Mekanisme for forsinket neutrofil apoptose ved akut lungeskade

1. Litteraturgrundlag cute respiratory distress syndrome (ARDS) er et klinisk syndrom karakteriseret ved åndedrætsbesvær og progressiv hypoxæmi, som er forårsaget af diffust alveolært og pulmonært interstitielt ødem forårsaget af forskellige lunge- og ekstrapulmonale faktorer bortset fra kardiogene faktorer. ARDS-hyppigheden er så høj som 75/10.000 om året, og sepsis og lungeinfektion er de mest almindelige årsager. Tidligere blev det generelt antaget, at overdreven immunaktivering er kernen i patofysiologien af ​​ARDS, og neutrofiler er anerkendt som kernedriveren for inflammatorisk hyperaktivitet og lungeskade i ARDS. Selvom der er sket nogle fremskridt inden for epidemiologien, patogenesen og patofysiologien af ​​ARDS i de sidste 50 år, og de kliniske resultater for nogle patienter med ARDS er blevet forbedret ved at optimere metoden for mekanisk ventilation og væskebehandling samt tilbøjelig ventilation og brugen af ​​muskelafslappende midler, ARDS er stadig en af ​​de mest almindelige dødsårsager og invaliditet på intensivafdelinger. Dødeligheden af ​​sygdommen er i øjeblikket så høj som 30-40%. Der er stadig mangel på effektive lægemidler til behandling af ARDS i klinikken, og selv glukokortikoider anvendt til immunoveraktivering har ikke opnået gode resultater. Dette er relateret til den uklare patogenese af ARDS. Derfor er det stadig et varmt og vanskeligt punkt at udforske patogenesen og progressionen af ​​ARDS yderligere og finde nye terapeutiske mål.

Tidligere blev modent PMN i perifert blod generelt betragtet som en funktionel celle i slutstadiet, men det er bredt involveret i forskellige medfødte immunresponser (herunder betændelse, infektion, tumor, autoimmunitet osv.) og kan anvende meget forskellige effektorer mekanismer. Derfor er der med uddybningen af ​​forskningen blevet identificeret neutrofile undertyper med forskellige funktioner (såsom immunregulering og reparation) i de senere år: cd16dimcd62lbrightpmn og cd16brightcd62ldimmpmn. I raske menneskers steady state udgør de klassiske modne neutrofiler (cd16brightcd62lbright) i perifert blod mere end 98 % af det samlede PMN, og andelen af ​​de to neutrofile subtyper er relativt lav. I den inflammatoriske tilstand steg andelen af ​​cd16dimcd62lbright og cd16brightcd62ldim neutrofiler signifikant. Proteomisk analyse viste, at der var signifikante forskelle mellem de to undertyper af neutrofiler. Kernen i cd16dimcd62lbright neutrofil undergruppe er båndet, som frigives fra knoglemarven efter at være blevet stimuleret af lipopolysaccharid (LPS). Det tegner sig for 20% - 25% af PMN i fuldblod i LPS-infektionsmodellen. Apoptosehastigheden er væsentligt reduceret, og de bakteriostatiske virkninger såsom oxidativt udbrud og fagocytose forstærkes væsentligt; Tværtimod har cd16brightcd62ldim neutrofil undergruppe reduceret antibakteriel evne og viser immunsuppressiv fænotype. Det er en nyopdaget neutrofil subtype med immunsuppressiv funktion i de senere år, som kan hæmme T-celleproliferation, som er relateret til immunsuppression i den eksperimentelle humane endotoxemia model.

I vores tidligere undersøgelser har vi med succes opnået et nyt aminosyrederivat af ocotillol ginsenosid, som kan have de farmakologiske aktiviteter som ocotillol ginsenosid og glycin, og som har en potentiel rolle i at forbedre forsinkelsen af ​​apoptose og immunsuppression af ARDS neutrofile subtyper, og har potentialet i udvikling af nye lægemidler til behandling af ARDS.

