Mekanisme for forsinket nøytrofil apoptose ved akutt lungeskade

1. Litteraturgrunnlag cute respiratory distress syndrome (ARDS) er et klinisk syndrom karakterisert av respiratorisk distress og progressiv hypoksemi, som er forårsaket av diffust alveolært og pulmonalt interstitielt ødem forårsaket av ulike lunge- og ekstrapulmonale faktorer andre enn kardiogene faktorer. ARDS-forekomsten er så høy som 75/10 000 per år, og sepsis og lungeinfeksjon er de vanligste årsakene. Tidligere ble det generelt antatt at overdreven immunaktivering er kjernen i patofysiologien til ARDS, og nøytrofiler er anerkjent som kjernedriveren for inflammatorisk hyperaktivitet og lungeskade i ARDS. Selv om det er gjort noen fremskritt i epidemiologien, patogenesen og patofysiologien til ARDS de siste 50 årene, og de kliniske resultatene til noen pasienter med ARDS har blitt forbedret ved å optimere modusen for mekanisk ventilasjon og væskebehandling, samt utsatt ventilasjon og bruk av muskelavslappende midler, ARDS er fortsatt en av de vanligste årsakene til død og funksjonshemming på intensivavdelinger. Dødeligheten av sykdommen er for tiden så høy som 30-40 %. Det er fortsatt mangel på effektive legemidler for behandling av ARDS i klinikken, og selv glukokortikoider brukt for immunoveraktivering har ikke oppnådd gode resultater. Dette er relatert til den uklare patogenesen til ARDS. Derfor er det fortsatt et varmt og vanskelig punkt å utforske patogenesen og progresjonen av ARDS ytterligere og finne nye terapeutiske mål.

Tidligere ble moden PMN i perifert blod generelt sett på som en funksjonell celle i sluttstadiet, men den er mye involvert i forskjellige medfødte immunresponser (inkludert betennelse, infeksjon, svulst, autoimmunitet, etc.) og kan ta i bruk svært forskjellige effektorer mekanismer. Derfor, med utdypingen av forskningen, har nøytrofile subtyper med forskjellige funksjoner (som immunregulering og reparasjon) blitt identifisert de siste årene: cd16dimcd62lbrightpmn og cd16brightcd62ldimmpmn. I steady state av friske mennesker utgjør de klassiske modne nøytrofilene (cd16brightcd62lbright) i perifert blod mer enn 98 % av den totale PMN, og andelen av de to nøytrofile subtypene er relativt lav. I den inflammatoriske tilstanden økte andelen cd16dimcd62lbright og cd16brightcd62ldim nøytrofiler betydelig. Proteomisk analyse viste at det var signifikante forskjeller mellom de to undertypene av nøytrofiler. Kjernen til cd16dimcd62lbright nøytrofil undergruppe er båndet, som frigjøres fra benmargen etter å ha blitt stimulert av lipopolysakkarid (LPS). Den står for 20 % - 25 % av PMN i fullblod i LPS-infeksjonsmodellen. Apoptosehastigheten er betydelig redusert, og de bakteriostatiske effektene som oksidativt utbrudd og fagocytose er betydelig forbedret; Tvert imot har cd16brightcd62ldim nøytrofil undergruppe redusert antibakteriell evne og viser immunsuppressiv fenotype. Det er en nyoppdaget nøytrofil subtype med immunsuppressiv funksjon de siste årene, som kan hemme T-celleproliferasjon, som er relatert til immunsuppresjon i den eksperimentelle humane endotoksemimodellen.

I våre tidligere studier har vi oppnådd et nytt aminosyrederivat av okotillol ginsenosid, som kan ha de farmakologiske aktivitetene til okotillol ginsenosid og glycin, og har en potensiell rolle i å forbedre forsinkelsen av apoptose og immunsuppresjon av ARDS nøytrofile subtyper, og har potensialet til utvikling av nye medikamenter for behandling av ARDS.

