Antibiotypisierung und Prävalenz virulenter Genotypen bei Helicobacter Pylori und ihre Auswirkungen auf das Ansprechen auf die Therapie
- Nachweis der primären antimikrobiellen Empfindlichkeit und Resistenz einer Helicobacter-pylori-Infektion.
- Nachweis von Resistenz- und Virulenzgenen einer Helicobacter-pylori-Infektion.
- Bewertung des Karzinogenitätsgens von Helicobacter-pylori.
- Die Bewertung des Ergebnisses und der Wirksamkeit des Antibiotika-Regimes wird in unserer Forschung verwendet.
- Bewertung der Wirkung anderer Faktoren wie Ernährung (fettige und scharfe Mahlzeit), Medikamente wie NSAIDs, Antibiotika für jede Ursache auf das Ansprechen von Helicobacter-pylori auf das Antibiotika-Regime.
Studienübersicht
Status
Bedingungen
Intervention / Behandlung
- Genetisch: Nachweis von vakuolisierendem Zytotoxin A (Vac A) und Zytotoxin-assoziiertem Gen A (Cag A) virulenten H.pylori-Genotypen durch Polymerase-Kettenreaktions-Amplifikation (PCR) in Magenbiopsien:
- Diagnosetest: Kultur und Sensitivität endoskopischer Magenbiopsien:
- Sonstiges: Histopathologische Untersuchung endoskopische Magenbiopsien:
- Verfahren: Obere Endoskopie
- Arzneimittel: empirische H.pylori-Therapien
- Diagnosetest: H.Pylori Ag im Stuhl
Detaillierte Beschreibung
Helicobacter pylori (H. pylori)-Infektion ist eine der häufigsten Infektionen beim Menschen und betrifft mehr als die Hälfte der Weltbevölkerung. Es wird angenommen, dass neue Infektionen als Folge einer direkten Übertragung von Mensch zu Mensch oder einer Kontamination der Umwelt auftreten.
Die Prävalenz der Infektion variiert stark in ländlichen Entwicklungsgebieten (mehr als 80 %) im Vergleich zu städtischen entwickelten Gebieten (weniger als 40 %), was auf unterschiedliche sozioökonomische und hygienische Bedingungen zurückzuführen ist .
Der vertikale Modus ist eine Infektion, die innerhalb derselben Familie vom Aszendenten zum Deszendenten übertragen wird, während die horizontale Übertragung den Kontakt mit Personen außerhalb der Familie oder die Kontamination der Umwelt beinhaltet.
Die meisten Menschen werden in der frühen Kindheit mit Helicobacter pylori infiziert; in Entwicklungsländern. Eine erfolgreiche Eradikation ist wichtig, um die Entwicklung von Antibiotikaresistenzen zu verhindern und die Anzahl der Behandlungen und Eingriffe zu reduzieren. Daher könnten nationale/regionale Antibiotikaresistenzdaten verwendet werden, um Behandlungsschemata für Helicobacter-pylori-Infektionen zu leiten.
Mehrere klinische Faktoren, die mit erhöhten Raten von Antibiotika-resistenten H. pylori in Verbindung stehen, einschließlich früherer Antibiotika-Exposition in der Anamnese, zunehmendes Alter, weibliches Geschlecht, ethnische Zugehörigkeit/Rasse, Ausmaß des Alkoholkonsums und Dyspepsie ohne Ulcus.
Die primäre Antibiotikaresistenz von H. pylori nimmt weltweit zu. Die Gesamtresistenzrate für Amoxicillin betrug 4,55 %; 27,22 % für Clarithromycin; 39,66 % für Metronidazol; und 22,48 % für Levofloxacin.
Daher ist das Ergebnis der Arzneimittelempfindlichkeit dieser Antibiotika notwendig, um das geeignete Arzneimittel für die erfolgreiche Ausrottung der Infektion auszuwählen.
