Ensayo LAMP versus PCR para la detección de genes blaNDM-1 y blaKPC

La resistencia a carbapenémicos en bacterias gramnegativas se ha convertido en un problema mundial y ha provocado una epidemia mundial que sigue creciendo.

La enzima New Delhi metalo-beta-lactamase 1 (NDM-1) que confiere resistencia a múltiples fármacos está codificada por el gen New Delhi metalo-beta-lactamase 1 (blaNDM-1)]. NDM-1 inactiva las principales clases de antibióticos betalactámicos, incluidos los carbapenémicos, mediante la escisión de los anillos betalactámicos. NDM-1 se informó en 11 especies bacterianas diferentes, incluidas Escherichia coli, Klebsiella sp., Shigella boydii y Vibrio cholera, lo que indica el potencial de la transferencia horizontal de genes.

Las enzimas carbapenemasas (KPC) de Klebsiella pneumoniae, pertenecientes a la clase A (serina carbapenemasas) e inhibidas por el ácido borónico, se han convertido rápidamente en un problema mundial entre las Enterobacteriaceae, Pseudomonas aeruginosa y Acinetobacter baumannii .

En la terapia de enfermedades infecciosas, la administración de agentes antimicrobianos adecuados es esencial para prevenir la aparición y propagación de bacterias resistentes. Sin embargo, las pruebas convencionales de susceptibilidad a los antimicrobianos (AST), basadas en el crecimiento bacteriano, requieren mucho tiempo; por lo tanto, se necesita un ensayo rápido y simple para la selección oportuna de antibióticos apropiados en laboratorios clínicos, como la amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP).

LAMP, desarrollado por el investigador japonés Notomi, es un nuevo método de amplificación de genes que puede completar la amplificación del ADN en condiciones isotérmicas. LAMP es una técnica de amplificación por desplazamiento de cadena, que utiliza un conjunto de 4 a 6 cebadores de oligonucleótidos especialmente diseñados y una ADN polimerasa (Bst) específica. A través del proceso de amplificación por desplazamiento de cadena, se produce una estructura de ADN en forma de mancuerna que sirve como plantilla para la amplificación del ciclo. La falta de necesidad de un termociclador, la velocidad de la reacción y hacen de LAMP una plataforma prometedora para el desarrollo de una herramienta cercana al paciente simple y sensible para la detección molecular de genes en entornos con recursos limitados.

LAMP es la tecnología de amplificación de ácidos nucleicos más popular y mejor establecida entre las alternativas para la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Los pasos de las pruebas genéticas incluyen la extracción de ácido nucleico de las muestras, la amplificación de genes y la detección. Estos pasos requieren una habilidad considerable y equipos e instalaciones costosos, lo que dificulta la realización de pruebas convenientes en cualquier lugar determinado. Para superar estas limitaciones, se desarrolló un nuevo método de amplificación de genes, la reacción LAMP, que combina rapidez, simplicidad y alta especificidad.