Osteopontina em pacientes com câncer de mama metastático

Análise de polimorfismos na região reguladora do OPN:

A amplificação por PCR da região reguladora do promotor a partir do DNA extraído usando os seguintes primers -3 (forward primer 5" -CAA GCT ACT GCA TAC TCG AAA TCA CA-3" ; reverse primer 5" - ACA ACC AAG CCC TCC CAG AAT TTA-3"). A PCR foi realizada usando 50 ng de DNA como molde nas seguintes condições: 95°C por 10 min, depois 36 ciclos de 94°C por 30 s, uma temperatura de anelamento por 60 s e 72°C por 60 s, com um extensão final a 72°C por 15 min. Após purificação por membrana de afinidade usando o kit QIAquick Gel Extraction (Qiagen, Carlsbad, CA, EUA), os produtos de PCR foram submetidos a sequenciamento cíclico com o respectivo primer direto e reverso usando um sequenciador de DNA ABI 310 automatizado.

Medição do nível sérico de osteopontina:

O nível de OPN foi medido usando o kit de imunoabsorção enzimática (ELISA) fornecido pela IBL (Immuno-Biological Laboratory Co. Ltd., Japão). 30 mulheres normais foram conduzidas com idade correspondente com um nível sérico mediano de osteopontina de 15, portanto, esse nível foi atribuído como um valor de corte.

O nível sérico pré-tratamento e o polimorfismo da oteopontina foram correlacionados com diferentes critérios clínico-patológicos dos pacientes, resposta ao tratamento, PFS e OS.