Helicobacter pylori weist spezifische geografische Verteilungen auf, die mit den klinischen Ergebnissen zusammenhängen. Trotz der hohen Infektionsrate von H. pylori auf der ganzen Welt muss die genetische epidemiologische Überwachung von H. pylori noch verbessert werden.
Studientyp
Einschreibung (Tatsächlich)
Phase
- Unzutreffend
Kontakte und Standorte
Studienorte
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Asyut, Ägypten
- Nariman Zaghloul Bekhiet
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Teilnahmekriterien
Zulassungskriterien
Studienberechtigtes Alter
Akzeptiert gesunde Freiwillige
Beschreibung
Einschlusskriterien:
- Alle Patienten über 18 Jahre mit symptomatischer Helicobacter-pylori-Infektion, bei denen positives Helicobacter-pylori-Ag im Stuhl diagnostiziert wurde (naive Behandlung).
Ausschlusskriterien:
- Patienten, die für eine Endoskopie nicht in Frage kommen.
- Die Patienten sind unter 18 Jahre alt
- Ablehnung des Patienten
- Vorgeschichte der Verwendung von Antibiotika oder Protonenpumpenhemmern im letzten Monat.
Studienplan
Wie ist die Studie aufgebaut?
Designdetails
- Hauptzweck: Behandlung
- Zuteilung: N / A
- Interventionsmodell: Einzelgruppenzuweisung
- Maskierung: Keine (Offenes Etikett)
Waffen und Interventionen
Teilnehmergruppe / Arm |
Intervention / Behandlung |
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Sonstiges: Eine Gruppe von naiven H.Pylori-Infektionen wird einer oberen Endoskopie unterzogen.
Die obere Endoskopie wird unter vollständig septischen Bedingungen durchgeführt und mehrere Magenbiopsien aus Corpus und Antrum werden entnommen für:
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Die DNA-Extraktion mit dem Wizard® Genomic DNA Purification Kit (Promega-USA) erfolgt gemäß den Anweisungen des Herstellers.
Zum Nachweis von vakuolisierendem Zytotoxin A und Zytotoxin-assoziiertem Gen A-Gen wird eine Polymerase-Kettenreaktions-Amplifikation mit einer 9-minütigen anfänglichen Denaturierung bei 94 °C durchgeführt, gefolgt von 35 Zyklen von 1 Minute bei 94 °C, 45 Sekunden bei 60 °C C und 45 Sekunden bei 72 °C.
Die endgültige Extension wird für 5 Minuten bei 72 °C durchgeführt.
Zum Nachweis von vakuolisierendem Zytotoxin A (S1/S2, m1, m2) wird die PCR mit einer 9-minütigen anfänglichen Denaturierung bei 94 °C durchgeführt, gefolgt von 35 Zyklen von 1 Minute bei 94 °C, 45 Sekunden bei 56 °C , und 45 Sekunden bei 72˚C.
Die endgültige Extension wird für 5 Minuten bei 72 °C durchgeführt.
Amplifizierte DNA wird durch Agarose-Gelelektrophorese analysiert.
Eine positive Probe ergibt Banden bei DNA-Fragment 138 bp für Zytotoxin-assoziiertes Gen A, bei 259/286 bp für vakuolisierendes Zytotoxin A s1/s2 und 290 bp und 352 bp für m1 bzw. m2
Während der Endoskopie werden drei Biopsien aus Antrum und/oder Corpus entnommen und mit einem Urease-Schnelltest, auch bekannt als Campylobacter-ähnlicher Organismus-Test (Kimberly-Clark, USA), untersucht.
Kultur des Bakteriums auf Columbia-Agar plus 5-7 % defibriniertem Pferde- oder Schafblut und selektivem Dent-Supplement unter mikroaerophilen Bedingungen bei 37 Grad Celsius für 3-5 Tage.
Histologische Schnitte aus dem Antrum und den Körperregionen werden mit Giemsa-Färbung gefärbt.
