Meccanismo dell'apoptosi ritardata dei neutrofili nella lesione polmonare acuta

1. Base della letteratura La sindrome da distress respiratorio carino (ARDS) è una sindrome clinica caratterizzata da distress respiratorio e ipossiemia progressiva, causata da edema interstiziale alveolare e polmonare diffuso causato da vari fattori polmonari ed extrapolmonari diversi da fattori cardiogeni. Il tasso di incidenza dell'ARDS è pari a 75/10.000 all'anno e la sepsi e l'infezione polmonare sono le cause più comuni. In passato, si riteneva generalmente che l'eccessiva attivazione immunitaria fosse il nucleo della fisiopatologia dell'ARDS e che i neutrofili fossero riconosciuti come il motore principale dell'iperattività infiammatoria e del danno polmonare nell'ARDS. Sebbene negli ultimi 50 anni siano stati compiuti alcuni progressi nell'epidemiologia, nella patogenesi e nella fisiopatologia dell'ARDS e gli esiti clinici di alcuni pazienti con ARDS siano stati migliorati ottimizzando la modalità di ventilazione meccanica e il trattamento dei fluidi, nonché la ventilazione prona e l'uso di rilassanti muscolari, ARDS è ancora una delle cause più comuni di morte e disabilità nelle unità di terapia intensiva, Il tasso di mortalità della malattia è attualmente del 30-40%. Mancano ancora farmaci efficaci per il trattamento dell'ARDS in clinica e anche i glucocorticoidi applicati per l'iperattivazione immunitaria non hanno ottenuto buoni risultati. Ciò è correlato alla patogenesi poco chiara dell'ARDS. Pertanto, è ancora un punto caldo e difficile esplorare ulteriormente la patogenesi e la progressione dell'ARDS e trovare nuovi bersagli terapeutici.

In passato, il PMN maturo nel sangue periferico era generalmente considerato come una cellula funzionale allo stadio terminale, ma è ampiamente coinvolto in diverse risposte immunitarie innate (tra cui infiammazione, infezione, tumore, autoimmunità, ecc.) e può adottare effettori molto diversi meccanismi. Pertanto, con l'approfondimento della ricerca, negli ultimi anni sono stati identificati sottotipi di neutrofili con diverse funzioni (come regolazione immunitaria e riparazione): cd16dimcd62lbrightpmn e cd16brightcd62ldimmpmn. Nello stato stazionario delle persone sane, i classici neutrofili maturi (cd16brightcd62lbright) nel sangue periferico rappresentano oltre il 98% del PMN totale e la proporzione dei due sottotipi di neutrofili è relativamente bassa. Nello stato infiammatorio, la percentuale di neutrofili cd16dimcd62lbright e cd16brightcd62ldim è aumentata significativamente. L'analisi proteomica ha mostrato che c'erano differenze significative tra i due sottotipi di neutrofili. Il nucleo del sottogruppo di neutrofili cd16dimcd62lbright è fasciato, che viene rilasciato dal midollo osseo dopo essere stato stimolato dal lipopolisaccaride (LPS). Rappresenta il 20% - 25% dei PMN nel sangue intero nel modello di infezione da LPS. Il tasso di apoptosi è significativamente ridotto e gli effetti batteriostatici come il burst ossidativo e la fagocitosi sono notevolmente migliorati; Al contrario, il sottogruppo di neutrofili cd16brightcd62ldim ha una ridotta capacità antibatterica e mostra un fenotipo immunosoppressivo. È un sottotipo di neutrofili recentemente scoperto con funzione immunosoppressiva negli ultimi anni, che può inibire la proliferazione delle cellule T, che è correlata all'immunosoppressione nel modello sperimentale di endotossiemia umana.

Nei nostri studi precedenti, abbiamo ottenuto con successo un nuovo derivato aminoacidico dell'ocotillolo ginsenoside, che può avere le attività farmacologiche dell'ocotillolo ginsenoside e della glicina, e ha un ruolo potenziale nel migliorare il ritardo dell'apoptosi e l'immunosoppressione dei sottotipi di neutrofili ARDS, e ha il potenziale dello sviluppo di nuovi farmaci per il trattamento dell'ARDS.

