Osteopontyna u pacjentów z rakiem piersi z przerzutami

Analiza polimorfizmów w regionie regulacyjnym OPN:

Amplifikacja PCR regionu regulatorowego promotora z wyekstrahowanego DNA przy użyciu starterów -3 (przedni starter 5" -CAA GCT ACT GCA TAC TCG AAA TCA CA-3" ; odwrotny starter 5" - ACA ACC AAG CCC TCC CAG AAT TTA-3"). PCR przeprowadzono stosując 50 ng DNA jako matrycę w następujących warunkach: 95°C przez 10 min, następnie 36 cykli w 94°C przez 30 s, temperatura hybrydyzacji przez 60 s i 72°C przez 60 s, przy końcowe wydłużanie w 72°C przez 15 min. Po oczyszczeniu błony powinowactwa przy użyciu zestawu QIAquick Gel Extraction (Qiagen, Carlsbad, CA, USA), produkty PCR poddano cyklicznemu sekwencjonowaniu z odpowiednim starterem do przodu i do tyłu, stosując zautomatyzowany sekwenator DNA ABI 310.

Pomiar poziomu osteopontyny w surowicy:

Poziomy OPN mierzono za pomocą zestawu imnosorbentu połączonego z enzymem (ELISA) dostarczonego przez IBL (Immuno-Biological laboratoriów Co. Ltd., Japonia). Przebadano 30 normalnych samic w odpowiednim wieku z medianą poziomu osteopontyny w surowicy wynoszącą 15, więc poziom ten został przypisany jako wartość odcięcia.

Stężenie i polimorfizm oteopontyny w surowicy przed leczeniem były skorelowane z różnymi kryteriami kliniczno-patologicznymi pacjentów, odpowiedzią na leczenie, PFS i OS.