Perfil de aminoácidos y respuesta sintética de proteínas musculares al consumo de carne o alternativas de origen vegetal

Diseño del estudio:

La primera visita será una breve reunión realizada por Zoom con una de las investigadoras (Karine Schaal), quien repasará los detalles del estudio con la voluntaria, responderá sus preguntas y obtendrá el consentimiento informado. Los sujetos firmarán el consentimiento informado electrónicamente, utilizando DocuSign. Los sujetos recibirán una copia de su formulario de consentimiento informado firmado. Se guardará una copia impresa del formulario de consentimiento en un archivador cerrado con llave en la oficina del investigador principal.

Los voluntarios del estudio acudirán al Centro de Investigación Clínica CTSC (CCRC) en cuatro ocasiones distintas. El CCRC está ubicado en el Cypress Building adyacente al UC Davis Medical Center (2221 Stockton Blvd, Suite D, Sacramento CA 95817).

Las cuatro visitas del estudio serán visitas de prueba programadas durante un período de dos semanas (es decir, dos veces por semana durante 2 semanas), a la misma hora en la mañana siguiente y durante la noche (> 12 horas) de ayuno. Se les pedirá que se abstengan de hacer ejercicio vigoroso, cafeína, nicotina y alcohol durante las 24 horas previas a cada visita. Se les pedirá a las voluntarias que programen sus visitas de estudio dentro de las dos primeras semanas de su ciclo menstrual (a partir del primer día del sangrado menstrual), para controlar las fluctuaciones de las hormonas ováricas que pueden afectar la digestión y el metabolismo.

Al llegar al CCRC en la primera visita de prueba, se medirá la altura y el peso de cada voluntario.

I. Extracción de sangre inicial. Luego, los sujetos se colocarán en salas de prueba individuales, equipadas con un sillón de flebotomía reclinable. Un enfermero registrado o un enfermero practicante insertará un catéter 22G en una vena del antebrazo y se recolectará una muestra inicial de sangre de referencia de 3,5 ml.

II. Comida de prueba.

Después de recolectar la muestra de sangre de referencia, los sujetos consumirán una de las siguientes cuatro hamburguesas en cantidades isonitrogenadas para entregar 20 g de proteína:

• 106 g de hamburguesa de carne molida (85 % magra + 15 % grasa)
• 118 g de carne molida de cerdo (72,5 % magro + 27,5 % grasa)
• 113 g de hamburguesa Beyond Meat®
• 113 g de hamburguesa de tofu

Cada alimento se pesará antes de cocinar. Las hamburguesas de res, cerdo y Beyond® se asarán en una parrilla eléctrica interior hasta que la temperatura interna alcance los 165 °F para cumplir con las recomendaciones del USDA para la seguridad alimentaria (carne de res y cerdo, mínimo 160 °F) y las instrucciones del fabricante (Beyond Meat®) . Las hamburguesas de tofu están precocinadas y se calentarán asándolas a la parrilla durante 2 minutos, según las recomendaciones del fabricante. La temperatura interna de las hamburguesas se controlará mediante un termómetro para carne. Las hamburguesas se servirán a los voluntarios tan pronto como terminen de cocinar.

Se pedirá a los sujetos que consuman cada hamburguesa sin bollos ni condimentos en un período de 10 minutos y se les indicará que la mastiquen bien. También se les pedirá que beban un vaso de agua de 6 onzas con la comida.

tercero Extracción de sangre posprandial.

Luego del consumo de la comida de prueba, los participantes permanecerán en el sitio de investigación, en su sala de prueba individual, durante otras 3 horas, sentados en silencio; pueden traer libros o dispositivos electrónicos para pasar el tiempo. Se obtendrán cinco muestras de sangre más de 3,5 ml cada una a los 30, 60, 90, 120 y 180 minutos después de la comida de prueba, con un total de seis extracciones de sangre de 3,5 ml por visita (21 ml por visita) y 84 ml de sangre extraída en total. para cada sujeto que complete todo el estudio.

La sangre se recogerá en tubos de separación de suero de 3,5 ml. Se utilizarán aproximadamente 50 microlitros de sangre completa para medir la glucosa en sangre dentro de los 5 minutos posteriores a la extracción. El resto se dejará coagular durante 1 h antes de la centrifugación a 1000 x g durante 10 minutos. El suero se congelará y se mantendrá a -80 °C hasta que se procese. Se utilizarán 100 microlitros de cada muestra de suero para determinar las concentraciones de aminoácidos mediante cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) en el Núcleo de Proteómica de UC Davis. Se utilizarán otros 100 microlitros para medir las concentraciones de insulina mediante inmunoensayo ligado a enzimas. El resto del suero se utilizará para desarrollar el bioensayo mTORC1.

El orden en que los sujetos reciben cada comida de prueba se aleatorizará para evitar cualquier efecto de orden, y se dará al menos un período de lavado de dos días entre visitas.