Giemsa-Färbe-Arbeitslösung wurde wie folgt hergestellt: 40 ml Giemsa-Stammlösung mit 60 ml destilliertem Wasser.
Giemsa-Stammlösung wird wie folgt hergestellt: Giemsa-Pulver 4 g, Glycerin 250 ml und Methanol 250 ml.
Histologische Schnitte werden von einem Magen-Darm-Pathologen untersucht, um die Klassifizierung von Gastritis zu standardisieren.
Die histopathologische Klassifikation wird wie folgt aufgezeichnet (akute Gastritis, leichte bis mittelschwere bis schwere chronische Gastritis, Drüsenatrophie oder intestinale Metaplasie).
Dies wird am Patienten vor Beginn der empirischen Therapie durchgeführt und es werden mehrere Kieferhöhlen- und/oder Korpusbiopsien entnommen .
Der Patient muss mindestens 8 Stunden nüchtern sein. Oberkörper und Befunde werden im Bericht als Vorhandensein einer gastroösophagealen Refluxkrankheit, diffuse oder lokalisierte Magen- und/oder Zwölffingerdarmrötung, Schleimhautschwellung, Atrophie der Schleimhaut, Knötchenbildung, intestinale Metaplasie, Erosionen oder Geschwüre festgehalten .
Beginnen Sie mit einer Dreifachtherapie mit empirischen Antibiotika-Schemata ((Levofloxacin 400 mg einmal, Amoxicillin 1000 mg zweimal für 2 Wochen) und (Protonenpumpenhemmer zweimal für 1 Monat)).
Follow-up nach 2 Wochen nach Abschluss des Regimes durch Stool Ag im Stuhl
Jeder symptomatische Patient mit Helicobacter-pylori-Infektion, der über 18 Jahre alt ist, Patienten, bei denen positives Helicobacter-pylori-Ag im Stuhl diagnostiziert wurde, wird eingeschlossen. Beurteilung des Ansprechens im Labor, 2 Wochen nach Beendigung der empirischen Therapie. |
Was misst die Studie?
Primäre Ergebnismessungen
Ergebnis Maßnahme |
Maßnahmenbeschreibung |
Zeitfenster |
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Nachweis der Antibiotikakultur vor der Behandlung und Empfindlichkeitstest
Zeitfenster: bis zu 12 Monate
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Während der Endoskopie werden drei Biopsien aus Antrum und/oder Magenkorpus entnommen. Biopsien werden zur Identifizierung von H. pylori durch einen Urease-Schnelltest, auch bekannt als Campylobacter-ähnlicher Organismus-Test (Kimberly-Clark, USA), untersucht.
Kultur des Bakteriums auf Columbia-Agar (Oxoid-UK) plus 5-7 % defibriniertem Pferde- oder Schafblut und selektivem Dent-Supplement (Oxoid-UK) unter mikroaerophilen Bedingungen bei 37 Grad Celsius für 3-5 Tage.
Daher werden die Ermittler Prävalenz und Arten von Antibiotika-H.Pylori-Resistenzen in Biopsien nachweisen.
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bis zu 12 Monate
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Nachweis vakuolisierender Zytotoxin-A- und Zytotoxin-assoziierter Gen-A-virulenter Helicobacter-pylori-Genotypen durch Polymerase-Kettenreaktions-Amplifikation (PCR)
Zeitfenster: bis zu 12 Monate
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Die DNA-Extraktion mit dem Wizard® Genomic DNA Purification Kit (Promega-USA) erfolgt gemäß den Anweisungen des Herstellers.
Zum Nachweis von vakuolisierendem Zytotoxin A und Zytotoxin-assoziiertem Gen A-Gen wird eine Polymerase-Kettenreaktions-Amplifikation mit einer 9-minütigen anfänglichen Denaturierung bei 94 °C durchgeführt, gefolgt von 35 Zyklen von 1 Minute bei 94 °C, 45 Sekunden bei 60 °C C und 45 Sekunden bei 72 °C.
