Mechanismus der verzögerten Apoptose von Neutrophilen bei akuter Lungenverletzung

1. Literaturgrundlage Das niedliche Atemnotsyndrom (ARDS) ist ein klinisches Syndrom, das durch Atemnot und fortschreitende Hypoxämie gekennzeichnet ist, die durch ein diffuses alveoläres und pulmonales interstitielles Ödem verursacht wird, das durch verschiedene pulmonale und extrapulmonale Faktoren außer kardiogenen Faktoren verursacht wird. Die ARDS-Inzidenzrate beträgt bis zu 75/10.000 pro Jahr, und Sepsis und Lungeninfektionen sind die häufigsten Ursachen. In der Vergangenheit wurde allgemein angenommen, dass eine übermäßige Immunaktivierung der Kern der Pathophysiologie von ARDS ist, und Neutrophile gelten als die Hauptursache für entzündliche Hyperaktivität und Lungenschädigung bei ARDS. Obwohl in den letzten 50 Jahren einige Fortschritte in der Epidemiologie, Pathogenese und Pathophysiologie von ARDS erzielt wurden und die klinischen Ergebnisse einiger Patienten mit ARDS verbessert wurden, indem die Art der mechanischen Beatmung und Flüssigkeitsbehandlung sowie die Beatmung in Bauchlage optimiert wurden Durch den Einsatz von Muskelrelaxantien ist ARDS immer noch eine der häufigsten Todesursachen und Behinderungen auf Intensivstationen. Die Sterblichkeitsrate der Krankheit liegt derzeit bei 30-40%. Es fehlt immer noch an wirksamen Medikamenten zur Behandlung von ARDS in der Klinik, und selbst Glukokortikoide, die zur Immunüberaktivierung eingesetzt werden, haben keine guten Ergebnisse erzielt. Dies hängt mit der unklaren Pathogenese des ARDS zusammen. Daher ist es immer noch ein heißer und schwieriger Punkt, die Pathogenese und Progression von ARDS weiter zu erforschen und neue therapeutische Ziele zu finden.

In der Vergangenheit galt reifes PMN im peripheren Blut im Allgemeinen als funktionelle Zelle im Endstadium, ist jedoch in großem Umfang an verschiedenen angeborenen Immunantworten beteiligt (einschließlich Entzündung, Infektion, Tumor, Autoimmunität usw.) und kann sehr unterschiedliche Effektoren annehmen Mechanismen. Daher wurden mit der Vertiefung der Forschung in den letzten Jahren Neutrophilen-Subtypen mit unterschiedlichen Funktionen (z. B. Immunregulation und -reparatur) identifiziert: cd16dimcd62lbrightpmn und cd16brightcd62ldimpmn. Im Steady State von gesunden Menschen machen die klassischen reifen Neutrophilen (cd16brightcd62lbright) im peripheren Blut mehr als 98 % der gesamten PMN aus, und der Anteil der beiden neutrophilen Subtypen ist relativ gering. Im entzündlichen Zustand stieg der Anteil an cd16dimcd62lbright- und cd16brightcd62ldim-Neutrophilen signifikant an. Die proteomische Analyse zeigte, dass es signifikante Unterschiede zwischen den beiden Subtypen von Neutrophilen gab. Der Kern der cd16dimcd62lbhellen Neutrophilen-Untergruppe ist gebändert, was aus dem Knochenmark freigesetzt wird, nachdem es durch Lipopolysaccharid (LPS) stimuliert wurde. Es macht 20 % - 25 % der PMN im Vollblut im LPS-Infektionsmodell aus. Die Apoptoserate wird signifikant reduziert und die bakteriostatischen Effekte wie oxidativer Ausbruch und Phagozytose werden signifikant verstärkt; Im Gegensatz dazu hat die cd16brightcd62ldim-Neutrophilen-Untergruppe eine reduzierte antibakterielle Fähigkeit und zeigt einen immunsuppressiven Phänotyp. Es handelt sich um einen in den letzten Jahren neu entdeckten Neutrophilen-Subtyp mit immunsuppressiver Funktion, der die T-Zell-Proliferation hemmen kann, die mit der Immunsuppression im experimentellen menschlichen Endotoxämie-Modell zusammenhängt.

In unseren früheren Studien haben wir erfolgreich ein neues Aminosäurederivat von Ocotillol-Ginsenosid erhalten, das möglicherweise die pharmakologischen Aktivitäten von Ocotillol-Ginsenosid und Glycin aufweist und eine potenzielle Rolle bei der Verbesserung der Verzögerung der Apoptose und der Immunsuppression von ARDS-Neutrophilen-Subtypen spielt und hat das Potenzial der Entwicklung neuer Medikamente für die Behandlung von ARDS.

