Osteopontin u pacientek s metastatickým karcinomem prsu

Analýza polymorfismů v regulační oblasti OPN:

PCR amplifikace regulační oblasti promotoru z extrahované DNA pomocí následujících primerů -3 (forward primer 5" -CAA GCT ACT GCA TAC TCG AAA TCA CA-3" ; reverzní primer 5" - ACA ACC AAG CCC TCC CAG AAT TTA-3"). PCR byla provedena s použitím 50 ng DNA jako templátu za následujících podmínek: 95 °C po dobu 10 minut, poté 36 cyklů 94 °C po dobu 30 s, teplota nasedání po dobu 60 s a 72 °C po dobu 60 s, s konečná extenze při 72 °C po dobu 15 min. Po afinitní membránové purifikaci za použití soupravy QIAquick Gel Extraction kit (Qiagen, Carlsbad, CA, USA) byly produkty PCR podrobeny cyklickému sekvenování s příslušným dopředným a zpětným primerem za použití automatického sekvenátoru ABI 310 DNA.

Měření sérové ​​hladiny osteopontinu:

Hladina OPN byla měřena pomocí soupravy ELISA (Enzyme linked imnosorbent Kit) od IBL (Immuno-Biological laboratories Co. Ltd., Japonsko). Bylo provedeno 30 normálních žen stejného věku se střední sérovou hladinou osteopontinu 15, takže tato hladina byla přiřazena jako mezní hodnota.

Sérová hladina a polymorfismus oteopontinu před léčbou korelovaly s různými klinicko-patologickými kritérii pacientů, odpovědí na léčbu, PFS a OS.