryMS)

Mastocytose er en gruppe af lidelser karakteriseret ved klonal ophobning af mastceller i forskellige organer. Diagnose af mastocytose er udfordrende, og patienter forbliver udiagnosticerede i årevis. Ved at bruge de diagnostiske kriterier defineret af Verdenssundhedsorganisationen (WHO) kan mastocytose opdeles mellem kutan mastocytose (CM) og systemisk mastocytose (SM).

Undersøgelse antydede, at måling af tryptase i plasma fra et knoglemarvsaspirat (fra BMA) kunne være nyttigt til diagnosticering af SM. Resultater fra en foreløbig undersøgelse på Toulouse University Hospital antydede, at et knoglemarvstryptaseniveau (MT) på 50 µg/L eller mere kan være et mere følsomt diagnostisk kriterium (følsomhed på 94,7%) end det histologiske resultat af BMB (det vigtigste diagnostiske kriterium) for SM med en følsomhed på 68 til 80 % i ekspertcentre) til diagnosticering af SM hos patienter med mastocytose i huden.

Fordi denne foreløbige undersøgelse blev udført på et begrænset antal patienter og i et enkelt center, skal den diagnostiske værdi af MT til diagnosticering af SM bekræftes på en større og mere repræsentativ population.

Derudover foreslår efterforskerne at evaluere:

• Den diagnostiske nøjagtighed af MT til diagnose af SM hos patienter uden mastocytose i huden;
• Den diagnostiske nøjagtighed af absolut og korrigeret MT til diagnose af SM med og uden mastocytose i huden;
• Den diagnostiske nøjagtighed af MT/ST-forhold til diagnose af SM med og uden mastocytose i huden;
• Den diagnostiske nøjagtighed af flowcytometri udført på celler opsamlet af BMA og vedligeholdt i en konserverende opløsning til diagnose af SM med og uden mastocytose i huden;
• Den diagnostiske nøjagtighed af kvantificering af fraktionen af ​​KIT-mutationspositive celler i perifert blod til diagnose af SM med og uden mastocytose i hud;
• Korrelation af resultaterne af kvantificering af fraktionen af ​​KIT-mutationspositive celler i perifert blod med resultater af MT-niveau, resultater af MT/ST-forhold og resultater af absolut og korrigeret MT;
• Korrelation af resultaterne af CF udført både på EDTA/TransFix®-rørene og på natriumheparinrør og validerer transportbetingelserne (20-25°C inden for 24 til 96H) for CF; disse analyser vil blive udført på de første 50 prøver af BMA.

Prøverne til disse diagnosetests vil blive lavet på dagen for inklusion. For hver tilmeldt patient vil en 5 mL prøve af perifert blod (EDTA) og 1 mL prøver af BM-aspirat (0,5 mL i et EDTA/TransFix®-rør og 0,5 mL i et natriumheparinatrør) blive opsamlet på samme måde. dag og afsendt på mindre end 24 til 96 timer (+20-25°C) til et centralt laboratorium.

For hver patient vil genomisk DNA fra totale leukocytter blive oprenset fra de perifere blod-EDTA-prøver og senere brugt til kvantificering af kit-mutationerne ved real-time qPCR. Plasma-tryptaseniveauet vil blive målt fra EDTA-prøven fra det perifere blod, efter at en alikvot er blevet udtaget til DNA-ekstraktion. Knoglemarvsaspiratprøven vil først blive brugt til immunfænotypning af BM-mastocytter ved flowcytometri (FC), og derefter, efter centrifugering, til måling af BM-tryptaseniveau. Graden af ​​fortynding af BM-aspiratet med perifert blod vil blive estimeret ved at sammenligne procentdelen af ​​CD16bright vs. CD16low granulocytter i BM-prøver og bruges til at justere BM-tryptasen. Tryptasemålinger vil blive foretaget fra EDTA eller Na, heparinatplasma, ved hjælp af et standardiseret fluorenzymimmunoassay på en automatiseret analysator. Immunfænotypning af BM-mastocytter vil blive udført på BM-aspiration stabiliseret af TransFix® (et cellulært antigenstabiliseringsreagens) (og for første gang 50 prøver på BM-aspiration i Na, heparinat) under anvendelse af en foruddefineret blanding af anti-CD45/CD117/CD34/ CD2/CD25/CD16-antistoffer, koblet til passende fluorochromer. Genomisk DNA fra BM leukocytter vil blive ekstraheret fra 300-500 µL perifert blod (begge antikoaguleret med EDTA) ved hjælp af en Promega DNA automatiseret ekstraktor og efterfølgende opbevaret ved +4°C. Kvantitativ PCR vil blive udført ved hjælp af et prævalideret qPCR-assay (Life Technologies, Foster City, CA) med et 7900HT Fast Real-Time PCR-system (Life Technologies).

Studiebesøgets afslutning udføres samme dag, som patienten ses gjort opmærksom på resultaterne af de foretagne kliniske og laboratorieundersøgelser. Dette er også dagen, hvor den planlagte medicinske behandling af mastocytose diskuteres.