Osteopontin hos patienter med metastatisk brystkræft

Analyse af polymorfismer i OPN regulatoriske region:

PCR-amplifikationen af ​​promotorens regulatoriske region fra det ekstraherede DNA ved at anvende følgende primere -3 (forward primer 5" -CAA GCT ACT GCA TAC TCG AAA TCA CA-3"; omvendt primer 5" - ACA ACC AAG CCC TCC CAG AAT TTA-3"). PCR blev udført under anvendelse af 50 ng DNA som skabelon under følgende betingelser: 95°C i 10 minutter, derefter 36 cyklusser af 94°C i 30 sekunder, en annealingstemperatur i 60 sekunder og 72°C i 60 sekunder, med en endelig forlængelse ved 72°C i 15 min. Efter affinitetsmembranoprensning under anvendelse af QIAquick Gel Extraction-kittet (Qiagen, Carlsbad, CA, USA) blev PCR-produkterne underkastet cyklussekventering med den respektive fremadgående og omvendte primer under anvendelse af en automatiseret ABI 310 DNA-sekventering.

Måling af serumniveau af osteopontin:

OPN-niveauet blev målt under anvendelse af Enzyme-linked immnosorbent (ELISA) Kit leveret af IBL (Immuno-Biological laboratories Co. Ltd., Japan). 30 normale kvinder blev udført med matchet alder med et median osteopontinserumniveau på 15, så dette niveau blev tildelt som en cut-off værdi.

Forbehandlingsserumniveau og polymorfi af oteopontin var korreleret med forskellige klinisk-patologiske kriterier for patienterne, respons på behandlingen, PFS og OS.