2. De eksperimentelle trinnene er som følger:

1. Perifere blodprøver fra pasienter med ARDS ble samlet inn for å oppdage inflammatoriske markører;
2. Nøytrofiler ble isolert fra perifert blod fra pasienter med ARDS;
3. Andelen av nøytrofile subtyper ble påvist ved flowcytometri, og de nøytrofile subtypene ble isolert;
4. Nøytrofile subtyper ble dyrket sammen med T-lymfocytter fra perifert blod for å påvise deres evne til å hemme T-celleproliferasjon og apoptose av nøytrofile subtyper;
5. Perifere blodnøytrofiler og forskjellige doser av ginsenosidglycinderivater hos pasienter med ARDS (2050100 μm) Etter inkubasjon i 20 timer var apoptosehastigheten 28 timer.
6. Bax, Mcl-1 og spaltet caspase-3 ble påvist ved Western blot.
7. PCR med høy gjennomstrømning og mapp-4 ble brukt til å oppdage uttrykket av apoptoserelaterte gener i akg38k-veien.
8. Metabolomisk analyse: samle inn det perifere blodet til ARDS-pasienter for metabolomisk analyse.

3. Forskningsmetoder

1. Diagnostiske kriterier: referer til Berlin-standarden fra 2012 for diagnostiske kriterier for ARDS.
2. Inklusjonskriterier: (1) alder ≥ 18 år gammel; (2) Diagnose av akutt lungeskade innen 24 timer (Berlin diagnostiske kriterier for akutt lungeskade)
3. Eksklusjonskriterier: (1) alder < 18 år; (2) Utskrivelse eller død innen 48 timer etter innleggelse; (3) Graviditet eller barseltid; (4) Pasienter med immunsuppresjon.

4. Testprosedyre

1. Metoder: ICU-pasienter som oppfylte inklusjonskriteriene ble valgt
2. Prosess for informert samtykke: signer skjemaet for informert samtykke etter å ha kommunisert med pasienten eller juridisk representant

5. Start og slutt på eksperimentet Informert samtykke ble signert i januar 2020

6. Datasikkerhet og overvåkingsplan Pasientens journal (studiejournal/CRF, testskjemaer etc.) vil oppbevares fullstendig på sykehuset. Legen vil registrere resultatene av laboratorieprøver og andre undersøkelser i sin journal. Forskerne, den etiske komiteen og legemiddelforvaltningen vil få tilgang til hans journaler. Ingen offentlig rapport om resultatene av studien vil avsløre pasientens individuelle identitet. Vi vil gjøre vårt ytterste for å beskytte pasientinformasjon i den utstrekning loven tillater det. I henhold til medisinsk forskningsetikk, med unntak av personlig personverninformasjon, vil eksperimentelle data være tilgjengelige for offentlig undersøkelse og deling, og spørringen og delingen vil være begrenset til den elektroniske databasen basert på nettverket for å sikre at ingen personlig personverninformasjon vil bli avslørt.

7. Overholde etiske prinsipper og relevante lover og forskrifter Hvorvidt man skal delta i studien eller ikke, avhenger helt av ønskene til pasientene og deres juridiske representanter. Pasienter og deres familier kan nekte å delta i studien eller trekke seg fra studien når som helst i løpet av studien. Dette vil ikke påvirke forholdet mellom pasienten og hans lege, og det vil heller ikke påvirke tapet av medisinske eller andre fordeler for pasienten.

8. Statistisk analyseplan SPSS15.0 programvare ble brukt for statistisk analyse. Måledataene ble uttrykt som gjennomsnitt ± standardavvik, t-test eller ikke-parametrisk test ble brukt for sammenligning mellom grupper, chi square test ble brukt for å telle data, og lineær korrelasjonsanalyse ble brukt for forholdet mellom variabler, P < 0,05 ble vurdert som Statistisk signifikant.