Mechanisme van vertraagde neutrofiele apoptose bij acuut longletsel

1. Literatuurbasis cute respiratory distress syndrome (ARDS) is een klinisch syndroom dat wordt gekenmerkt door ademnood en progressieve hypoxemie, dat wordt veroorzaakt door diffuus alveolair en pulmonaal interstitieel oedeem veroorzaakt door verschillende pulmonale en extrapulmonale factoren anders dan cardiogene factoren. De incidentie van ARDS is zo hoog als 75/10.000 per jaar, en sepsis en longinfectie zijn de meest voorkomende oorzaken. In het verleden werd algemeen aangenomen dat overmatige immuunactivatie de kern is van de pathofysiologie van ARDS, en neutrofielen worden erkend als de belangrijkste motor van inflammatoire hyperactiviteit en longbeschadiging bij ARDS. Hoewel er de afgelopen 50 jaar enige vooruitgang is geboekt in de epidemiologie, pathogenese en pathofysiologie van ARDS, en de klinische resultaten van sommige patiënten met ARDS zijn verbeterd door de wijze van mechanische beademing en vloeistofbehandeling te optimaliseren, evenals beademing in buikligging en Door het gebruik van spierverslappers is ARDS nog steeds een van de meest voorkomende doodsoorzaken en invaliditeit op intensive care-afdelingen. Het sterftecijfer van de ziekte is momenteel zo hoog als 30-40%. Er is nog steeds een gebrek aan effectieve medicijnen voor de behandeling van ARDS in de kliniek, en zelfs glucocorticoïden die worden gebruikt voor overactivering van het immuunsysteem hebben geen goede resultaten opgeleverd. Dit hangt samen met de onduidelijke pathogenese van ARDS. Daarom is het nog steeds een heet en moeilijk punt om de pathogenese en progressie van ARDS verder te onderzoeken en nieuwe therapeutische doelen te vinden.

In het verleden werd volwassen PMN in perifeer bloed algemeen beschouwd als een functionele cel in het eindstadium, maar het is op grote schaal betrokken bij verschillende aangeboren immuunresponsen (waaronder ontsteking, infectie, tumor, auto-immuniteit, enz.) en kan zeer verschillende effectoren aannemen mechanismen. Daarom zijn er, met de verdieping van het onderzoek, de afgelopen jaren neutrofiele subtypes met verschillende functies (zoals immuunregulatie en -herstel) geïdentificeerd: cd16dimcd62lbrightpmn en cd16brightcd62ldimmpmn. In de stabiele toestand van gezonde mensen vertegenwoordigen de klassieke volwassen neutrofielen (cd16brightcd62lbright) in perifeer bloed meer dan 98% van de totale PMN, en het aandeel van de twee neutrofielensubtypes is relatief laag. In de inflammatoire toestand nam het aandeel cd16dimcd62lbright en cd16brightcd62ldim neutrofielen significant toe. Proteomische analyse toonde aan dat er significante verschillen waren tussen de twee subtypes van neutrofielen. De kern van de subgroep cd16dimcd62lbright neutrofielen is gebandeerd, die wordt vrijgegeven uit het beenmerg na te zijn gestimuleerd door lipopolysaccharide (LPS). Het is goed voor 20% - 25% van PMN in volbloed in het LPS-infectiemodel. De apoptosesnelheid wordt aanzienlijk verminderd en de bacteriostatische effecten zoals oxidatieve burst en fagocytose worden aanzienlijk verbeterd; Integendeel, cd16brightcd62ldim neutrofielensubgroep heeft een verminderd antibacterieel vermogen en vertoont een immunosuppressief fenotype. Het is een nieuw ontdekt neutrofielensubtype met immunosuppressieve functie in de afgelopen jaren, dat T-celproliferatie kan remmen, wat gerelateerd is aan immunosuppressie in het experimentele humane endotoxemiemodel.

In onze eerdere studies hebben we met succes een nieuw aminozuurderivaat van ocotillolginsenoside verkregen, dat mogelijk de farmacologische activiteiten van ocotillolginsenoside en glycine heeft, en een potentiële rol speelt bij het verbeteren van de vertraging van apoptose en immunosuppressie van ARDS-neutrofiele subtypes, en heeft het potentieel van de ontwikkeling van nieuwe geneesmiddelen voor de behandeling van ARDS.

