Viivästyneen neutrofiilien apoptoosin mekanismi akuutissa keuhkovauriossa

1. Kirjallisuuden perusteella söpö hengitysvaikeusoireyhtymä (ARDS) on kliininen oireyhtymä, jolle on tunnusomaista hengitysvaikeudet ja etenevä hypoksemia, jonka aiheuttaa diffuusi alveolaarinen ja keuhkojen interstitiaalinen turvotus, joka johtuu useista muista keuhko- ja ekstrapulmonaalisista tekijöistä kuin kardiogeenisistä tekijöistä. ARDS:n ilmaantuvuus on jopa 75/10 000 vuodessa, ja sepsis ja keuhkoinfektio ovat yleisimmät syyt. Aikaisemmin uskottiin yleisesti, että liiallinen immuuniaktivaatio on ARDS:n patofysiologian ydin, ja neutrofiilit tunnustetaan tulehduksellisen hyperaktiivisuuden ja keuhkovaurion ydintekijäksi ARDS:ssä. Vaikka ARDS:n epidemiologiassa, patogeneesissä ja patofysiologiassa on tapahtunut jonkin verran edistystä viimeisten 50 vuoden aikana, ja joidenkin ARDS-potilaiden kliinisiä tuloksia on parannettu optimoimalla mekaanisen ventilaation ja nestekäsittelyn muotoja sekä alttiita ventilaatioita ja lihasrelaksanttien käyttö, ARDS on edelleen yksi yleisimmistä kuolin- ja työkyvyttömyyden syistä tehohoitoyksiköissä. Taudin kuolleisuus on tällä hetkellä jopa 30-40 %. Klinikalla on edelleen pulaa tehokkaista lääkkeistä ARDS:n hoitoon, eivätkä edes immuunijärjestelmän yliaktivointiin käytetyt glukokortikoidit ole tuottaneet hyviä tuloksia. Tämä liittyy ARDS:n epäselvään patogeneesiin. Siksi on edelleen kuuma ja vaikea kohta tutkia edelleen ARDS:n patogeneesiä ja etenemistä ja löytää uusia terapeuttisia kohteita.

Aikaisemmin ääreisveren kypsää PMN:ää pidettiin yleensä toiminnallisena soluna loppuvaiheessa, mutta se on laajalti mukana erilaisissa synnynnäisissä immuunivasteissa (mukaan lukien tulehdus, infektio, kasvain, autoimmuniteetti jne.) ja se voi ottaa käyttöön hyvin erilaisia ​​efektoreja. mekanismit. Siksi tutkimuksen syventyessä on viime vuosina tunnistettu neutrofiilien alatyyppejä, joilla on erilaisia ​​toimintoja (kuten immuunisäätely ja -korjaus): cd16dimcd62lbrightpmn ja cd16brightcd62ldimmpmn. Terveiden ihmisten vakaassa tilassa perifeerisen veren klassiset kypsät neutrofiilit (cd16brightcd62lbright) muodostavat yli 98 % PMN:n kokonaismäärästä, ja näiden kahden neutrofiilialatyypin osuus on suhteellisen pieni. Tulehdustilassa cd16dimcd62lbright- ja cd16brightcd62ldim-neutrofiilien osuus kasvoi merkittävästi. Proteominen analyysi osoitti, että neutrofiilien kahden alatyypin välillä oli merkittäviä eroja. cd16dimcd62lbright neutrofiilien alaryhmän tuma on nauhallinen, joka vapautuu luuytimestä sen jälkeen, kun se on stimuloitunut lipopolysakkaridilla (LPS). Se muodostaa 20–25 % kokoveren PMN:stä LPS-infektiomallissa. Apoptoosinopeus vähenee merkittävästi ja bakteriostaattiset vaikutukset, kuten oksidatiivinen purkaus ja fagosytoosi, lisääntyvät merkittävästi; Päinvastoin, cd16brightcd62ldim neutrofiilien alaryhmällä on heikentynyt antibakteerinen kyky ja se osoittaa immunosuppressiivista fenotyyppiä. Se on äskettäin löydetty neutrofiilien alatyyppi, jolla on viime vuosina immunosuppressiivinen toiminto ja joka voi estää T-solujen proliferaatiota, joka liittyy immunosuppressioon kokeellisessa ihmisen endotoksemiamallissa.

Aiemmissa tutkimuksissamme olemme onnistuneesti saaneet uuden aminohappojohdannaisen okotilloliginsenosidista, jolla voi olla okotilloliginsenosidin ja glysiinin farmakologisia vaikutuksia ja jolla on potentiaalinen rooli ARDS-neutrofiilien alatyyppien apoptoosin viivästymisen ja immunosuppression parantamisessa. uuden lääkekehityksen mahdollisuudet ARDS:n hoitoon.

