Risposte immunitarie all'infezione o alla vaccinazione da COVID-19

1. Contesto e panoramica Aditxt, Inc, in collaborazione con i ricercatori della Stanford University, dispone di test sviluppati in laboratorio (LDT) per il monitoraggio simultaneo degli anticorpi anti-SARS-COV2 (IgG, IgA e IgM) diretti contro 3 diversi antigeni SARS-CoV-2 (RBD, S1 e NP) oltre a valutare l'attività anticorpale neutralizzante SARS-CoV-2.

   Questi test vengono attualmente offerti di routine al pubblico come AditxtScoreTM presso il laboratorio clinico accreditato CAP di Aditxt certificato CLIA a Richmond, Virginia. Aditxt esegue anche questi test per scopi di ricerca e sviluppo presso una struttura a Mountain View, in California. L'AditxtScore fornisce una piattaforma ideale per le indagini nel mondo reale delle risposte immunitarie all'esposizione a SARS-CoV-2 e ai vaccini COVID-19.

   Lo scopo generale di questo studio di coorte osservazionale è caratterizzare le risposte immunitarie specifiche per COVID all'esposizione a SARS-CoV-2 o alla vaccinazione COVID in un contesto reale. Ai partecipanti verrà chiesto di fornire campioni di sangue (un normale prelievo di sangue venoso, alcune gocce di sangue ottenute con un piccolo dispositivo da polpastrello o entrambi), nonché un campione di saliva o tampone nasale in una serie di visite. I soggetti riceveranno i risultati dei test approvati per l'uso clinico di routine (ovvero il loro AditxtScore), mentre i campioni residui di ogni visita verranno conservati per test futuri. Questi sforzi sosterranno lo sviluppo del test AditxtScore in corso e miglioreranno l'efficacia della sua interpretazione, aiutando gli sforzi per massimizzare i benefici dei test di laboratorio clinici nella risposta alla pandemia.

2. Obiettivi • Caratterizzare le risposte immunitarie (ad es. magnitudo/forza e dinamica temporale della generazione di anticorpi, cambio di classe e persistenza anticorpale) in seguito all'esposizione al virus SARS-CoV-2 o alla vaccinazione COVID-19.

   • Indagare tra gruppi (ad es. vaccino contro esposizione naturale) e all'interno del gruppo (ad es. variazione individuale) nelle risposte immunitarie.

   • Determinare la relazione tra i componenti dell'AditxtScore e l'attività degli anticorpi neutralizzanti e altri potenziali correlati di protezione e descrivere i possibili correlati clinici delle caratteristiche della risposta immunitaria.

   • Supportare le attività di sviluppo del test, come la determinazione di valori limite clinici appropriati, la stabilità dell'analita e la comparabilità dei risultati di diversi tipi di campioni (ad es. prelievo di sangue venoso rispetto a prelievo di sangue prelevato dal polpastrello, tampone nasale rispetto a prelievo di saliva). Queste attività supporteranno il perfezionamento dei test esistenti e lo sviluppo di test futuri (ad es. risposte specifiche delle cellule B di memoria COVID-19, delle cellule T e delle cellule NK).

3. Procedure di studio 3a. Reclutamento dei soggetti Il reclutamento dei soggetti consisterà principalmente nel passaparola del personale dello studio (ad es. reti di amici e familiari) e altre parti interessate nella comunità locale (ad esempio una manciata di medici locali). Non è prevista un'ampia campagna pubblicitaria, sebbene un volantino di annuncio dello studio che descriva l'opportunità di studio verrà utilizzato per sostenere gli sforzi di reclutamento. I potenziali soggetti saranno indirizzati a chiamare Aditxt per programmare un orario per venire in laboratorio e saperne di più sullo studio.

Chiunque abbia una precedente storia di esposizione a SARS-CoV-2, una possibile infezione in corso o una storia di vaccinazione può partecipare, oltre ai controlli negativi quando necessario. Verranno compiuti sforzi per includere un mix rappresentativo di età, sesso ed etnia.

