Mécanisme de l'apoptose retardée des neutrophiles dans les lésions pulmonaires aiguës

1. Base de la littérature Le syndrome de détresse respiratoire mignonne (SDRA) est un syndrome clinique caractérisé par une détresse respiratoire et une hypoxémie progressive, qui est causée par un œdème interstitiel alvéolaire et pulmonaire diffus causé par divers facteurs pulmonaires et extrapulmonaires autres que les facteurs cardiogéniques. Le taux d'incidence du SDRA atteint 75/10 000 par an, et la septicémie et l'infection pulmonaire en sont les causes les plus fréquentes. Dans le passé, on croyait généralement qu'une activation immunitaire excessive était au cœur de la physiopathologie du SDRA, et les neutrophiles étaient reconnus comme le principal moteur de l'hyperactivité inflammatoire et des lésions pulmonaires dans le SDRA. Bien que certains progrès aient été réalisés dans l'épidémiologie, la pathogenèse et la physiopathologie du SDRA au cours des 50 dernières années, et que les résultats cliniques de certains patients atteints de SDRA aient été améliorés en optimisant le mode de ventilation mécanique et de traitement des fluides, ainsi que la ventilation ventrale et l'utilisation de myorelaxants, le SDRA reste l'une des causes les plus fréquentes de décès et d'invalidité dans les unités de soins intensifs. Le taux de mortalité de la maladie atteint actuellement 30 à 40 %. Il y a encore un manque de médicaments efficaces pour le traitement du SDRA en clinique, et même les glucocorticoïdes appliqués pour la suractivation immunitaire n'ont pas obtenu de bons résultats. Ceci est lié à la pathogenèse peu claire du SDRA. Par conséquent, il reste un point chaud et difficile pour explorer davantage la pathogenèse et la progression du SDRA et trouver de nouvelles cibles thérapeutiques.

Dans le passé, les PMN matures du sang périphérique étaient généralement considérées comme une cellule fonctionnelle en phase terminale, mais elles sont largement impliquées dans différentes réponses immunitaires innées (notamment inflammation, infection, tumeur, auto-immunité, etc.) et peuvent adopter des effecteurs très différents. mécanismes. Par conséquent, avec l'approfondissement de la recherche, des sous-types de neutrophiles dotés de différentes fonctions (telles que la régulation et la réparation immunitaires) ont été identifiés ces dernières années : cd16dimcd62lbrightpmn et cd16brightcd62ldimmpmn. Dans l'état d'équilibre des personnes en bonne santé, les neutrophiles matures classiques (cd16brightcd62lbright) dans le sang périphérique représentent plus de 98 % des PMN totaux, et la proportion des deux sous-types de neutrophiles est relativement faible. Dans l'état inflammatoire, la proportion de neutrophiles cd16dimcd62lbright et cd16brightcd62ldim a augmenté significativement. L'analyse protéomique a montré qu'il existait des différences significatives entre les deux sous-types de neutrophiles. Le noyau du sous-groupe de neutrophiles cd16dimcd62lbright est bagué, qui est libéré de la moelle osseuse après avoir été stimulé par le lipopolysaccharide (LPS). Il représente 20 % à 25 % des PMN dans le sang total dans le modèle d'infection par le LPS. Le taux d'apoptose est considérablement réduit et les effets bactériostatiques tels que l'éclatement oxydatif et la phagocytose sont considérablement améliorés; Au contraire, le sous-groupe de neutrophiles cd16brightcd62ldim a une capacité antibactérienne réduite et présente un phénotype immunosuppresseur. Il s'agit d'un sous-type de neutrophiles nouvellement découvert avec une fonction immunosuppressive ces dernières années, qui peut inhiber la prolifération des lymphocytes T, qui est liée à l'immunosuppression dans le modèle expérimental d'endotoxémie humaine.

Dans nos études précédentes, nous avons obtenu avec succès un nouveau dérivé d'acide aminé de l'ocotillol ginsenoside, qui pourrait avoir les activités pharmacologiques de l'ocotillol ginsenoside et de la glycine, et jouer un rôle potentiel dans l'amélioration du retard de l'apoptose et de l'immunosuppression des sous-types de neutrophiles du SDRA, et a le potentiel de développement de nouveaux médicaments pour le traitement du SDRA.

