Valutazione dell'espressione di PD1 / PDL1 su cellule del sangue e tessuto tumorale, il loro ruolo come bersaglio prognostico nei pazienti con NSCLC

Questo è uno studio prospettico di coorte che include pazienti con NSCLC in stadio IIIA, IIIB e IV della clinica per il cancro del polmone del National Cancer Institute (INCAN)

Campioni clinici. Consenso preventivo e informato prima di ricevere qualsiasi trattamento, prelevare un campione di 15 ml di sangue periferico di ciascun soggetto incluso nello studio (pazienti e controlli). vengono utilizzate cellule del sangue periferico mononucleare (PBMC) provenienti da diversi gruppi di soggetti separati dal gradiente di centrifugazione (Polymorphprep, Accurate Chemical). Le cellule vengono risospese in dimetilsolfossido (DMSO) e 10% di siero bovino fetale (FBS) al 90% a una concentrazione di 1 milione di cellule per ml e mantenute in azoto liquido fino all'uso.

Valutazione di PD-1, PD-L1 mediante citometria a flusso. Vengono utilizzati i seguenti anticorpi monoclonali diretti contro antigeni di superficie cellulare dell'uomo: anti-PD-1, anti-PD-L1, anti-PD-L2, anti-cluster di differenziazione (CD) 3, anti-CD4, anti-CD8, anti-CD14, anti-CD16, anti-CD56, anti-CD19, anti-CD20.

Immunolocalizzazione di PD-1, PD-L1 nel tessuto tumorale polmonare di pazienti con NSCLC. Colorazione immunoistochimica (IHC). La biopsia polmonare si ottiene in blocchi di paraffina e vengono elaborati con la tecnica IHC per l'espressione antitumorale di PD1 / PDL1.V L'immunocolorazione PD-L1 è stata classificata in due gruppi in base all'intensità e all'estensione: (a) negativo, quando non è stata rilevata alcuna colorazione o colorazione positiva in <5% delle cellule; e (b) positivo, quando la colorazione membranosa era presente nel P5% delle cellule.