Osteopontin hos patienter med metastaserad bröstcancer

Analys av polymorfismer i OPN-regleringsområdet:

PCR-amplifieringen av promotorns regulatoriska region från det extraherade DNA:t genom att använda följande primers -3 (framåt primer 5" -CAA GCT ACT GCA TAC TCG AAA TCA CA-3"; omvänd primer 5" - ACA ACC AAG CCC TCC CAG AAT TTA-3"). PCR utfördes med användning av 50 ng DNA som mall under följande förhållanden: 95°C under 10 minuter, sedan 36 cykler av 94°C i 30 sekunder, en hybridiseringstemperatur i 60 sekunder och 72°C i 60 sekunder, med en slutlig förlängning vid 72°C under 15 min. Efter affinitetsmembranrening med användning av QIAquick Gel Extraction-kit (Qiagen, Carlsbad, CA, USA), utsattes PCR-produkterna för cykelsekvensering med respektive framåt- och bakåtprimer med användning av en automatiserad ABI 310 DNA-sekvenserare.

Mätning av serumnivå av osteopontin:

OPN-nivån mättes med användning av Enzyme-linked immnosorbent (ELISA) Kit från IBL (Immuno-Biological laboratories Co. Ltd., Japan). 30 normala kvinnor utfördes med matchad ålder med en medianhalt av osteopontinserum på 15, så denna nivå tilldelades som ett gränsvärde.

Förbehandlingsserumnivå och polymorfism av oteopontin korrelerades med olika klinisk-patologiska kriterier för patienterna, svar på behandlingen, PFS och OS.