Tolerabilidad de un grano antiguo en pacientes con sensibilidad al trigo no celíaca
Tolerabilidad de un grano antiguo en pacientes con sensibilidad al trigo no celíaca. Un estudio clínico y una búsqueda de biomarcadores de diagnóstico.
Los pacientes que padecen problemas relacionados con el trigo, en ausencia de un diagnóstico de enfermedad celíaca o alergia al trigo, pueden sufrir sensibilidad al trigo no celíaca (NCWS). Se caracteriza por síntomas tanto gastrointestinales (GI) como extraintestinales, que mejoran con la eliminación de la ingesta de trigo. Hasta la fecha no se ha demostrado ninguna explicación definitiva de los mecanismos patogénicos del NCWS y, de manera similar, no se ha reconocido ningún biomarcador de diagnóstico no invasivo específico. Se estima que la prevalencia del NCWS está en un amplio rango, a nivel mundial, entre 0,6% y 13%, y su presentación clínica se superpone con el síndrome del intestino irritable (SII). Identificar a los pacientes con NCWS entre aquellos con una presentación clínica similar al SII puede permitir curar esta condición crítica y reducir los costos sociales. Sin embargo, nunca se ha demostrado la necesidad real de un estricto cumplimiento de una dieta sin trigo (DMA) en el NCWS. En este contexto, la investigación está tratando activamente de encontrar variedades de trigo con baja o nula reactividad inmune para usarlas en el tratamiento de pacientes con NCWS. La evidencia preliminar respalda la suposición de que las especies de trigo diploides, como Triticum monococcum (TM), en comparación con las comunes (Triticum aestivum (TA)), podrían poseer un menor potencial inmunogénico en pacientes con NCWS.
El primer objetivo de nuestro proyecto es verificar si el uso de un trigo diploide (TM), con menores concentraciones y bioactividad de Inhibidores de Amilasa-Tripsina (ATIs) y con proteínas gliadinas tiene una mejor digestibilidad, en comparación con un hexaploide ( TA) podría mejorar tanto los síntomas como la calidad de vida (CdV) de los sujetos del NCWS. El segundo objetivo es la identificación de biomarcadores serológicos no invasivos para el diagnóstico del NCWS. El tercer objetivo es identificar linfocitos de células T capaces de reconocer péptidos afines de las proteínas del trigo para clasificar y controlar mejor a los pacientes afectados por NCWS.
Para lograr estos resultados hemos planificado un ensayo clínico prospectivo, doble ciego y cruzado, en el que se expondrán pacientes ya diagnosticados con NCWS (según criterios internacionales y con una prueba de provocación con trigo doble ciego y controlada con placebo), siguiendo una estricta DMA. en doble ciego tanto para TM como para TA. Todos los pacientes serán evaluados clínicamente en los diferentes momentos con escalas validadas para evaluar la tolerabilidad de la TM. Además, se estudiará su permeabilidad intestinal, activación inmunológica y patrones de microbiota intestinal mediante técnicas tanto in vitro como in vivo. Finalmente, se estudiará un subconjunto de pacientes elegido al azar mediante transcriptoma unicelular y secuenciación del receptor de células T (TCR) en muestras de biopsia por rectoscopia para identificar linfocitos de células T capaces de reconocer péptidos afines de las proteínas del trigo. Si tiene éxito, demostraremos que un régimen dietético con MT sería una alternativa adecuada y menos costosa a una DMA en sujetos con NCWS, y también podríamos desentrañar las bases fisiopatológicas de esta condición, identificando, al mismo tiempo, un potencial no biomarcador invasivo.
Descripción general del estudio
Estado
Condiciones
Descripción detallada
Estado del arte La asociación entre la ingesta de trigo y los "trastornos relacionados con el trigo" (WRD, por sus siglas en inglés) se conoce desde hace mucho tiempo, incluidas patologías como la enfermedad celíaca (EC) y la alergia al trigo (WA). Recientemente se ha identificado una nueva condición no alérgica y no autoinmune: la sensibilidad al gluten no celíaca (SGNC). Esto se caracteriza por síntomas tanto gastrointestinales (GI), muy similares a los del síndrome del intestino irritable (SII) (p.ej. dolor abdominal, diarrea, etc.), y extraintestinales (ej. artromialgias, anemia, etc.), que mejoran con una dieta libre de trigo (DMA).
Las tasas de prevalencia de NCGS oscilan entre el 0,6% y el 13% en la población general y, dada la falta de un biomarcador, su diagnóstico se basa en: 1) exclusión de EC y WA; 2) regresión de los síntomas según la DMA; 3) recurrencia de los síntomas en una prueba doble ciego controlada con placebo (DBPCC) con trigo.
