Immunantworten auf eine COVID-19-Infektion oder Impfung

1. Hintergrund und Überblick Aditxt, Inc hat in Zusammenarbeit mit Forschern der Stanford University laborentwickelte Tests (LDTs) zur gleichzeitigen Überwachung von Anti-SARS-COV2-Antikörpern (IgG, IgA und IgM) entwickelt, die gegen 3 verschiedene SARS-CoV-2-Antigene gerichtet sind (RBD, S1 und NP) sowie die Bewertung der SARS-CoV-2-neutralisierenden Antikörperaktivität.

   Diese Tests werden der Öffentlichkeit derzeit routinemäßig als AditxtScoreTM im CLIA-zertifizierten, CAP-akkreditierten klinischen Labor von Aditxt in Richmond, VA, angeboten. Aditxt führt diese Tests auch zu Forschungs- und Entwicklungszwecken in einer Einrichtung in Mountain View, CA, durch. Der AditxtScore bietet eine ideale Plattform für reale Untersuchungen der Immunantworten auf SARS-CoV-2-Exposition sowie auf die COVID-19-Impfstoffe.

   Der allgemeine Zweck dieser beobachtenden Kohortenstudie besteht darin, COVID-spezifische Immunantworten auf eine SARS-CoV-2-Exposition oder eine COVID-Impfung in einer realen Umgebung zu charakterisieren. Die Teilnehmer werden gebeten, bei einer Reihe von Besuchen Blutproben (entweder eine normale venöse Blutabnahme, einige Tropfen Blut, die mit einem kleinen Gerät zur Fingerbeere entnommen wurden, oder beides) sowie eine Speichel- oder Nasenabstrichprobe abzugeben. Die Probanden erhalten Ergebnisse der Tests, die für den routinemäßigen klinischen Gebrauch zugelassen sind (d. h. ihren AditxtScore), während Restproben von jedem Besuch für zukünftige Tests aufbewahrt werden. Diese Bemühungen werden die laufende Entwicklung des AditxtScore-Tests unterstützen und die Effektivität seiner Interpretation verbessern – und so die Bemühungen unterstützen, den Nutzen klinischer Labortests bei der Reaktion auf eine Pandemie zu maximieren.

2. Ziele • Charakterisierung von Immunantworten (z. B. Ausmaß/Stärke und zeitliche Dynamik der Antikörperbildung, Klassenwechsel und Antikörperpersistenz) nach einer Exposition gegenüber dem SARS-CoV-2-Virus oder einer COVID-19-Impfung.

   • Um Unterschiede in den Immunantworten zwischen Gruppen (z. B. Impfstoff vs. natürliche Exposition) und innerhalb von Gruppen (d. h. individuelle Variation) zu untersuchen.

   • Bestimmung der Beziehung zwischen AditxtScore-Komponenten und neutralisierender Antikörperaktivität und anderen potenziellen Korrelaten des Schutzes und Beschreibung möglicher klinischer Korrelate von Eigenschaften der Immunantwort.

   • Zur Unterstützung von Testentwicklungsaktivitäten wie der Bestimmung geeigneter klinischer Grenzwerte, der Analytstabilität und der Vergleichbarkeit von Ergebnissen aus verschiedenen Probentypen (z. B. venöse Blutabnahme vs. Blutstropfen aus der Fingerbeere, Nasenabstrich vs. Speichelabnahme). Diese Aktivitäten werden die Verfeinerung bestehender Tests sowie die Entwicklung zukünftiger Tests (z. COVID-19-spezifische Gedächtnis-B-Zell-, T-Zell- und NK-Zell-Antworten).

3. Studienablauf 3a. Probandenrekrutierung Die Probandenrekrutierung besteht hauptsächlich aus Mundpropaganda des Studienpersonals (z. Freundes- und Familiennetzwerke) und andere interessierte Parteien in der lokalen Gemeinschaft (z. B. eine Handvoll lokaler Ärzte). Es wird keine breite Werbekampagne erwartet, obwohl ein Flyer zur Ankündigung der Studie, der die Studienmöglichkeit beschreibt, verwendet wird, um die Rekrutierungsbemühungen zu unterstützen. Potenzielle Probanden werden angewiesen, Aditxt anzurufen, um einen Termin für einen Besuch im Labor zu vereinbaren und mehr über die Studie zu erfahren.

Jeder mit einer SARS-CoV-2-Exposition in der Vorgeschichte, einer möglichen aktuellen Infektion oder einer Impfvorgeschichte ist zur Teilnahme berechtigt, zusätzlich zu Negativkontrollen, falls erforderlich. Es werden Anstrengungen unternommen, um eine repräsentative Mischung aus Alter, Geschlecht und Ethnizität einzubeziehen.

