Detekce CTC u pacientů podstupujících chirurgický zákrok pro stadium IV kolorektálního karcinomu

U pacientů s metastatickým CRC (mCRC) jsou zapotřebí citlivější techniky k detekci okultního onemocnění a peroperační analýza cirkulujících nádorových buněk (CTC) může poskytnout vynikající příležitost k vývoji takových inovativních metod.

Určete kinetiku vylučování CTC do oběhu: Peroperační detekce CTC má potenciál vysvětlit, jak a kdy jsou CTC vylučovány do krve. Zjištění by mohla vysvětlit povahu CTC s důležitým dopadem na pochopení metastatického šíření a příslušných klinických aplikací.

Protože tento protokol zahrnuje odběry krve ve více časových bodech v různých vzdálenostech od metastáz, výsledky by mohly dále objasnit, zda lze vzácnost nebo nepřítomnost CTC v periferní krvi některých pacientů s mCRC vysvětlit ředěním. Srovnání pacientů s CRC jaterními a plicními metastázami může pomoci vysvětlit různé vzorce orgánového šíření. Výsledky této studie by mohly stanovit CTC jako prognostický biomarker identifikující kandidáty, kteří budou mít prospěch z metastazektomie, nebo pro ty, kteří jsou kandidáty na další nebo paliativní systémovou léčbu kvůli vysokému riziku pozdější recidivy.

• Vyvinout účinný systém pro izolaci, počítání, obohacování a další charakterizaci živých CTC: Jedním ze současných problémů analýzy CTC je obohacování těchto vzácných buněk z krve. Plánujeme analyzovat peroperačně odebranou krev pomocí flexibilního zařízení micro spring array (FMSA). FMSA zmírňuje stres, který CTC zažívají během jejich izolace z krve, a umožňuje životaschopné zachycení. Geometrický design a filtrační tlaky byly optimalizovány tak, aby maximalizovaly účinnost zachycení, obohacení proti leukocytům a životaschopnost nádorových buněk. Pro porovnání citlivosti zařízení FMSA a CellSearch bude analyzována periferní krev i krev z přímého prostředí nádoru (odebrána z OR odsávacího systému). Protože FMSA umožňuje izolaci živých CTC, budou zpracovány pro další charakterizaci jednotlivých buněk.
• Najděte charakteristiky různých populací CTC: Předpokládáme, že CTC budou obohaceny o markery rakovinných kmenových buněk i markery pro špatnou prognózu a agresivní růst nádoru. Náš nový přístup k screeningu a kvantifikaci panelu biomarkerů současně s analýzou CTC markerů využívaných systémem CellSearch k analýze CTC je jedinečný. Na naše testy pohlížíme jako na potenciální „tekuté biopsie“, které mohou skrínovat markery prognózy, citlivosti na chemoterapii, odpovědi na terapii, stejně jako proteinů zapojených do proliferace, apoptózy a imunitní odpovědi.

Dále plánujeme provést jednobuněčnou analýzu genových mutací a genové exprese. Sekvenování genomu nové generace jednotlivých CTC nám může umožnit určit genetický podpis pro kolorektální CTC a identifikovat nové biomarkery pro detekci CTC, monitorování onemocnění a terapeutickou účinnost. Dále bude studován rozsah heterogenity mezi původně izolovanými CTC, které lze srovnat s primárním nádorem a CTC rostoucími in vitro. Analýza jednotlivých CTC má potenciál identifikovat nové genové a signální transdukční dráhy, které jsou aktivovány v CTC, a porovnat tento genomický profil s profilem primárního nádoru a metastázy pacienta. Jednobuněčná genomická analýza v CTC je vysoce inovativní a poskytne důležité informace pro monitorování onemocnění a také osvětlí základní biologii CTC.