Los médicos reconocen una superposición significativa entre la NCGS y el SII y se sabe que el SII afecta aproximadamente al 25% de la población general. Por lo tanto, si un porcentaje de pacientes con SII pudiera beneficiarse de una DMA, esto tendría un impacto fundamental en sus costos sociosanitarios, estimándose que sus costos indirectos (por ejemplo, pérdida de trabajo y reducción de la productividad) ascienden a 20 mil millones de dólares al año en los EE. UU., con un costo anual de 9933 dólares por paciente. Además, muchos pacientes con manifestaciones funcionales similares al SII o gastroesofágicas superiores informan una relación entre la aparición de los síntomas y la ingestión de trigo (intolerancia al trigo). Sin embargo, un enfoque clínico con una DMA para todos los pacientes con SII sería desmotivado y peligroso, además de generar una gran carga económica.
En la mayoría de los pacientes con SII, la hipersensibilidad visceral puede contribuir a los síntomas gastrointestinales. La activación inmune, debido a los mastocitos de la mucosa (MC) en las proximidades de los nervios intestinales, parece desempeñar un papel en la aparición de los síntomas del SII. Se ha descrito una posible interacción neuroinmune en la submucosa duodenal de pacientes con NCGS que involucra CM para explicar los síntomas gastrointestinales. Otros hallazgos en la NCGS incluyen una mayor infiltración de eosinófilos en el tracto gastrointestinal, lo que podría producir varios procesos inflamatorios (es decir, proteína catiónica de eosinófilos (ECP) y triptasa) y sustancias neuromoduladoras (p. ej. sustancia P y VIP).
Varios estudios han investigado el rendimiento de los paneles de biomarcadores séricos para diferenciar el SII de la SGNC y de sujetos sanos. Estos incluían citocinas inflamatorias, quimiocinas, neurotransmisores y anticuerpos asociados con la EC. Por lo tanto, es de vital importancia investigar el desempeño de los paneles de biomarcadores séricos para diferenciar la "SGNC real" de otras afecciones.
Al no haber establecido definitivamente si el gluten o algún otro componente del trigo es responsable del desencadenamiento de los síntomas, la NCGS pasó a llamarse sensibilidad al trigo no celíaca (NCWS), lo que excluiría otros cereales relevantes, como la cebada y el centeno. Algunos componentes del trigo distintos de las proteínas del gluten podrían ser potencialmente perjudiciales para los pacientes con NCWS, entre los que se incluyen los carbohidratos fermentables de cadena corta (FODMAP) y los inhibidores de amilasa tripsina (ATI); este último, que activa el complejo del receptor 4 tipo peaje en monocitos, macrófagos y células dendríticas de la mucosa intestinal, podría inducir inmunidad innata tanto en la EC como en sujetos sanos. Finalmente, algunos autores se han centrado en la activación de la inmunidad innata y/o adquirida, o modificaciones de la microbiota intestinal.
La investigación está tratando activamente de encontrar variedades de trigo con baja o nula reactividad inmune para usarlas en el tratamiento de pacientes con NCWS. La evidencia preliminar mostró que las especies de trigo diploides, como Triticum monococcum (TM), en comparación con las comunes (Triticum aestivum (TA) y Triticum durum), podrían poseer un menor potencial inmunogénico en pacientes con NCWS y SII. Parece que los trigos modernos contienen mayores concentraciones y bioactividad de ATI en comparación con los diploides, y que la gliadina de la TM retiene un número reducido de péptidos inmunogénicos para los pacientes con EC debido a una alta digestibilidad in vitro. Descubrimos que los ATI de TM son suficientemente diferentes a los de TA, para determinar la falta de toxicidad inmune en la EC después de la digestión proteolítica. Además, algunos datos mostraron que en el SII el consumo de trigo antiguo puede reducir los síntomas y las citocinas proinflamatorias y mejorar la disbiosis intestinal. En este contexto, recientemente hemos demostrado que los pacientes con NCWS que consumen granos antiguos pueden recibir un diagnóstico tardío debido al posible beneficio clínico (tolerabilidad) obtenido con estos granos.
Todos estos datos, sin embargo, deben considerarse preliminares y aún quedan por confirmar los mecanismos patogénicos y la tolerabilidad clínica real de los trigos antiguos. Por tanto, es muy importante evaluar la hipótesis de que variedades antiguas específicas de trigo podrían ser toleradas y seguras para los pacientes con NCWS, intentando identificar, al mismo tiempo, posibles biomarcadores no invasivos para diagnosticar y diferenciar los pacientes con NCWS de los pacientes con SII.