Unter den besonderen Umständen, dass ein potenzieller Proband an der Studie teilnehmen möchte, aber nicht zu einem der Aditxt-Standorte (in Richmond, VA oder Mountain View, CA) kommen kann und Zugang zu einem qualifizierten Phlebotomiker hat, können die Entnahmematerialien an a qualifizierter Phlebotomiker in ihrem Bereich für Sammlungen. In diesem Fall würden Proben zur Verarbeitung über Nacht an Aditxt versandt. Die Einverständniserklärungen und der Patientenfragebogen werden dem Teilnehmer im Voraus per E-Mail zugesandt und mit dem Prüfarzt aus der Ferne (z. B. per Zoom oder Telefonanruf) überprüft, unterschrieben und zusammen mit den Proben an Aditxt übermittelt.

3b. Verwaltung der Einverständniserklärung und Schutz der Privatsphäre Potentielle Studienteilnehmer werden in einen privaten Raum in Aditxts Einrichtung entweder in Richmond, VA oder Mountain View, CA gebracht, und das Einverständnisformular wird ihnen von einem Mitglied des Studienteams erklärt. Sobald alle Fragen beantwortet sind, unterschreiben sie die Einverständniserklärung, wenn sie sich für eine Teilnahme entscheiden. In einer Situation, in der die Proben an einem anderen Ort entnommen werden, werden die Einwilligungs- und Autorisierungsformulare per E-Mail an den potenziellen Probanden gesendet, ausgedruckt und mit einem Mitglied des Studienteams aus der Ferne (z. B. per Zoom oder Telefonanruf) überprüft, bis alle Fragen geklärt sind wurden beantwortet. Die Einverständniserklärungen werden dann unterzeichnet und zusammen mit der Probe eingereicht.

Das Studienpersonal weist dem Teilnehmer dann eine Probandennummer zu und trägt den Probandennamen, die Probandennummer und das Datum der Einwilligung in ein elektronisches Registrierungsprotokoll (in einer Excel-Tabelle) ein. Das Registrierungsprotokoll wird an einem sicheren Ort auf dem Dateiserver von Aditxt aufbewahrt, wobei der Zugriff nur auf bestimmtes Studienpersonal beschränkt ist.

Der Name und das Geburtsdatum der Probanden werden bei der Durchführung der „Routine“-Tests bei jedem Besuch (d. h. des PCR-Virustests und der Antikörpertests) verwendet, und die klinischen Standardberichte mit ihren Namen – geeignet für Gespräche mit ihren regulären Ärzten – werden verwendet generiert und an die Subjekte geliefert werden. Es werden jedoch nur die Probandennummern verwendet, um die Patientenfragebögen und die für zukünftige Tests aufbewahrten Probenaliquots zu identifizieren.

4c. Ausfüllen des Patientenfragebogens Nach der Registrierung erhalten die Probanden einen kurzen Fragebogen, den sie ausfüllen müssen, um Informationen zu demografischen Merkmalen, Symptomen, die möglicherweise mit COVID in Verbindung stehen, Komorbiditäten und aktuellen Medikamenten, die sie einnehmen, zu erfassen. Ein Follow-up-Fragebogen wird bei jedem Follow-up-Besuch zur Verfügung gestellt.

4d. Beispielsammlung

• Gesundheits- und Sicherheitsvorkehrungen Aufgrund des potenziellen Risikos einer Virusübertragung werden die folgenden Sicherheitsvorkehrungen für jede Studienentnahme eingehalten (dies sind die gleichen Vorsichtsmaßnahmen, die von Aditxt für alle routinemäßigen Probenentnahmen gefordert werden)

  - Es darf jeweils nur ein Proband den Sammelbereich betreten.

  - Das Entnahmepersonal muss immer eine angemessene persönliche Schutzausrüstung (PSA) tragen, wenn es sich in einem Umkreis von 6 Fuß um den Patienten befindet. Dazu gehören ein Schutzkittel, Handschuhe, eine Schutzmaske und ein Gesichtsschutz.

  - Patienten müssen im Entnahmebereich eine Schutzmaske tragen, außer wenn Temperaturmessung und Nasenabstrichentnahme durchgeführt werden.

  - Das Personal der Laborentnahme reinigt den Entnahmesitz zwischen den Patientenentnahmen mit einem Desinfektionstuch.

  - Nach der Entnahme und nachdem der Patient den Entnahmebereich verlassen hat, wechselt das Laborpersonal die Handschuhe und verwendet Händedesinfektionsmittel in mehreren Schritten beim Entfernen der PSA, wie im Abschnitt Verfahren unten beschrieben, um sicherzustellen, dass keine Kontamination berührter Oberflächen, einschließlich des Schutzkittels, gewährleistet ist. Gesichtsschutz und Schutzmaske.

  - Nach dem Ablegen der PSA wäscht sich das Entnahmepersonal des Labors die Hände mit Wasser und Seife, bevor es mit der nächsten Patientenentnahme beginnt.

