Detección de CTC en pacientes sometidos a cirugía por cáncer colorrectal en estadio IV

Se necesitan técnicas más sensibles para detectar enfermedades ocultas en pacientes con CCR metastásico (mCRC), y el análisis perioperatorio de las células tumorales circulantes (CTC) puede brindar una excelente oportunidad para desarrollar métodos tan innovadores.

Determinar la cinética de la eliminación de CTC en la circulación: la detección perioperatoria de CTC tiene el potencial de explicar cómo y cuándo se eliminan las CTC en la sangre. Los hallazgos podrían explicar la naturaleza de las CTC con un impacto importante en la comprensión de la propagación metastásica y las aplicaciones clínicas relevantes.

Dado que este protocolo incluye extracciones de sangre en múltiples puntos temporales a diferentes distancias de las metástasis, los resultados podrían aclarar aún más si la rareza o ausencia de CTC en la sangre periférica de algunos pacientes con CCRm puede explicarse por dilución. La comparación de pacientes con metástasis hepáticas a pulmonares por CCR podría ayudar a explicar los diferentes patrones de diseminación a órganos. Los resultados de este estudio podrían establecer las CTC como un biomarcador pronóstico que identifique a los candidatos que se beneficiarán de la metastasectomía o para aquellos que son candidatos para tratamientos sistémicos adicionales o paliativos debido a un alto riesgo de recurrencia posterior.

• Desarrollar un sistema eficaz para el aislamiento, la enumeración, el enriquecimiento y una mayor caracterización de las CTC vivas: uno de los problemas actuales del análisis de las CTC es el enriquecimiento de esas células raras de la sangre. Planeamos analizar la sangre extraída perioperatoriamente usando el dispositivo flexible micro spring array (FMSA). La FMSA mitiga el estrés experimentado por los CTC durante su aislamiento de la sangre y permite una captura viable. El diseño geométrico y las presiones de filtración se han optimizado para maximizar la eficiencia de captura, el enriquecimiento contra los leucocitos y la viabilidad de las células tumorales. Se analizará la sangre periférica y la sangre del entorno directo del tumor (tomada del sistema de succión del quirófano) para comparar la sensibilidad del dispositivo FMSA y CellSearch. Dado que la FMSA permite el aislamiento de CTC vivos, se procesarán para una mayor caracterización de células individuales.
• Encuentre características de diferentes poblaciones de CTC: Nuestra hipótesis es que las CTC se enriquecerán con marcadores de células madre cancerosas, así como con marcadores de mal pronóstico y crecimiento tumoral agresivo. Nuestro enfoque novedoso para examinar y cuantificar un panel de biomarcadores simultáneamente con el análisis de los marcadores de CTC utilizados por el sistema CellSearch para analizar las CTC es único. Vemos nuestros ensayos como "biopsias líquidas" potenciales que pueden detectar marcadores de pronóstico, sensibilidad a la quimioterapia, respuesta a la terapia, así como proteínas involucradas en la proliferación, la apoptosis y la respuesta inmunitaria.

Además, planeamos realizar análisis de células individuales de mutaciones genéticas y expresión génica. La secuenciación genómica de próxima generación de CTC individuales puede permitirnos determinar una firma genética para las CTC colorrectales e identificar nuevos biomarcadores para la detección de CTC, el control de enfermedades y la eficacia terapéutica. Además, se estudiará el grado de heterogeneidad entre las CTC inicialmente aisladas, que pueden compararse con el tumor primario y las CTC que crecen in vitro. El análisis de CTC individuales tiene el potencial de identificar nuevos genes y vías de transducción de señales que se activan en las CTC y comparar este perfil genómico con el del tumor primario y la metástasis del paciente. El análisis genómico de células individuales en CTC es muy innovador y proporcionará información importante para el seguimiento de enfermedades, además de arrojar luz sobre la biología subyacente de las CTC.