Osteopontin bei Patienten mit metastasierendem Brustkrebs

Analyse von Polymorphismen in der OPN-Regulationsregion:

Die PCR-Amplifikation der regulatorischen Region des Promotors aus der extrahierten DNA unter Verwendung der folgenden Primer -3 (Vorwärtsprimer 5" - CAA GCT ACT GCA TAC TCG AAA TCA CA-3"; Rückwärtsprimer 5" - ACA ACC AAG CCC TCC CAG AAT TTA-3"). PCR wurde unter Verwendung von 50 ng DNA als Matrize unter den folgenden Bedingungen durchgeführt: 95°C für 10 min, dann 36 Zyklen von 94°C für 30 s, eine Anlagerungstemperatur für 60 s und 72°C für 60 s, mit a Endverlängerung bei 72°C für 15 min. Nach der Affinitätsmembranreinigung mit dem QIAquick Gel Extraction Kit (Qiagen, Carlsbad, CA, USA) wurden die PCR-Produkte einer zyklischen Sequenzierung mit dem jeweiligen Forward- und Reverse-Primer unter Verwendung eines automatisierten ABI 310 DNA-Sequenzierers unterzogen.

Messung des Serumspiegels von Osteopontin:

OPN-Spiegel wurden unter Verwendung des Enzyme Linked Immunosorbent (ELISA)-Kits, geliefert von IBL (Immuno-Biological Laboratories Co. Ltd., Japan), gemessen. Es wurden 30 normale Frauen mit passendem Alter mit einem medianen Osteopontin-Serumspiegel von 15 durchgeführt, daher wurde dieser Spiegel als Grenzwert zugewiesen.

Der Serumspiegel vor der Behandlung und der Polymorphismus von Oteopontin wurden mit verschiedenen klinisch-pathologischen Kriterien der Patienten, Ansprechen auf die Behandlung, PFS und OS, korreliert.