2. De experimentele stappen zijn als volgt:

1. Perifere bloedmonsters van patiënten met ARDS werden verzameld om ontstekingsmarkers te detecteren;
2. Neutrofielen werden geïsoleerd uit perifeer bloed van patiënten met ARDS;
3. Het aandeel neutrofiele subtypes werd gedetecteerd door flowcytometrie en de neutrofiele subtypes werden geïsoleerd;
4. Neutrofiele subtypes werden samen met perifere bloed-T-lymfocyten gekweekt om hun vermogen te detecteren om T-celproliferatie en de apoptose van neutrofiele subtypes te remmen;
5. Perifere bloedneutrofielen en verschillende doses ginsenosideglycinederivaten bij patiënten met ARDS (2050100 μm) Na 20 uur incubatie was de apoptosesnelheid 28 uur.
6. Bax, Mcl-1 en gesplitst caspase-3 werden gedetecteerd met Western-blot.
7. PCR met hoge doorvoer en mapp-4 werden gebruikt om de expressie van apoptose-gerelateerde genen in de akg38k-route te detecteren.
8. Metabolomische analyse: verzamel het perifere bloed van ARDS-patiënten voor metabolomische analyse.

3. Onderzoeksmethoden

1. Diagnostische criteria: raadpleeg de Berlijnse norm van 2012 voor de diagnostische criteria van ARDS.
2. Inclusiecriteria: (1) leeftijd ≥ 18 jaar; (2) Diagnose van acuut longletsel binnen 24 uur (Berlijnse diagnostische criteria voor acuut longletsel)
3. Uitsluitingscriteria: (1) leeftijd < 18 jaar; (2) Ontslag of overlijden binnen 48 uur na opname; (3) Zwangerschap of kraambed; (4) Patiënten met immunosuppressie.

4. Testprocedure

1. Methoden: IC-patiënten die voldeden aan de inclusiecriteria werden geselecteerd
2. Geïnformeerde toestemmingsprocedure: onderteken het formulier voor geïnformeerde toestemming na communicatie met de patiënt of wettelijke vertegenwoordiger

5. Start en einde van het experiment In januari 2020 is de geïnformeerde toestemming getekend

6. Gegevensbeveiliging en monitoringplan Het medisch dossier van de patiënt (onderzoeksdossiers / CRF, testformulieren etc.) wordt volledig in het ziekenhuis bewaard. De arts legt de resultaten van laboratoriumonderzoek en ander onderzoek vast in zijn medisch dossier. De onderzoekers, de ethische commissie en de geneesmiddelenadministratie krijgen toegang tot zijn medisch dossier. Geen enkel openbaar rapport over de resultaten van het onderzoek zal de individuele identiteit van de patiënt onthullen. We zullen er alles aan doen om patiëntinformatie te beschermen voor zover toegestaan ​​door de wet. Volgens de ethiek van medisch onderzoek zullen, met uitzondering van persoonlijke privacy-informatie, experimentele gegevens beschikbaar zijn voor openbaar onderzoek en delen, en zal het opvragen en delen beperkt zijn tot de elektronische database op basis van het netwerk om ervoor te zorgen dat er geen persoonlijke privacy-informatie wordt vrijgegeven.

7. Houd u aan ethische principes en relevante wet- en regelgeving Het al dan niet deelnemen aan het onderzoek hangt volledig af van de wensen van patiënten en hun wettelijke vertegenwoordigers. Patiënten en hun families kunnen op elk moment tijdens de studie weigeren deel te nemen aan de studie of zich terugtrekken uit de studie. Dit heeft geen invloed op de relatie tussen de patiënt en zijn arts, noch op het verlies van medische of andere voordelen voor de patiënt.

8. Statistisch analyseplan Voor de statistische analyse is SPSS15.0-software gebruikt. De meetgegevens werden uitgedrukt als gemiddelde ± standaarddeviatie, t-test of niet-parametrische test werd gebruikt voor vergelijking tussen groepen, chi-kwadraattest werd gebruikt voor het tellen van gegevens en lineaire correlatieanalyse werd gebruikt voor de relatie tussen variabelen, P <0,05 werd beschouwd als statistisch significant.