2. Kokeiluvaiheet ovat seuraavat:

1. ARDS-potilailta kerättiin perifeerisiä verinäytteitä tulehdusmerkkiaineiden havaitsemiseksi;
2. Neutrofiilit eristettiin ARDS-potilaiden ääreisverestä;
3. Neutrofiilien alatyyppien osuus havaittiin virtaussytometrialla ja neutrofiilien alatyypit eristettiin;
4. Neutrofiilien alatyyppejä viljeltiin yhdessä ääreisveren T-lymfosyyttien kanssa niiden kyvyn inhiboida T-solujen lisääntymistä ja neutrofiilien alatyyppien apoptoosia havaitsemiseksi;
5. Perifeerisen veren neutrofiilit ja eri annokset ginsenosidiglysiinijohdannaisia ​​potilailla, joilla on ARDS (2050100 μm) 20 tunnin inkubaation jälkeen apoptoosinopeus oli 28 tuntia.
6. Bax, Mcl-1 ja pilkottu kaspaasi-3 havaittiin Western blot -menetelmällä.
7. Korkean suorituskyvyn PCR:ää ja mapp-4:ää käytettiin apoptoosiin liittyvien geenien ilmentymisen havaitsemiseksi akg38k-reitillä.
8. Metabolominen analyysi: kerää ARDS-potilaiden perifeerinen veri metabolomista analyysiä varten.

3. Tutkimusmenetelmät

1. Diagnostiset kriteerit: katso ARDS:n diagnostiset kriteerit vuoden 2012 Berliinin standardista.
2. Sisällyttämiskriteerit: (1) ikä ≥ 18 vuotta vanha; (2) Akuutin keuhkovaurion diagnoosi 24 tunnin sisällä (Berliinin diagnostiset kriteerit akuutille keuhkovauriolle)
3. Poissulkemiskriteerit: (1) ikä < 18 vuotta; (2) kotiuttaminen tai kuolema 48 tunnin kuluessa maahanpääsystä; (3) Raskaus tai synnytys; (4) Potilaat, joilla on immunosuppressio.

4. Testausmenettely

1. Menetelmät: ICU-potilaat, jotka täyttivät sisällyttämiskriteerit, valittiin
2. Tietoisen suostumuksen prosessi: allekirjoita tietoinen suostumuslomake, kun olet ollut yhteydessä potilaan tai laillisen edustajan kanssa

5. Kokeilun aloitus ja lopetus Tietoinen suostumus allekirjoitettiin tammikuussa 2020

6. Tietoturva- ja seurantasuunnitelma Potilaan potilastiedot (tutkimuksen potilastiedot / CRF, testilomakkeet jne.) säilytetään kokonaan sairaalassa. Lääkäri kirjaa laboratoriotutkimusten ja muiden tutkimusten tulokset potilastietokirjaansa. Tutkijat, eettinen komitea ja lääkehallinto saavat tutustua hänen potilastietoihinsa. Mikään julkinen raportti tutkimuksen tuloksista ei paljasta potilaan yksilöllisyyttä. Teemme kaikkemme suojellaksemme potilastietoja lain sallimissa rajoissa. Lääketieteellisen tutkimuksen etiikan mukaan kokeelliset tiedot ovat henkilökohtaisia ​​tietosuojatietoja lukuun ottamatta saatavilla julkiseen kyselyyn ja jakamiseen, ja kysely ja jakaminen rajoitetaan verkkoon pohjautuvaan sähköiseen tietokantaan, jotta henkilökohtaisia ​​tietosuojatietoja ei paljasteta.

7. Eettisten periaatteiden ja asiaankuuluvien lakien ja määräysten noudattaminen Se, osallistuuko tutkimukseen vai ei, riippuu täysin potilaiden ja heidän laillisten edustajiensa toiveista. Potilaat ja heidän perheensä voivat kieltäytyä osallistumasta tutkimukseen tai vetäytyä tutkimuksesta milloin tahansa tutkimuksen aikana. Tämä ei vaikuta potilaan ja hänen lääkärinsä väliseen suhteeseen, eikä se vaikuta potilaan lääketieteellisten tai muiden etujen menettämiseen.

8. Tilastollinen analyysisuunnitelma Tilastolliseen analyysiin käytettiin ohjelmistoa SPSS15.0. Mittaustiedot ilmaistiin keskiarvona ± keskihajonta, ryhmien väliseen vertailuun käytettiin t-testiä tai ei-parametrista testiä, tietojen laskemiseen käytettiin khin neliö-testiä ja muuttujien välisen suhteen määrittämiseen käytettiin lineaarista korrelaatioanalyysiä, P < 0,05 katsottiin tilastollisesti merkittävä.