  • Gesichtsschutzschilde werden zwischen jeder Patientenentnahme mit einem Desinfektionstuch gereinigt.
  • Schutzmasken und -mäntel können zur Wiederverwendung zwischen Patientenentnahmen aufbewahrt werden, wenn keine Kontamination der PSA beobachtet oder vermutet wird.
• Phlebotomie-Blutproben werden auf die gleiche Weise entnommen wie diejenigen, die routinemäßig für die klinische Praxis entnommen werden, wie in Aditxts SOP 6037 Anti-SARS-CoV-2-Phlebotomieverfahren beschrieben.
• Speichel Die Teilnehmer werden gebeten, ihren Mund 5 Minuten vor der Entnahme mit Wasser auszuspülen. Sie erhalten ein 3-ml-Röhrchen und werden gebeten, es zu füllen (indem sie Speichel in ihrem Mund sammeln lassen und ihn dann in das Röhrchen spucken).
• Nasenabstriche Proben von Nasenabstrichen werden auf die gleiche Weise entnommen wie diejenigen, die routinemäßig für die klinische Praxis entnommen werden, wie in Aditxts SOP 6036 Verfahren zur Entnahme von SARS-CoV-2-Nasenabstrichen beschrieben.
• Fingerstich

Die Kapillarblutentnahme aus der Fingerbeere wird wie folgt durchgeführt:

• Wischen Sie die Einstichstelle (die Spitze des vom Probanden bevorzugten Fingers) mit einem Alkoholtupfer ab und entfernen Sie die Schutzabdeckung von der Lanzette.
• Positionieren Sie die Lanzette senkrecht zur Unterseite des Fingers und punktieren Sie die Haut, indem Sie die Lanzette sanft gegen die Einstichstelle drücken, bis sie aktiviert wird.
• Üben Sie sanften Druck auf das umgebende Gewebe aus. Verwerfen Sie den ersten Blutstropfen.
• Halten Sie den Finger und das Kapillarrohr in einer nach unten gerichteten Position. Berühren Sie mit der Spitze der Kapillare den Blutstropfen. Durch die Kapillarwirkung füllt sich das Röhrchen automatisch. Sammeln Sie 3-4 Tropfen Blut (150-250 Mikroliter).
• Nach der Blutentnahme die Kapillare aus dem Röhrchen entfernen, entsorgen und Druck auf die Punktionsstelle ausüben.
• Nach der Entnahme das Röhrchen mehrmals vorsichtig umdrehen.

• Pflaster auf die Einstichstelle auftragen.

  4e. Folgebesuche Die Probanden werden ermutigt, bis zu 2 Jahre lang alle 1-2 Monate für eine zusätzliche Probenentnahme zu Aditxt zurückzukehren. Ein aktualisierter Fragebogen wird von der Testperson bei jedem Folgebesuch ausgefüllt. Fragebogen- und Labordaten werden in der Studiendatenbank gespeichert und nur anhand der Probandennummer identifiziert, sodass zusätzliche Studien mit den jetzt anonymisierten Daten durchgeführt werden können.

  4f. Laborverfahren/Berichterstattung Die Anti-SARS-CoV-2-Antikörper und die neutralisierende Antikörperaktivität werden mit der AditxtScoreTM-Durchflusszytometriemethode von Aditx Therapeutics bewertet. Antigen-/Virentests werden auf dem iAMP COVID-19-System von Atila Biosystems durchgeführt. Klinische Laborberichte, die die Ergebnisse dieses Tests beschreiben, werden den Probanden zur Verfügung gestellt (genauso, als ob sie den Test direkt gekauft hätten).

Darüber hinaus werden die Meldepflichten des US Department of HHS und des Virginia Department of Health eingehalten. Unser Ansatz zur Meldung aller Routineergebnisse steht im Einklang mit den FDA-Richtlinien (Policy for Coronavirus Disease-2019 Tests During the Public Health Emergency (Revised)). Ergebnisse zukünftiger experimenteller Tests, die an gelagerten Proben durchgeführt werden, werden anonymisiert. Einzelpersonen werden nicht über zukünftige experimentelle Testergebnisse benachrichtigt.

AditxtScoreTM

o Neuartige auf Durchflusszytometrie basierende Methode, die die gleichzeitige Überwachung von IgG-, IgA- und IgM-Antikörpern gegen 3 verschiedene COVID-Antigene ermöglicht, begleitet von einem Test auf entsprechende neutralisierende Antikörperaktivität

iAMP COVID-19-System (Atila Biosystems)

• Isotherme Amplifikations-PCR-Technologie zum Nachweis von Sequenzen sowohl des „N“-Gens als auch des ORF-1ab-Gens des SARS-CoV-2-Virus
• Zugelassen für die Verwendung durch die FDA unter einer EUA Aditxt bietet diesen Testservice derzeit routinemäßig an).