2. De eksperimentelle trin er som følger:

1. Perifere blodprøver fra patienter med ARDS blev indsamlet for at påvise inflammatoriske markører;
2. Neutrofiler blev isoleret fra perifert blod fra patienter med ARDS;
3. Andelen af ​​neutrofile undertyper blev påvist ved flowcytometri, og de neutrofile undertyper blev isoleret;
4. Neutrofile undertyper blev dyrket sammen med T-lymfocytter fra perifert blod for at påvise deres evne til at inhibere T-celleproliferation og apoptosen af ​​neutrofile undertyper;
5. Perifere blodneutrofiler og forskellige doser af ginsenosidglycinderivater hos patienter med ARDS (2050100 μm) Efter inkubation i 20 timer var apoptosehastigheden 28 timer.
6. Bax, Mcl-1 og spaltet caspase-3 blev påvist ved Western blot.
7. High throughput PCR og mapp-4 blev brugt til at detektere ekspressionen af ​​apoptose-relaterede gener i akg38k-vejen.
8. Metabolomisk analyse: Indsaml det perifere blod fra ARDS-patienter til metabolomisk analyse.

3. Forskningsmetoder

1. Diagnostiske kriterier: se 2012 Berlin-standarden for diagnostiske kriterier for ARDS.
2. Inklusionskriterier: (1) alder ≥ 18 år gammel; (2) Diagnose af akut lungeskade inden for 24 timer (Berlin diagnostiske kriterier for akut lungeskade)
3. Eksklusionskriterier: (1) alder < 18 år; (2) Udskrivelse eller død inden for 48 timer efter indlæggelse; (3) Graviditet eller barseltid; (4) Patienter med immunsuppression.

4. Testprocedure

1. Metoder: ICU-patienter, der opfyldte inklusionskriterierne, blev udvalgt
2. Processen for informeret samtykke: underskriv den informerede samtykkeformular efter at have kommunikeret med patienten eller den juridiske repræsentant

5. Start og afslutning af eksperimentet Informeret samtykke blev underskrevet i januar 2020

6. Datasikkerhed og overvågningsplan Patientens journaler (studiejournaler/CRF, testskemaer mv.) opbevares fuldstændigt på hospitalet. Lægen registrerer resultaterne af laboratorieundersøgelser og andre undersøgelser i sin journal. Forskerne, den etiske komité og lægemiddeladministrationen vil få adgang til hans lægejournaler. Ingen offentlig rapport om resultaterne af undersøgelsen vil afsløre patientens individuelle identitet. Vi vil gøre alt for at beskytte patientoplysninger i det omfang, det er tilladt ved lov. I henhold til medicinsk forskningsetik, bortset fra personlige oplysninger om privatlivets fred, vil eksperimentelle data være tilgængelige for offentlig forespørgsel og deling, og forespørgslen og delingen vil være begrænset til den elektroniske database baseret på netværket for at sikre, at ingen personlige oplysninger om privatlivets fred vil blive videregivet.

7. Overhold etiske principper og relevante love og regler Hvorvidt man skal deltage i undersøgelsen eller ej, afhænger helt af patienternes og deres juridiske repræsentanters ønsker. Patienter og deres familier kan afvise at deltage i undersøgelsen eller trække sig fra undersøgelsen på et hvilket som helst tidspunkt i løbet af undersøgelsen. Dette vil ikke påvirke forholdet mellem patienten og hans læge, og det vil heller ikke påvirke tabet af medicinske eller andre fordele for patienten.

8. Statistisk analyseplan SPSS15.0-software blev brugt til statistisk analyse. Måledataene blev udtrykt som middel ± standardafvigelse, t-test eller ikke-parametrisk test blev brugt til sammenligning mellem grupper, chi square test blev brugt til at tælle data, og lineær korrelationsanalyse blev brugt til forholdet mellem variabler, P < 0,05 blev betragtet som som statistisk signifikant.