Nella circostanza speciale in cui un potenziale soggetto vorrebbe partecipare allo studio ma non è in grado di recarsi in nessuna delle sedi di Aditxt (a Richmond, VA o Mountain View, CA) e ha accesso a un flebotomo qualificato, i materiali per la raccolta possono essere spediti a un flebotomo qualificato nella loro zona per le raccolte. In questo caso i campioni verrebbero spediti durante la notte ad Aditxt per l'elaborazione. I moduli di consenso e il questionario del paziente verranno inviati via e-mail al partecipante in anticipo e rivisti con lo sperimentatore in remoto (ad esempio, tramite zoom o telefonata), firmato e inviato ad Aditxt insieme ai campioni.

3b. Amministrazione del consenso informato e protezione della privacy I potenziali partecipanti allo studio saranno portati in una stanza privata presso la struttura di Aditxt a Richmond, VA o Mountain View, CA e il modulo di consenso sarà spiegato loro da un membro del team di studio. Dopo aver risposto a tutte le domande, se scelgono di partecipare firmeranno il modulo di consenso. In una situazione in cui i campioni vengono raccolti in un luogo diverso, i moduli di consenso e autorizzazione verranno inviati via e-mail al potenziale soggetto, stampati e rivisti con un membro del team di studio da remoto (ad esempio tramite zoom o telefonata) fino a quando tutte le domande hanno avuto risposta. I documenti di consenso saranno quindi firmati e inviati insieme al campione.

Il personale dello studio assegnerà quindi al partecipante un numero di soggetto e inserirà il nome del soggetto, il numero del soggetto e la data del consenso su un registro di iscrizione elettronico (in un foglio di calcolo Excel). Il registro delle iscrizioni verrà conservato in un luogo protetto sul file server di Aditxt con accesso limitato solo al personale dello studio designato.

Il nome e la data di nascita dei soggetti verranno utilizzati durante l'esecuzione dei test "di routine" ad ogni visita (ad esempio, il test del virus PCR e i test anticorpali) e i referti clinici standard con i loro nomi - appropriati per parlare con i loro medici abituali - lo faranno essere generati e consegnati ai soggetti. Tuttavia, solo i numeri dei soggetti verranno utilizzati per identificare i questionari dei pazienti e le aliquote dei campioni conservate per test futuri.

4c. Completamento del questionario del paziente Una volta arruolati, ai soggetti verrà fornito un breve questionario da completare per acquisire informazioni su dati demografici, eventuali sintomi che potrebbero essere correlati a COVID, eventuali condizioni di comorbidità e farmaci attuali che stanno assumendo. Ad ogni visita di follow-up verrà fornito un questionario di follow-up.

4d. Raccolta di campioni

• Precauzioni per la salute e la sicurezza A causa del potenziale rischio di trasmissione virale, le seguenti precauzioni di sicurezza saranno rispettate per ogni raccolta di studio (queste sono le stesse precauzioni richieste da Aditxt per tutte le raccolte di campioni di routine)

  - Potrà accedere all'area di raccolta un solo soggetto alla volta.

  - I dispositivi di protezione individuale (DPI) adeguati devono essere sempre indossati dal personale addetto alla raccolta quando si trovano entro 6 piedi dal paziente. Ciò include un camice protettivo, guanti, maschera protettiva e visiera.

  - I pazienti devono indossare una maschera protettiva nell'area di raccolta tranne quando viene eseguita la misurazione della temperatura e la raccolta del tampone nasale.

  - Il personale di raccolta del laboratorio pulirà la sede di raccolta con una salvietta disinfettante tra le raccolte dei pazienti.

  - Dopo la raccolta e il paziente ha lasciato l'area di raccolta, il personale addetto alla raccolta del laboratorio cambierà i guanti e utilizzerà il disinfettante per le mani in più fasi della rimozione dei DPI come indicato nella sezione Procedura di seguito per garantire l'assenza di contaminazione delle superfici toccate, compreso l'abito protettivo, visiera e maschera protettiva.

  - Dopo la rimozione dei DPI, il personale addetto alla raccolta del laboratorio si laverà le mani con acqua e sapone prima di iniziare la successiva raccolta del paziente.