2. Die experimentellen Schritte sind wie folgt:

1. Periphere Blutproben von Patienten mit ARDS wurden gesammelt, um Entzündungsmarker nachzuweisen;
2. Neutrophile wurden aus peripherem Blut von Patienten mit ARDS isoliert;
3. Der Anteil an Neutrophilen-Subtypen wurde durch Durchflusszytometrie nachgewiesen, und die Neutrophilen-Subtypen wurden isoliert;
4. Neutrophile Subtypen wurden zusammen mit peripheren Blut-T-Lymphozyten kultiviert, um ihre Fähigkeit nachzuweisen, die T-Zell-Proliferation und die Apoptose von neutrophilen Subtypen zu hemmen;
5. Neutrophile im peripheren Blut und verschiedene Dosen von Ginsenosid-Glycin-Derivaten bei Patienten mit ARDS (2050100 μm) Nach 20-stündiger Inkubation betrug die Apoptoserate 28 Stunden.
6. Bax, Mcl-1 und gespaltene Caspase-3 wurden durch Western Blot nachgewiesen.
7. Hochdurchsatz-PCR und Mapp-4 wurden verwendet, um die Expression von Apoptose-verwandten Genen im akg38k-Weg nachzuweisen.
8. Metabolomanalyse: Sammeln Sie das periphere Blut von ARDS-Patienten für die Metabolomanalyse.

3. Forschungsmethoden

1. Diagnostische Kriterien: Siehe den Berliner Standard von 2012 für die diagnostischen Kriterien von ARDS.
2. Einschlusskriterien: (1) Alter ≥ 18 Jahre alt; (2) Diagnose einer akuten Lungenschädigung innerhalb von 24 Stunden (Berliner Diagnosekriterien für eine akute Lungenschädigung)
3. Ausschlusskriterien: (1) Alter < 18 Jahre; (2) Entlassung oder Tod innerhalb von 48 Stunden nach der Aufnahme; (3) Schwangerschaft oder Wochenbett; (4) Patienten mit Immunsuppression.

4. Testverfahren

1. Methoden: Intensivpatienten, die die Einschlusskriterien erfüllten, wurden ausgewählt
2. Prozess der informierten Einwilligung: Unterschreiben Sie die Einwilligungserklärung nach der Kommunikation mit dem Patienten oder gesetzlichen Vertreter

5. Beginn und Ende des Experiments Die Einverständniserklärung wurde im Januar 2020 unterzeichnet

6. Datensicherheit und Überwachungsplan Die Krankenakten des Patienten (Studienkrankenakte / CRF, Testbögen etc.) werden vollständig im Krankenhaus aufbewahrt. Die Ergebnisse von Labortests und anderen Untersuchungen trägt der Arzt in seine Krankenakte ein. Die Forscher, die Ethikkommission und die Arzneimittelverwaltung erhalten Zugang zu seinen Krankenakten. Kein öffentlicher Bericht über die Ergebnisse der Studie wird die individuelle Identität des Patienten preisgeben. Wir werden alle Anstrengungen unternehmen, um Patientendaten im gesetzlich zulässigen Umfang zu schützen. Gemäß der medizinischen Forschungsethik werden experimentelle Daten mit Ausnahme von personenbezogenen Datenschutzinformationen für öffentliche Abfragen und gemeinsame Nutzung verfügbar sein, und die Abfrage und gemeinsame Nutzung wird auf die elektronische Datenbank auf der Grundlage des Netzwerks beschränkt, um sicherzustellen, dass keine personenbezogenen Datenschutzinformationen offengelegt werden.

7. Halten Sie sich an ethische Grundsätze und relevante Gesetze und Vorschriften. Ob Sie an der Studie teilnehmen oder nicht, hängt ausschließlich vom Willen der Patienten und ihrer gesetzlichen Vertreter ab. Patienten und ihre Familien können die Teilnahme an der Studie jederzeit während des Studienverlaufs verweigern oder von der Studie zurücktreten. Dies wirkt sich weder auf die Beziehung zwischen dem Patienten und seinem Arzt noch auf den Verlust medizinischer oder anderer Vorteile für den Patienten aus.

8. Statistischer Analyseplan SPSS15.0-Software wurde für die statistische Analyse verwendet. Die Messdaten wurden als Mittelwert ± Standardabweichung ausgedrückt, t-Test oder nichtparametrischer Test wurde zum Vergleich zwischen Gruppen verwendet, Chi-Quadrat-Test wurde zum Zählen von Daten verwendet und lineare Korrelationsanalyse wurde für die Beziehung zwischen Variablen verwendet, P < 0,05 wurde als betrachtet statistisch signifikant.