2. Les étapes expérimentales sont les suivantes :

1. Des échantillons de sang périphérique de patients atteints de SDRA ont été prélevés pour détecter des marqueurs inflammatoires ;
2. Les neutrophiles ont été isolés du sang périphérique de patients atteints de SDRA ;
3. La proportion de sous-types de neutrophiles a été détectée par cytométrie en flux et les sous-types de neutrophiles ont été isolés ;
4. Les sous-types de neutrophiles ont été co-cultivés avec des lymphocytes T du sang périphérique pour détecter leur capacité à inhiber la prolifération des lymphocytes T et l'apoptose des sous-types de neutrophiles ;
5. Neutrophiles du sang périphérique et différentes doses de dérivés de ginsénoside glycine chez des patients atteints de SDRA (2050100 μm) Après 20h d'incubation, le taux d'apoptose était de 28h.
6. Bax, Mcl-1 et la caspase-3 clivée ont été détectés par Western blot.
7. La PCR à haut débit et la mapp-4 ont été utilisées pour détecter l'expression de gènes liés à l'apoptose dans la voie akg38k.
8. Analyse métabolomique : prélever le sang périphérique de patients atteints de SDRA pour analyse métabolomique.

3. Méthodes de recherche

1. Critères diagnostiques : se référer à la norme berlinoise 2012 pour les critères diagnostiques du SDRA.
2. Critères d'inclusion : (1) âge ≥ 18 ans ; (2) Diagnostic d'une lésion pulmonaire aiguë dans les 24 heures (critères de diagnostic de Berlin pour une lésion pulmonaire aiguë)
3. Critères d'exclusion : (1) âge < 18 ans ; (2) Sortie ou décès dans les 48 heures suivant l'admission ; (3) Grossesse ou puerpéralité; (4) Patients immunodéprimés.

4. Procédure d'essai

1. Méthodes : les patients en soins intensifs qui répondaient aux critères d'inclusion ont été sélectionnés
2. Processus de consentement éclairé : signez le formulaire de consentement éclairé après avoir communiqué avec le patient ou son représentant légal

5. Début et fin de l'expérimentation Le consentement éclairé a été signé en janvier 2020

6. Sécurisation des données et plan de surveillance Le dossier médical du patient (dossier médical d'étude/CRF, formulaires d'examens, etc.) sera intégralement conservé à l'hôpital. Le médecin consignera les résultats des tests de laboratoire et autres examens dans son dossier médical. Les chercheurs, le comité d'éthique et l'administration du médicament auront accès à son dossier médical. Aucun rapport public sur les résultats de l'étude ne révélera l'identité individuelle du patient. Nous ferons tout notre possible pour protéger les informations des patients dans la mesure permise par la loi. Selon l'éthique de la recherche médicale, à l'exception des informations sur la confidentialité des données personnelles, les données expérimentales seront disponibles pour enquête publique et partage, et la requête et le partage seront limités à la base de données électronique basée sur le réseau pour garantir qu'aucune information sur la confidentialité personnelle ne sera divulguée.

7. Respecter les principes éthiques et les lois et réglementations applicables La participation ou non à l'étude dépend entièrement de la volonté des patients et de leurs représentants légaux. Les patients et leurs familles peuvent refuser de participer à l'étude ou se retirer de l'étude à tout moment au cours de l'étude. Cela n'affectera pas la relation entre le patient et son médecin, ni la perte d'avantages médicaux ou autres pour le patient.

8. Plan d'analyse statistique Le logiciel SPSS15.0 a été utilisé pour l'analyse statistique. Les données de mesure ont été exprimées en moyenne ± écart type, le test t ou le test non paramétrique a été utilisé pour la comparaison entre les groupes, le test du chi carré a été utilisé pour le comptage des données et l'analyse de corrélation linéaire a été utilisée pour la relation entre les variables, P <0,05 a été considéré comme statistiquement significatif.