Ensaio LAMP Versus PCR para Detecção de Genes blaNDM-1 e blaKPC

A resistência aos carbapenêmicos em bactérias gram-negativas tornou-se um problema mundial e causou uma epidemia global que continua a crescer.

A enzima metalo-beta-lactamase 1 de New Delhi (NDM-1) que confere resistência a múltiplas drogas é codificada pelo gene da metalo-beta-lactamase 1 de New Delhi (blaNDM-1)]. O NDM-1 inativa as principais classes de antibióticos beta-lactâmicos, incluindo os carbapenêmicos, pela clivagem dos anéis b-lactâmicos. O NDM-1 foi relatado em 11 espécies bacterianas diferentes, incluindo Escherichia coli, Klebsiella sp., Shigella boydii e Vibrio cholera, indicando o potencial de transferência horizontal de genes.

As enzimas Klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC), pertencentes à classe A (serina carbapenemases) e inibidas pelo ácido borônico, tornaram-se rapidamente um problema global entre as Enterobacteriaceae, Pseudomonas aeruginosa e Acinetobacter baumannii.

Na terapia de doenças infecciosas, a administração de agentes antimicrobianos adequados é essencial para prevenir o surgimento e disseminação de bactérias resistentes. No entanto, o teste convencional de suscetibilidade antimicrobiana (AST), baseado no crescimento bacteriano, é demorado; portanto, um ensaio rápido e simples é necessário para a seleção oportuna de antibióticos apropriados em laboratórios clínicos, como amplificação isotérmica mediada por loop (LAMP).

O LAMP, desenvolvido pelo pesquisador japonês Notomi, é um novo método de amplificação de genes que pode completar a amplificação do DNA em condições isotérmicas. LAMP é uma técnica de amplificação de deslocamento de fita, que utiliza um conjunto de 4 a 6 primers oligonucleotídicos especialmente projetados e uma DNA polimerase específica (Bst). Por meio do processo de amplificação por deslocamento de fita, é produzida uma estrutura de DNA em forma de haltere que serve como modelo para a amplificação do ciclo. A falta de necessidade de um termociclador, a velocidade da reação e tornam o LAMP uma plataforma promissora para o desenvolvimento de uma ferramenta simples e sensível próxima ao paciente para a detecção molecular de genes em ambientes com recursos limitados.

LAMP é a tecnologia de amplificação de ácidos nucleicos mais popular e bem estabelecida entre as alternativas para a reação em cadeia da polimerase (PCR). As etapas do teste genético incluem extração de ácido nucleico das amostras, amplificação do gene e detecção. Essas etapas exigem habilidade considerável e equipamentos e instalações caros, tornando difícil o teste conveniente em qualquer local. Para superar essas limitações, foi desenvolvido um novo método de amplificação de genes, a reação LAMP, que combina rapidez, simplicidade e alta especificidade.