Mekanism för fördröjd neutrofil apoptos vid akut lungskada

1. Litteraturbas cute respiratory distress syndrome (ARDS) är ett kliniskt syndrom som kännetecknas av andnöd och progressiv hypoxemi, som orsakas av diffust alveolärt och pulmonellt interstitiellt ödem orsakat av olika lung- och extrapulmonella faktorer andra än kardiogena faktorer. ARDS-incidensen är så hög som 75/10 000 per år, och sepsis och lunginfektion är de vanligaste orsakerna. Tidigare trodde man allmänt att överdriven immunaktivering är kärnan i patofysiologin för ARDS, och neutrofiler är erkända som huvuddrivkraften för inflammatorisk hyperaktivitet och lungskada vid ARDS. Även om vissa framsteg har gjorts i epidemiologin, patogenesen och patofysiologin för ARDS under de senaste 50 åren, och de kliniska resultaten för vissa patienter med ARDS har förbättrats genom att optimera metoden för mekanisk ventilation och vätskebehandling, såväl som benägen ventilation och användningen av muskelavslappnande medel, ARDS är fortfarande en av de vanligaste orsakerna till dödsfall och funktionshinder på intensivvårdsavdelningar. Dödligheten av sjukdomen är för närvarande så hög som 30-40%. Det finns fortfarande en brist på effektiva läkemedel för behandling av ARDS på kliniken, och även glukokortikoider som används för immunöveraktivering har inte uppnått bra resultat. Detta är relaterat till den oklara patogenesen av ARDS. Därför är det fortfarande en het och svår punkt att ytterligare utforska patogenesen och progressionen av ARDS och hitta nya terapeutiska mål.

Tidigare ansågs moget PMN i perifert blod allmänt vara en funktionell cell i slutstadiet, men den är brett involverad i olika medfödda immunsvar (inklusive inflammation, infektion, tumör, autoimmunitet, etc.) och kan anta mycket olika effektorer mekanismer. Därför, med fördjupningen av forskningen, har neutrofila subtyper med olika funktioner (såsom immunreglering och reparation) identifierats under de senaste åren: cd16dimcd62lbrightpmn och cd16brightcd62ldimmpmn. I det stabila tillståndet hos friska människor står de klassiska mogna neutrofilerna (cd16brightcd62lbright) i perifert blod för mer än 98 % av det totala PMN, och andelen av de två neutrofila subtyperna är relativt låg. I det inflammatoriska tillståndet ökade andelen cd16dimcd62lbright och cd16brightcd62ldim neutrofiler signifikant. Proteomisk analys visade att det fanns signifikanta skillnader mellan de två subtyperna av neutrofiler. Kärnan i cd16dimcd62lbright neutrofil subgrupp är bandad, som frigörs från benmärgen efter att ha stimulerats av lipopolysackarid (LPS). Det står för 20 % - 25 % av PMN i helblod i LPS-infektionsmodellen. Apoptoshastigheten reduceras avsevärt och de bakteriostatiska effekterna såsom oxidativ explosion och fagocytos förstärks avsevärt; Tvärtom, cd16brightcd62ldim neutrofil subgrupp har minskad antibakteriell förmåga och visar immunsuppressiv fenotyp. Det är en nyupptäckt neutrofil subtyp med immunsuppressiv funktion de senaste åren, som kan hämma T-cellsproliferation, vilket är relaterat till immunsuppression i den experimentella humana endotoxemimodellen.

I våra tidigare studier har vi framgångsrikt erhållit ett nytt aminosyraderivat av okotillol ginsenosid, som kan ha de farmakologiska aktiviteterna av okotillol ginsenosid och glycin, och har en potentiell roll i att förbättra fördröjningen av apoptos och immunsuppression av ARDS-neutrofilsubtyper, och har potentialen för utveckling av nya läkemedel för behandling av ARDS.

2. De experimentella stegen är följande:

1. Perifera blodprover från patienter med ARDS samlades in för att upptäcka inflammatoriska markörer;
2. Neutrofiler isolerades från perifert blod från patienter med ARDS;
3. Andelen neutrofila subtyper detekterades med flödescytometri och de neutrofila subtyperna isolerades;
4. Neutrofila subtyper samodlades med T-lymfocyter från perifert blod för att detektera deras förmåga att hämma T-cellsproliferation och apoptos av neutrofila subtyper;
5. Perifera blodneutrofiler och olika doser av ginsenosidglycinderivat hos patienter med ARDS (2050100 μm) Efter inkubation i 20 timmar var apoptoshastigheten 28 timmar.
6. Bax, Mcl-1 och kluvet kaspas-3 detekterades med Western blot.
7. Hög genomströmning PCR och mapp-4 användes för att detektera uttrycket av apoptosrelaterade gener i akg38k-vägen.
8. Metabolomisk analys: samla in det perifera blodet från ARDS-patienter för metabolomisk analys.

3. Forskningsmetoder

1. Diagnostiska kriterier: se 2012 års Berlinstandard för diagnostiska kriterier för ARDS.
2. Inklusionskriterier: (1) ålder ≥ 18 år gammal; (2) Diagnos av akut lungskada inom 24 timmar (Berlin diagnostiska kriterier för akut lungskada)
3. Uteslutningskriterier: (1) ålder < 18 år; (2) Utskrivning eller död inom 48 timmar efter intagningen; (3) Graviditet eller puerperium; (4) Patienter med immunsuppression.

4. Testprocedur

1. Metoder: ICU-patienter som uppfyllde inklusionskriterierna valdes ut
2. Processen för informerat samtycke: underteckna formuläret för informerat samtycke efter att ha kommunicerat med patienten eller juridiskt ombud

5. Start och slut av experimentet Informerat samtycke undertecknades i januari 2020

6. Datasäkerhet och övervakningsplan Patientens journaler (studiejournaler/CRF, provformulär etc.) kommer att förvaras helt på sjukhuset. Läkaren kommer att anteckna resultaten av laboratorietester och andra undersökningar i sin journal. Forskarna, den etiska kommittén och läkemedelsförvaltningen kommer att få tillgång till hans journaler. Ingen offentlig rapport om resultaten av studien kommer att avslöja patientens individuella identitet. Vi kommer att göra allt för att skydda patientinformationen i den utsträckning som lagen tillåter. Enligt medicinsk forskningsetik, förutom för personlig integritetsinformation, kommer experimentella data att vara tillgängliga för offentlig utredning och delning, och frågan och delning kommer att begränsas till den elektroniska databasen baserad på nätverket för att säkerställa att ingen personlig integritetsinformation kommer att avslöjas.

7. Följ etiska principer och relevanta lagar och förordningar Huruvida man ska delta i studien eller inte beror helt på patienternas och deras juridiska ombuds önskemål. Patienter och deras familjer kan vägra att delta i studien eller dra sig ur studien när som helst under studiens gång. Detta kommer inte att påverka relationen mellan patienten och hans läkare, och inte heller kommer det att påverka förlusten av medicinska eller andra fördelar för patienten.

8. Plan för statistisk analys Programvaran SPSS15.0 användes för statistisk analys. Mätdata uttrycktes som medelvärde ± standardavvikelse, t-test eller icke-parametriskt test användes för jämförelse mellan grupper, chi-kvadrattest användes för att räkna data och linjär korrelationsanalys användes för sambandet mellan variabler, P < 0,05 ansågs vara statistiskt säkerställt.