Detecção de CTCs em pacientes submetidos a cirurgia para câncer colorretal em estágio IV

Técnicas mais sensíveis para detectar doenças ocultas são necessárias para pacientes com CRC metastático (mCRC), e a análise perioperatória de células tumorais circulantes (CTCs) pode fornecer uma excelente oportunidade para desenvolver esses métodos inovadores.

Determinar a cinética de liberação de CTC na circulação: A detecção perioperatória de CTC tem o potencial de explicar como e quando as CTCs são liberadas no sangue. Os achados podem explicar a natureza das CTCs com impacto importante na compreensão da disseminação metastática e aplicações clínicas relevantes.

Uma vez que este protocolo inclui coletas de sangue em vários pontos de tempo em diferentes distâncias das metástases, os resultados podem esclarecer ainda mais se a raridade ou ausência de CTCs no sangue periférico de alguns pacientes com mCRC pode ser explicada pela diluição. A comparação de pacientes com metástases hepáticas e pulmonares de CCR pode ajudar a explicar os diferentes padrões de disseminação do órgão. Os resultados deste estudo podem estabelecer as CTCs como um biomarcador prognóstico que identifica os candidatos que se beneficiarão da metastasectomia ou para aqueles que são candidatos a tratamentos sistêmicos adicionais ou paliativos devido ao alto risco de recorrência posterior.

• Desenvolva um sistema eficaz para isolamento, enumeração, enriquecimento e caracterização adicional de CTCs vivas: Uma das questões atuais da análise de CTC é o enriquecimento dessas raras células do sangue. Planejamos analisar o sangue coletado no perioperatório usando o dispositivo flexível de micro molas (FMSA). A FMSA atenua o estresse experimentado pelos CTCs durante seu isolamento do sangue e permite uma captura viável. O design geométrico e as pressões de filtração foram otimizados para maximizar a eficiência de captura, enriquecimento contra leucócitos e viabilidade de células tumorais. Sangue periférico, bem como sangue do ambiente tumoral direto (retirado do sistema de sucção OR) serão analisados ​​para comparar a sensibilidade do dispositivo FMSA e CellSearch. Como o FMSA permite o isolamento de CTCs vivas, elas serão processadas para posterior caracterização de célula única.
• Encontrar características de diferentes populações de CTC: Nossa hipótese é que as CTCs serão enriquecidas para marcadores de células-tronco cancerígenas, bem como marcadores para mau prognóstico e crescimento tumoral agressivo. Nossa nova abordagem para rastrear e quantificar um painel de biomarcadores simultaneamente com a análise dos marcadores CTC utilizados pelo sistema CellSearch para analisar os CTCs é única. Vemos nossos ensaios como potenciais "biópsias líquidas" que podem rastrear marcadores de prognóstico, sensibilidade à quimioterapia, resposta à terapia, bem como proteínas envolvidas na proliferação, apoptose e resposta imune.

Além disso, planejamos realizar análise de células únicas de mutações genéticas e expressão gênica. O sequenciamento genômico de próxima geração de CTCs individuais pode nos permitir determinar uma assinatura genética para CTCs colorretais e identificar novos biomarcadores para detecção de CTC, monitoramento de doenças e eficácia terapêutica. Além disso, será estudada a extensão da heterogeneidade entre CTCs inicialmente isoladas, que podem ser comparadas ao tumor primário e CTCs crescendo in vitro. A análise única de CTC tem o potencial de identificar novos genes e vias de transdução de sinal que são ativadas em CTCs e comparar esse perfil genômico com o do tumor primário e da metástase do paciente. A análise genômica de célula única em CTCs é altamente inovadora e fornecerá informações importantes para o monitoramento de doenças, bem como lançará luz sobre a biologia subjacente das CTCs.