急性肺損傷における遅延好中球アポトーシスのメカニズム

1. 文献ベースのかわいい呼吸窮迫症候群 (ARDS) は、心原性因子以外のさまざまな肺および肺外因子によって引き起こされるびまん性肺胞および肺間質性浮腫によって引き起こされる、呼吸困難および進行性低酸素血症を特徴とする臨床症候群です。 ARDS の発生率は年間 75/10,000 にも達し、敗血症と肺感染症が最も一般的な原因です。 過去には、過剰な免疫活性化がARDSの病態生理学の核心であり、好中球がARDSの炎症性活動亢進と肺損傷の中心的なドライバーであると一般に考えられていました。 ARDS の疫学、病因、病態生理学は過去 50 年間である程度の進歩を遂げましたが、ARDS の一部の患者の臨床転帰は、人工呼吸器と輸液治療のモードを最適化することによって改善されました。筋弛緩薬の使用により、ARDS は今でも集中治療室での死亡および身体障害の最も一般的な原因の 1 つです。この疾患の死亡率は、現在 30 ～ 40% に達しています。 臨床におけるARDSの治療に有効な薬剤はまだ不足しており、免疫の過剰活性化に適用されるグルココルチコイドでさえ、良い結果を達成していません. これは、ARDS の不明確な病因に関連しています。 したがって、ARDS の病因と進行をさらに調査し、新しい治療標的を見つけることは、依然として困難な問題です。

これまで、末梢血中の成熟した PMN は、一般的に末期の機能細胞と考えられていましたが、さまざまな自然免疫応答 (炎症、感染、腫瘍、自己免疫などを含む) に広く関与しており、非常に異なるエフェクターを採用することができます。メカニズム。 したがって、研究の深化に伴い、近年、異なる機能 (免疫調節や修復など) を持つ好中球サブタイプが特定されています: cd16dimcd62lbrightpmn および cd16brightcd62ldimmpmn。 健康な人の定常状態では、末梢血中の古典的な成熟好中球 (cd16brightcd62lbright) が総 PMN の 98% 以上を占めており、2 つの好中球サブタイプの割合は比較的低いです。 炎症状態では、cd16dimcd62lbright および cd16brightcd62ldim 好中球の割合が有意に増加しました。 プロテオミクス分析は、好中球の 2 つのサブタイプの間に有意差があることを示しました。 cd16dimcd62lbright 好中球サブグループの核は、リポ多糖 (LPS) によって刺激された後に骨髄から放出されます。 LPS 感染モデルでは全血中の PMN の 20% ～ 25% を占めます。 アポトーシス率が大幅に低下し、酸化バーストや食作用などの静菌効果が大幅に向上します。それどころか、cd16brightcd62ldim 好中球サブグループは抗菌能力が低下しており、免疫抑制表現型を示しています。 近年新たに発見された免疫抑制機能を有する好中球サブタイプであり、実験的ヒトエンドトキシン血症モデルにおける免疫抑制に関連するT細胞増殖を阻害することができます。

私たちの以前の研究では、オコチロール ジンセノシドとグリシンの薬理学的活性を有する可能性のあるオコチロール ジンセノシドの新しいアミノ酸誘導体の取得に成功しており、ARDS 好中球サブタイプのアポトーシスの遅延と免疫抑制の改善に潜在的な役割を果たしています。 ARDS治療のための新薬開発の可能性。

2. 実験手順は次のとおりです。

1. 炎症マーカーを検出するために、ARDS 患者の末梢血サンプルが収集されました。
2. 好中球は、ARDS 患者の末梢血から分離されました。
3. 好中球サブタイプの割合はフローサイトメトリーによって検出され、好中球サブタイプが分離されました。
4. 好中球サブタイプを末梢血 T リンパ球と共培養して、T 細胞増殖と好中球サブタイプのアポトーシスを阻害する能力を検出しました。
5. ARDS患者における末梢血好中球と異なる用量のジンセノサイドグリシン誘導体（2050×100μm） 20時間のインキュベーション後、アポトーシス率は28時間でした。
6. Bax、Mcl-1、および切断されたカスパーゼ-3は、ウェスタンブロットによって検出されました。
7. ハイスループット PCR と mapp-4 を使用して、akg38k 経路におけるアポトーシス関連遺伝子の発現を検出しました。
8. メタボロミクス分析: メタボロミクス分析のために ARDS 患者の末梢血を収集します。

3. 調査方法

1. 診断基準: ARDS の診断基準については、2012 年ベルリン基準を参照してください。
2. 包含基準：（1）18歳以上の年齢。 (2) 24 時間以内の急性肺損傷の診断 (ベルリン急性肺損傷診断基準)
3. 除外基準: (1) 年齢 < 18 歳。 (2) 入院後 48 時間以内の退院または死亡。 (3) 妊娠中または産褥; (4) 免疫抑制状態の患者。

4. 試験手順

1. 方法: 選択基準を満たす ICU 患者が選択されました。
2. インフォームド コンセント プロセス: 患者または法定代理人と連絡を取った後、インフォームド コンセント フォームに署名します。

5. 実験の開始と終了 2020 年 1 月にインフォームド コンセントを締結

6. データのセキュリティと監視計画 患者の医療記録 (研究の医療記録/CRF、テスト フォームなど) は完全に病院に保管されます。 医師は臨床検査やその他の検査の結果を医療記録に記録します。 研究者、倫理委員会、および医薬品管理者は、彼の医療記録へのアクセスを許可されます。 研究結果に関するいかなる公の報告も、患者の個人の身元を明らかにするものではありません。 私たちは、法律で許される範囲で、患者の情報を保護するためにあらゆる努力をします。 医学研究の倫理に従って、個人のプライバシー情報を除いて、実験データは公開の調査と共有に利用でき、クエリと共有はネットワークに基づく電子データベースに限定され、個人のプライバシー情報が公開されないようにします。

7. 倫理原則および関連法規の遵守 研究に参加するかどうかは、完全に患者およびその法定代理人の希望にかかっています。 患者およびその家族は、研究期間中いつでも、研究への参加を拒否したり、研究から脱退したりすることができます。 これは、患者と主治医との関係に影響を与えるものではなく、患者の医療その他の利益を失うものでもありません。

8. 統計分析計画 統計分析には SPSS15.0 ソフトウェアを使用しました。 測定データは平均値±標準偏差で表され、グループ間の比較には t 検定またはノンパラメトリック検定が使用され、データのカウントにはカイ 2 乗検定が使用され、変数間の関係には線形相関分析が使用され、P < 0.05 と見なされました。統計学的に重要な。