Evaluación de la expresión de PD1/PDL1 en células sanguíneas y tejido tumoral, su papel como diana pronóstica en pacientes con NSCLC

Este es un estudio de cohorte prospectivo que incluye pacientes con NSCLC estadios IIIA, IIIB y IV de la clínica de cáncer de pulmón del Instituto Nacional del Cáncer (INCAN)

Muestras clínicas. Consentimiento previo e informado antes de recibir cualquier tratamiento, se obtendrá muestra de 15 ml de sangre periférica de cada sujeto incluido en el estudio (pacientes y controles). Se utilizan células mononucleares de sangre periférica (PBMC) de diferentes grupos de sujetos separados por gradiente de centrifugación (Polymorphprep, Accurate Chemical). Las células se resuspenden en dimetilsulfóxido (DMSO) y suero fetal bovino (FBS) al 10% al 90% a una concentración de 1 millón de células por ml y se mantienen en nitrógeno líquido hasta su uso.

Evaluación de PD-1, PD-L1 por citometría de flujo. Se utilizan los siguientes anticuerpos monoclonales dirigidos contra antígenos de superficie celular de humanos: anti-PD-1, anti-PD-L1, anti-PD-L2, anti-grupo de diferenciación (CD) 3, anti-CD4, anti-CD8, anti-CD14, anti-CD16, anti-CD56, anti-CD19, anti-CD20.

Inmunolocalización de PD-1, PD-L1 en tejido tumoral de pulmón de pacientes con NSCLC. Tinción inmunohistoquímica (IHC). De la biopsia pulmonar se obtienen bloques de parafina, y se procesan mediante técnica IHC para expresión antitumoral de PD1/PDL1.V La inmunotinción de PD-L1 se clasificó en dos grupos según intensidad y extensión: (a) negativa, cuando no se detectó tinción o tinción positiva en <5% de las células; y (b) positivo, cuando la tinción membranosa estaba presente en el 5% de las células.