Correlación entre la mutación de EGFR usando cfDNAs y células tumorales circulantes en pacientes con NSCLC

La mutación de la tirosina quinasa del EGFR se observa con frecuencia en nuestro NSCLC, especialmente en el adenocarcinoma.1 El receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) del receptor de tirosina quinasas (TK) regula muchos procesos metabólicos y fisiológicos del desarrollo. En las células tumorales, la actividad TK de EGFR puede estar desregulada por varios mecanismos, incluida la mutación del gen EGFR, el aumento del número de copias del gen y la sobreexpresión de la proteína EGFR.1 La activación incorrecta de EGFR TK da como resultado una mayor supervivencia, proliferación, invasión y metástasis de células malignas. La sobreexpresión de EGFR se observa en tumores de más del 60 % de los pacientes con cáncer de pulmón de células no pequeñas (CPCNP) metastásico y se correlaciona con un mal pronóstico.2 El tratamiento con los inhibidores reversibles EGFR TK (TKI), gefitinib y erlotinib, da como resultado una actividad antitumoral dramática en un subgrupo de pacientes con NSCLC. La secuenciación del gen EGFR reveló que la mayoría de los tumores que respondían a los TKI de EGFR albergaban mutaciones en el dominio TK de EGFR. Para los pacientes cuyos tumores exhiben mutaciones de EGFR, la tasa de respuesta a gefitinib y erlotinib es de aproximadamente 75 %, lo que sugiere que estas mutaciones, al menos en parte, impulsan la transformación maligna.

Sin embargo, el tiempo libre de enfermedad hasta la progresión fue aún inferior a 1 año en la mayoría de los estudios.3-5 Más de la mitad de los pacientes adquirieron resistencia por la nueva mutación de resistencia EGFR T790M. Una segunda biopsia en el momento de la progresión se está convirtiendo en un problema. Sin embargo, solo alrededor del 30 % de los pacientes con NSCLC pueden someterse a pruebas genéticas para predecir la respuesta a la terapia diana debido al riesgo y la dificultad de obtener tejidos adecuados de los tumores pulmonares primarios mediante biopsia. El seguimiento en serie de la aparición de mutaciones resistentes casi no es posible. Recientemente, los ADN libres circulantes (cfDNA) se han convertido en un tema prometedor en la investigación del cáncer. El cfDNA se puede usar como una biopsia líquida, lo que permite tomar muestras de sangre repetidas y rastrear los cambios en el estado de la mutación a lo largo de un tratamiento contra el cáncer, allanando el camino para un uso potencial en el seguimiento de la respuesta al tratamiento, la evaluación del pronóstico o el control de la recurrencia. .6 Se sabe desde hace más de cien años que se pueden encontrar células tumorales diseminadas en la circulación de pacientes con cáncer metastásico y se ha planteado la hipótesis de que estas células tumorales circulantes (CTC) pueden representar células madre cancerosas o una población celular con alto potencial metastásico. 7 El mayor desafío ya que se puede encontrar tan solo una CTC en el fondo de 105-106 células mononucleares de sangre periférica.8 Las CTC son una alternativa atractiva al tejido tumoral para el análisis de biomarcadores, incluida la mutación de EGFR. Las CTC se pueden obtener a partir de una extracción de sangre de rutina con un riesgo e inconveniente mínimos para el paciente en comparación con una biopsia fresca. Otra faceta atractiva de las CTC como tejido de diagnóstico sustituto es la idea de que las CTC también podrían constituir una "biopsia líquida" como cfDNA y proporcionar información en tiempo real sobre el estado actual de la enfermedad del paciente.9,10 El análisis del estado de los biomarcadores en las CTC recopiladas antes del tratamiento podría usarse para seleccionar una terapia dirigida adecuada, mientras que el muestreo longitudinal repetido durante el tratamiento podría usarse para detectar la aparición de marcadores de resistencia y potencialmente permitir el cambio a una terapia más adecuada.

Una comparación lado a lado del análisis de mutación de EGFR en el ADN extraído de células tumorales circulantes (CTC) versus cfDNA del plasma sugirió que el análisis mutacional de las CTC capturadas en la plataforma CellSearch fue bajo en comparación con la frecuencia de mutaciones de EGFR identificadas en plasma. 11 Sin embargo, esta limitación podría estar relacionada con la plataforma CellSearch utilizada11, ya que otras plataformas CTC (p. ej., el biochip CTC) tienen mayor sensibilidad y especificidad para los análisis mutacionales de EGFR12. Las nuevas tecnologías, como la secuenciación de próxima generación y la PCR digital (Figura 1), que pueden permitir una cuantificación más precisa de cfDNA y también de CTC, ofrecen oportunidades para diseñar tratamientos más apropiados. Los análisis longitudinales de EGFR y otras mutaciones en cfDNA y CTC bien podrían resultar una técnica no invasiva ideal para ser incluida en el repertorio del oncólogo al momento de asignar o monitorear el tratamiento en pacientes con NSCLC.

En este estudio, los investigadores recolectarán sangre de pacientes con NSCLC que albergan una mutación de EGFR en muestras de biopsia. Se separarán la capa leucocitaria y el suero/plasma y se extraerá el ADN. Los investigadores comprobarán la mutación del EGFR mediante secuenciación de próxima generación o PCR digital. La sangre de voluntarios sin pacientes con cáncer de pulmón también se recolectará como estándar. El seguimiento en serie del cambio de mutación de EGFR cada mes en pacientes con cáncer se correlacionará con el curso clínico. Los investigadores esperan que la detección de la mutación de EGFR y el cambio en serie en la sangre del paciente puedan ofrecer un marcador para el diagnóstico temprano y la recaída temprana.