Breakpoint-Analyse von offensichtlich ausgeglichenen chromosomalen Translokationen von de Novo

Eine psychomotorische Verzögerung wird bei etwa 3 % der Allgemeinbevölkerung beobachtet und hat verschiedene Ursachen: umweltbedingt, genetisch (Gen oder Chromosom) oder unbekannt. Chromosomenanomalien wurden bei 15 % der syndromalen psychomotorischen Verzögerungen (d. h. verbunden mit einem anderen Symptom). Ausgeglichene chromosomale Translokationen werden bei einer von 1000 Personen beobachtet und nur 6 % der Patienten mit scheinbar ausgeglichenen De-novo-Translokationen haben einen abnormalen Phänotyp (Warburton, 1991). Die Durchsicht der Literatur bezüglich der Microarray-Analyse von offensichtlich ausgeglichenen De-novo-Translokationen bei Patienten mit psychomotorischer Verzögerung zeigt:* in 40 % der Fälle: eine Anomalie, die nicht auf dem Karyotyp identifiziert wurde, entweder an den Translokations-Bruchpunkten oder an einer anderen Stelle auf dem Genom,* in 60 % der Fälle: Bei einer Auflösung von bis zu 25 kb werden keine Anomalien gefunden (Schluth-Bolard et al., 2009). Die Technik, die im Allgemeinen verwendet wird, um einen Bruchpunkt zu klonen und ein gestörtes Gen zu identifizieren, ist ein „Spaziergang“ auf dem Chromosom. Diese Technik verwendet fluoreszierende Sonden wie BACs oder PACs, die sich auf den abgeleiteten Chromosomen auf beiden Seiten der Bruchstellen befinden. Diese Technik ist arbeitsintensiv, zeitaufwändig und teuer, da man entlang der abgeleiteten Chromosomen immer näher an der Bruchstelle sondieren muss, um die Sonde zu finden, die die Bruchstelle überlappt. Die Forscher schlagen eine originelle, innovative und schnelle Technik vor, um Chromosomentranslokations-Bruchpunkte bei Patienten mit psychomotorischer Verzögerung und ohne Anomalien bei der Mikroarray-Analyse abzubilden. Das Hauptziel ist die Entwicklung einer Technik zur Identifizierung neuer Gene durch Klonierung und Kartierung von Chromosomen-Translokationsbruchpunkten. Diese Gene wären dann Kandidaten, um den Phänotyp des Patienten zu erklären. Die Studie erstreckt sich über einen Zeitraum von 24 Monaten und umfasst 10 Patienten. Die Machbarkeit der Technik sowie ihre Anwendung in der routinemäßigen Labordiagnostik werden evaluiert. Die Studie wurde von unserem lokalen Bioethikausschuss genehmigt und respektiert das französische Gesetz der Bioethik. Methodik: Die Patienten werden bei Mitarbeitergesprächen, einschließlich Klinikern und Biologen, ausgewählt. Eine anfängliche Microarray-Analyse kann durchgeführt werden, um einen Gewinn oder Verlust an genetischem Material zu identifizieren. Proben, für die kein Gewinn oder Verlust identifiziert werden kann, werden dann einer Durchflusszytometrie unterzogen, um die abgeleiteten Chromosomen zu isolieren. Jedes abgeleitete Chromosom kann dann mit einem neuen Mikroarray hybridisiert werden, wodurch der Bruchpunkt offengelegt wird. Die Bruchpunkte werden durch FISH-Technik bestätigt und molekularbiologische Techniken werden gut angewendet, um die Bruchpunkte zu klonen und zu sequenzieren. Datenbanken können gut verwendet werden, um nach Genen zu suchen, die sich in oder um die Bruchpunkte herum befinden. Erforderliche Angaben: Verwaltungsdaten (3 Anfangsbuchstaben des Nachnamens und 2 Anfangsbuchstaben des Vornamens, Geburtsdatum, Identifikation der Eltern, Einverständniserklärung). Klinische und biologische Daten (Phänotyp, Karyotyp, andere genetische Studien). Erwartete Ergebnisse: Entwicklung einer schnellen und kostengünstigeren Technik zur Klonierung von Translokationsbruchstellen, Identifizierung von Genen, die möglicherweise an geistiger Verzögerung und Anomalien der Embryonalentwicklung beteiligt sind, Bewertung der Verteilung verschiedener Ursachen syndromaler geistiger Verzögerung (unausgeglichene Translokation auf Microarray, zusätzliche Umlagerung auf Microarray). , Genstörung oder unbekannte Ursache).