2. Le fasi sperimentali sono le seguenti:

1. Sono stati raccolti campioni di sangue periferico da pazienti con ARDS per rilevare marcatori infiammatori;
2. I neutrofili sono stati isolati dal sangue periferico di pazienti con ARDS;
3. La proporzione di sottotipi di neutrofili è stata rilevata mediante citometria a flusso e i sottotipi di neutrofili sono stati isolati;
4. I sottotipi di neutrofili sono stati co-coltivati ​​con linfociti T del sangue periferico per rilevare la loro capacità di inibire la proliferazione delle cellule T e l'apoptosi dei sottotipi di neutrofili;
5. Neutrofili del sangue periferico e diverse dosi di derivati ​​della glicina ginsenoside in pazienti con ARDS (2050100 μ m) Dopo incubazione per 20 ore, il tasso di apoptosi era di 28 ore.
6. Bax, Mcl-1 e caspase-3 scisso sono stati rilevati mediante Western blot.
7. PCR ad alto rendimento e mapp-4 sono stati utilizzati per rilevare l'espressione di geni correlati all'apoptosi nella via akg38k.
8. Analisi metabolomica: raccogliere il sangue periferico dei pazienti con ARDS per l'analisi metabolomica.

3. Metodi di ricerca

1. Criteri diagnostici: fare riferimento allo standard di Berlino del 2012 per i criteri diagnostici dell'ARDS.
2. Criteri di inclusione: (1) età ≥ 18 anni; (2) Diagnosi di danno polmonare acuto entro 24 ore (criteri diagnostici di Berlino per danno polmonare acuto)
3. Criteri di esclusione: (1) età < 18 anni; (2) dimissione o decesso entro 48 ore dal ricovero; (3) Gravidanza o puerperio; (4) Pazienti con immunosoppressione.

4. Procedura di prova

1. Metodi: sono stati selezionati i pazienti in terapia intensiva che soddisfacevano i criteri di inclusione
2. Processo di consenso informato: firmare il modulo di consenso informato dopo aver comunicato con il paziente o il rappresentante legale

5. Inizio e fine della sperimentazione Il consenso informato è stato firmato a gennaio 2020

6. Sicurezza dei dati e piano di monitoraggio La cartella clinica del paziente (cartella clinica dello studio/CRF, schede test, ecc.) sarà conservata integralmente in ospedale. Il medico registrerà i risultati degli esami di laboratorio e degli altri esami nella sua cartella clinica. I ricercatori, il comitato etico e l'amministrazione del farmaco avranno accesso alle sue cartelle cliniche. Nessun rapporto pubblico sui risultati dello studio rivelerà l'identità individuale del paziente. Faremo ogni sforzo per proteggere le informazioni dei pazienti nella misura consentita dalla legge. Secondo l'etica della ricerca medica, ad eccezione delle informazioni sulla privacy personale, i dati sperimentali saranno disponibili per l'indagine pubblica e la condivisione e la query e la condivisione saranno limitate al database elettronico basato sulla rete per garantire che nessuna informazione sulla privacy personale venga divulgata.

7. Rispettare i principi etici e le leggi ei regolamenti pertinenti La partecipazione o meno allo studio dipende interamente dai desideri dei pazienti e dei loro rappresentanti legali. I pazienti e le loro famiglie possono rifiutarsi di partecipare allo studio o ritirarsi dallo studio in qualsiasi momento durante il corso dello studio. Ciò non influirà sul rapporto tra il paziente e il suo medico, né influirà sulla perdita di benefici medici o di altro tipo per il paziente.

8. Piano di analisi statistica Il software SPSS15.0 è stato utilizzato per l'analisi statistica. I dati di misurazione sono stati espressi come media ± deviazione standard, il test t o il test non parametrico è stato utilizzato per il confronto tra i gruppi, il test del chi quadrato è stato utilizzato per il conteggio dei dati e l'analisi di correlazione lineare è stata utilizzata per la relazione tra le variabili, P <0,05 è stato considerato come statisticamente significante.