Hipótesis y objetivos Nuestra hipótesis es que un enfoque terapéutico dietético basado en el uso de un trigo diploide (TM), con menores concentraciones y bioactividad de ATI y con proteínas gliadinas de mejor digestibilidad, podría mejorar los síntomas y la calidad de vida (CdV). de los pacientes del NCWS.
Planeamos realizar un desafío de trigo doble ciego (DBWC), con cruce de 2 variedades de trigo (TM vs TA), en pacientes diagnosticados con NCWS según los criterios de Salerno (6), para evaluar la supuesta tolerabilidad clínica de TM y analizar la permeabilidad inmunológica, intestinal y las diferencias microbianas, tratando de identificar tanto los mecanismos patogénicos como los posibles biomarcadores de diagnóstico del NCWS, ayudando a distinguir el NCWS de los pacientes con SII.
Si se confirma, un régimen dietético con MT sería una alternativa más adecuada y menos costosa que una DMA, y la identificación de un biomarcador para NCWS reducirá el número de visitas y exámenes médicos, con ahorros económicos sustanciales para los sistemas nacionales de salud. Además, el supuesto efecto beneficioso de una dieta basada en una antigua variedad regional de trigo contribuirá a la agricultura y la economía alimentaria de la región.
El objetivo general del estudio es investigar en pacientes con NCWS si un desafío con un trigo antiguo (TM) en comparación con uno moderno (TA), tiene una respuesta de síntomas más baja, lo que refleja hipersensibilidad visceral, activación inmune y perfiles microbianos distintos, en orden para garantizar a estos pacientes una alternativa consistente a la DMA y aumentar su calidad de vida.
El segundo objetivo es la identificación de biomarcadores serológicos no invasivos para el diagnóstico del NCWS.
El tercer objetivo es identificar, mediante la secuenciación del transcriptoma unicelular (sc) y del receptor de células T (TCR), linfocitos de células T capaces de reconocer péptidos afines de las proteínas del trigo para clasificar mejor a los pacientes afectados por NCWS, con una relevancia traslacional para futuras adaptaciones. terapias.
El plan experimental se divide en 4 paquetes de trabajo (WP). Dentro de cada WP se han definido una serie de tareas.
WP1: evaluación de la respuesta clínica a TM en comparación con TA en pacientes con NCWS mediante un DBWC con cruce.
Tarea 1.1: evaluación de los síntomas gastrointestinales provocados por la exposición dietética a TM y TA mediante una escala de calificación de síntomas gastrointestinales validada.
Tarea 1.2: evaluación de los síntomas extraintestinales provocados por la exposición dietética a TM y TA mediante una escala de calificación de síntomas extraintestinales.
Tarea 1.3: evaluación de las modificaciones de la calidad de vida determinadas por la exposición dietética a TM y TA mediante una escala validada de calidad de vida.
WP2: evaluación de biomarcadores de permeabilidad y daño intestinal en pacientes con NCWS bajo 3 regímenes dietéticos: WFD, TM y TA.
Tarea 2.1: evaluación in vivo de la permeabilidad intestinal mediante la prueba de relación Lactulosa/Manitol (La/Ma).
Tarea 2.2: análisis de índices serológicos de daño y permeabilidad intestinal, mediante ensayos ELISA.
WP 3: Evaluación de la respuesta de hipersensibilidad inmunológica, inflamatoria y visceral en pacientes con NCWS bajo 3 regímenes dietéticos: WFD, TM y TA.
Tarea 3.1: análisis de biomarcadores fecales y plasmáticos de hipersensibilidad visceral mediante ensayos ELISA.
Tarea 3.2: análisis de la respuesta inmune humoral al gluten mediante ensayos ELISA Tarea 3.3: análisis de biomarcadores inflamatorios serológicos mediante tecnología Luminex basada en microesferas de alta sensibilidad y ensayos ELISA simultáneos.
Tarea 3.4: inmunofenotipado de sangre total para la cuantificación de subpoblaciones de células inmunitarias (CI) y su estado de activación, evaluación de biomarcadores de localización intestinal e identificación de poblaciones de células específicas implicadas en la respuesta inmunitaria sistémica al trigo.
Tarea 3.5: Identificación, mediante transcriptoma unicelular (sc) y secuenciación de TCR, de linfocitos de células T capaces de reconocer péptidos afines de proteínas del trigo, en la mucosa rectal de sujetos con NCWS.