  • Gli schermi facciali verranno puliti con una salvietta disinfettante tra ogni prelievo del paziente.
  • Maschere e camici protettivi possono essere conservati per il riutilizzo tra le raccolte dei pazienti se non si osserva o si sospetta alcuna contaminazione dei DPI.
• Flebotomia I campioni di sangue verranno raccolti in modo identico a quelli raccolti di routine per la pratica clinica, come descritto nella procedura di flebotomia SOP 6037 Anti-SARS-CoV-2 di Aditxt.
• Saliva Ai partecipanti verrà chiesto di sciacquarsi la bocca con acqua 5 minuti prima della raccolta. Verrà fornito loro un tubo da 3 ml e gli verrà chiesto di riempirlo (lasciando che la saliva si accumuli in bocca e poi sputandola nel tubo).
• Tamponi nasali I campioni di tampone nasale verranno raccolti in modo identico a quelli raccolti di routine per la pratica clinica, come descritto nella procedura di raccolta del tampone nasale SOP 6036 SARS-CoV-2 di Aditxt.
• Bastoncino con le dita

La raccolta del sangue capillare dal polpastrello verrà eseguita come segue:

• Pulire il sito della puntura (la punta del dito che il soggetto preferisce) con un tampone imbevuto di alcol e rimuovere la copertura protettiva dalla lancetta.
• Posizionare la lancetta perpendicolarmente alla parte inferiore del dito e forare la pelle premendo delicatamente la lancetta contro il sito di puntura finché non si attiva.
• Applicare una leggera pressione sul tessuto circostante. Scartare la prima goccia di sangue.
• Tenere il dito e il tubo capillare rivolti verso il basso. Tocca la punta del capillare alla gocciolina di sangue. Il tubo si riempirà automaticamente grazie all'effetto capillare. Raccogliere 3-4 gocce di sangue (150-250 microL).
• Dopo la raccolta del sangue, rimuovere il capillare dal tubo, smaltire e applicare pressione sul sito di puntura.
• Dopo la raccolta, capovolgere delicatamente la provetta diverse volte.

• Applicare il cerotto sul sito della puntura.

  4e. Visite di follow-up I soggetti saranno incoraggiati a tornare ad Aditxt ogni 1-2 mesi per ulteriori raccolte di campioni per un massimo di 2 anni. Un questionario aggiornato sarà compilato dal soggetto ad ogni visita di follow-up. I dati del questionario e di laboratorio verranno archiviati nel database dello studio e identificati solo in base al numero del soggetto, consentendo l'esecuzione di ulteriori studi sui dati ora deidentificati.

  4f. Procedure di laboratorio / Reporting Gli anticorpi anti-SARS-CoV-2 e l'attività degli anticorpi neutralizzanti saranno valutati mediante il metodo di citometria a flusso AditxtScoreTM di Aditx Therapeutics. Il test dell'antigene/virus verrà eseguito sul sistema iAMP COVID-19 di Atila Biosystems. I referti del laboratorio clinico che descrivono i risultati di questo test verranno forniti ai soggetti (esattamente come se avessero acquistato direttamente il test).

Inoltre, saranno rispettati i requisiti di segnalazione stabiliti dal Dipartimento dell'HHS degli Stati Uniti e dal Dipartimento della salute della Virginia. Il nostro approccio alla segnalazione di tutti i risultati di routine è coerente con le linee guida della FDA (Policy for Coronavirus Disease-2019 Tests during the Public Health Emergency (Revised)). I risultati di futuri test sperimentali eseguiti su campioni conservati saranno resi anonimi. Le persone non saranno informate dei futuri risultati dei test sperimentali.

AditxtScore™

o Nuovo metodo basato sulla citometria a flusso che consente il monitoraggio simultaneo degli anticorpi IgG, IgA e IgM contro 3 diversi antigeni COVID, accompagnato da un test per la corrispondente attività dell'anticorpo neutralizzante

Sistema iAMP COVID-19 (Atila Biosystems)

• Tecnologia PCR di amplificazione isotermica che rileva le sequenze sia del gene "N" che del gene ORF-1ab del virus SARS-CoV-2
• Approvato per l'uso dalla FDA nell'ambito di un EUA Aditxt offre attualmente questo servizio di test regolarmente).