A csontvelő-triptáz diagnosztikai értéke szisztémás masztocitózisban (EvaTryMS)

A mastocytosis olyan rendellenességek csoportja, amelyeket a hízósejtek klonális felhalmozódása jellemez különböző szervekben. A mastocytosis diagnózisa nehéz, és a betegek évekig nem diagnosztizálják. Az Egészségügyi Világszervezet (WHO) által meghatározott diagnosztikai kritériumok alapján a mastocytosis a bőr masztocitózisára (CM) és szisztémás masztocitózisra (SM) osztható.

A tanulmány azt sugallta, hogy a csontvelő-aspirátumból (BMA-ból) származó triptáz plazmában történő mérése hasznos lehet az SM diagnózisában. A Toulouse Egyetemi Kórházban végzett előzetes vizsgálat eredményei azt sugallták, hogy az 50 µg/l vagy annál nagyobb csontvelő-triptáz szint (MT) érzékenyebb diagnosztikai kritérium lehet (94,7%-os érzékenység), mint a BMB szövettani eredménye (a fő diagnosztikai kritérium). SM esetén 68-80%-os érzékenységgel szakértői központokban) SM diagnosztizálására bőrön mastocytosisban szenvedő betegeknél.

Mivel ezt az előzetes vizsgálatot korlátozott számú betegen és egyetlen központban végezték, az MT diagnosztikus értékét az SM diagnózisában nagyobb és reprezentatívabb populáción kell megerősíteni.

Ezenkívül a vizsgálók a következők értékelését javasolják:

• Az MT diagnosztikai pontossága az SM diagnosztizálására olyan betegeknél, akiknél nincs mastocytosis a bőrben;
• Az abszolút és korrigált MT diagnosztikai pontossága a bőr mastocitózisával és anélkül SM diagnosztizálására;
• Az MT/ST arány diagnosztikai pontossága a bőr mastocitózisával és anélkül történő SM diagnosztizálására;
• A BMA által gyűjtött és tartósítóoldatban tartott sejteken végzett áramlási citometria diagnosztikai pontossága a bőrben mastocitózissal és anélkül SM diagnosztizálására;
• A perifériás vérben lévő KIT mutáció-pozitív sejtek frakciójának számszerűsítésének diagnosztikus pontossága a bőrben mastocitózissal és anélkül SM diagnosztizálásához;
• A perifériás vérben lévő KIT mutáció-pozitív sejtek frakciójának számszerűsítési eredményeinek korrelációja az MT szint eredményeivel, az MT/ST arány eredményeivel, valamint az abszolút és korrigált MT eredményeivel;
• Az EDTA/TransFix® csövekkel és nátrium-heparin csövekkel végzett CF eredményeinek korrelációja és a CF szállítási feltételeinek validálása (20-25°C 24-96 óra között); ezeket az elemzéseket a BMA első 50 mintáján végzik el.

A diagnosztikai vizsgálatokhoz szükséges mintákat a felvétel napján készítik el. Minden beiratkozott betegből egy 5 ml-es perifériás vérmintát (EDTA) és 1 ml-es BM aspirátummintát (0,5 ml EDTA/TransFix® csőben és 0,5 ml nátrium-heparinát csőben) veszünk. napon, és kevesebb, mint 24-96 órán belül (+20-25°C) szállítják egy központi laboratóriumba.

Minden egyes beteg esetében a teljes leukocitákból származó genomiális DNS-t megtisztítják a perifériás vér EDTA-mintáiból, és később felhasználják a kit mutációinak valós idejű qPCR-rel történő mennyiségi meghatározására. A plazma triptázszintjét a perifériás vér EDTA-mintájából mérik, miután egy alikvot részt vettek a DNS-kivonáshoz. A csontvelő-aspirátum mintát először a BM mastociták immunfenotipizálására használjuk fel áramlási citometriával (FC), majd centrifugálás után a BM triptáz szintjének mérésére. A BM aspirátum perifériás vérrel való hígításának mértékét a BM-minták CD16bright és CD16low granulociták százalékos arányának összehasonlításával becsüljük meg, és ezt használjuk a BM triptáz beállítására. A triptáz méréseket EDTA vagy Na, heparinát plazmából, szabványos fluor enzim immunoassay segítségével, automatizált analizátoron végzik. A BM-masztociták immunfenotipizálását TransFix®-el (egy sejtantigénstabilizáló reagens) stabilizált BM-leszívással (és az első 50 mintával BM-leszívással Na, heparinátban) végezzük, az anti-CD45/CD117/CD34/ előre meghatározott keverékével. CD2/CD25/CD16 antitestek, megfelelő fluorokrómokhoz kapcsolva. A BM leukocitákból származó genomiális DNS-t 300-500 µl perifériás vérből (mindkettő EDTA-val antikoagulált) extraháljuk Promega DNS automata extraktor segítségével, majd +4°C-on tároljuk. A kvantitatív PCR-t egy előre validált qPCR vizsgálat (Life Technologies, Foster City, CA) és egy 7900HT Fast Real-Time PCR rendszer (Life Technologies) segítségével hajtják végre.

A vizsgálati látogatást ugyanazon a napon végzik el, amikor a beteget tájékoztatják az elvégzett klinikai és laboratóriumi vizsgálatok eredményeiről. Ezen a napon kerül szóba a mastocytosis tervezett orvosi kezelése is.