Die endgültige Extension wird für 5 Minuten bei 72 °C durchgeführt.
Zum Nachweis von vakuolisierendem Zytotoxin A (S1/S2, m1, m2) wird die PCR mit einer 9-minütigen anfänglichen Denaturierung bei 94 °C durchgeführt, gefolgt von 35 Zyklen von 1 Minute bei 94 °C, 45 Sekunden bei 56 °C , und 45 Sekunden bei 72˚C.
Die endgültige Extension wird für 5 Minuten bei 72 °C durchgeführt.
Amplifizierte DNA wird durch Agarose-Gelelektrophorese analysiert.
Eine positive Probe ergibt Banden bei DNA-Fragment 138 bp für Zytotoxin-assoziiertes Gen A, bei 259/286 bp für vakuolisierendes Zytotoxin A s1/s2 und 290 bp und 352 bp für m1 bzw. m2.
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bis zu 12 Monate
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Verhältnis der histopathologischen Untersuchung (Gastritis-Klassifikation) zum klinischen Bild und zur Resistenz.
Zeitfenster: bis zu 12 Monate
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Histopathologische Untersuchung endoskopischer Biopsien und Erkennung akuter oder chronischer Entzündungen, die durch H. pylori-Bakterien verursacht wurden.
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bis zu 12 Monate
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Sekundäre Ergebnismessungen
Ergebnis Maßnahme |
Maßnahmenbeschreibung |
Zeitfenster |
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Nachweis der Auswirkungen von Ernährung und Medikamenten auf das Ansprechen auf die Behandlung
Zeitfenster: bis zu 12 Monate
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Ermitteln Sie die Nahrungsaufnahme (fettige und scharfe Mahlzeit), den Drogenkonsum (wie NSAIDs, Antibiotika, Protonenpumpenhemmer im letzten Monat) anhand des Fragebogens.
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bis zu 12 Monate
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Mitarbeiter und Ermittler
Sponsor
Publikationen und hilfreiche Links
Allgemeine Veröffentlichungen
- Liu Y, Wang S, Yang F, Chi W, Ding L, Liu T, Zhu F, Ji D, Zhou J, Fang Y, Zhang J, Xiang P, Zhang Y, Zhao H. Antimicrobial resistance patterns and genetic elements associated with the antibiotic resistance of Helicobacter pylori strains from Shanghai. Gut Pathog. 2022 Mar 30;14(1):14. doi: 10.1186/s13099-022-00488-y.
- Deng L, He XY, Tang B, Xiang Y, Yue JJ. An improved quantitative real-time polymerase chain reaction technology for Helicobacter pylori detection in stomach tissue and its application value in clinical precision testing. BMC Biotechnol. 2020 Jun 22;20(1):33. doi: 10.1186/s12896-020-00624-z.
- Pokhrel N, Khanal B, Rai K, Subedi M, Bhattarai NR. Application of PCR and Microscopy to Detect Helicobacter pylori in Gastric Biopsy Specimen among Acid Peptic Disorders at Tertiary Care Centre in Eastern Nepal. Can J Infect Dis Med Microbiol. 2019 Feb 5;2019:3695307. doi: 10.1155/2019/3695307. eCollection 2019.
Nützliche Links
Studienaufzeichnungsdaten
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Studienabschluss (Tatsächlich)
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Zuerst eingereicht, das die QC-Kriterien erfüllt hat
Zuerst gepostet (Tatsächlich)
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Letztes Update gepostet (Tatsächlich)
Letztes eingereichtes Update, das die QC-Kriterien erfüllt
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Andere Studien-ID-Nummern
- APVGHP
Arzneimittel- und Geräteinformationen, Studienunterlagen
Studiert ein von der US-amerikanischen FDA reguliertes Arzneimittelprodukt
Studiert ein von der US-amerikanischen FDA reguliertes Geräteprodukt
Produkt, das in den USA hergestellt und aus den USA exportiert wird
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