WP4: evaluación de la microbiota intestinal en pacientes con NCWS bajo 3 regímenes dietéticos diferentes: DMA, TM y desafío TA.
Tarea 4.1: amplificación in vitro de materiales genéticos bacterianos a partir de muestras fecales mediante métodos de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) e identificación de la composición de la microbiota intestinal.
Tipo de estudio
Inscripción (Estimado)
Fase
- No aplica
Contactos y Ubicaciones
Estudio Contacto
- Nombre: Pasquale Mansueto, MD
- Número de teléfono: 00390916554815
- Correo electrónico: pasquale.mansueto@unipa.it
Copia de seguridad de contactos de estudio
- Nombre: Aurelio Seidita, MD
- Número de teléfono: 00390916554815
- Correo electrónico: aurelio.seidita@unipa.it
Ubicaciones de estudio
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Sicily
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Palermo, Sicily, Italia, 90127
- Reclutamiento
- University Hospital of Palermo
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Contacto:
- Pasquale Mansueto
- Número de teléfono: 00390916554815
- Correo electrónico: pasquale.mansueto@unipa.it
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Investigador principal:
- Pasquale Mansueto
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Sub-Investigador:
- Antonio Carroccio
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Sub-Investigador:
- Aurelio Seidita
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Criterios de participación
Criterio de elegibilidad
Edades elegibles para estudiar
- Adulto
- Adulto Mayor
Acepta Voluntarios Saludables
Descripción
Criterios de inclusión:
- edad >18 y <65 años;
- negatividad de inmunoglobulina (Ig) anti-gliadina desamidada (anti-DGP) de clase A (IgA) y G (IgG); negatividad de IgA e IgG antitransglutaminasa tisular (anti-tTG) y anticuerpos antiendomisio (EMA);
- ausencia de atrofia de las vellosidades intestinales, documentada en todos los pacientes portadores de los haplotipos de antígeno leucocitario humano DQ2 y/o DQ8 (por lo tanto, independientemente de la negatividad de los anticuerpos séricos específicos de la enfermedad celíaca);
- ausencia de alergia al trigo (prick test negativo y/o determinación de IgE sérica específica al trigo, gluten y gliadina).
Criterio de exclusión:
- edad <18 y >65 años;
- autoexclusión del gluten/trigo de la dieta y negativa a reintroducirlo, con fines de diagnóstico, antes de ingresar al estudio;
- el embarazo;
- abuso de alcohol y/o drogas;
- Helicobacter pylori y otras infecciones bacterianas y/o parasitarias;
- diagnóstico de enfermedades inflamatorias intestinales crónicas y otras patologías orgánicas que afectan al sistema digestivo (por ejemplo, enfermedades hepáticas graves), enfermedades del sistema nervioso, trastornos psiquiátricos importantes, déficits inmunológicos y deficiencias que limitan la actividad física;
- cáncer
- Pacientes sometidos a quimioterapia y/o radioterapia.
Plan de estudios
¿Cómo está diseñado el estudio?
Detalles de diseño
- Propósito principal: Diagnóstico
- Asignación: Aleatorizado
- Modelo Intervencionista: Asignación cruzada
- Enmascaramiento: Cuadruplicar
Armas e Intervenciones
Grupo de participantes/brazo |
Intervención / Tratamiento |
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Experimental: Paquetes NCWS A-B
Los pacientes del NCWS se someterán a un DBWC de desafío de trigo doble ciego con un trigo diploide antiguo (TM) o un trigo hexaploide moderno (TA).
Este DBWC se realizará con paquetes de harina codificados A o B, conteniendo cada uno respectivamente una de las variedades de trigo.
Los paquetes A o B se administrarán durante 1 semana y luego, después de 1 semana de lavado (o hasta que los pacientes informen un bienestar completo), los pacientes recibirán los otros paquetes durante 1 semana más (diseño cruzado).
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A los pacientes se les administrará una dosis diaria de 80 g de harina de Triticum Monococcum (equivalente a 10 g de gluten), que serán disueltos y cocinados por los propios pacientes. Durante el desafío, la gravedad de los síntomas se registrará utilizando una escala analógica visual (EVA) de 10 puntos. Las provocaciones se suspenderán cuando se produzcan reacciones clínicas durante al menos 2 días consecutivos (aumento >3 en EVA) para síntomas gastrointestinales o extraintestinales. Los desafíos se considerarán positivos si los síntomas que habían estado presentes inicialmente reaparecen después de su desaparición con la dieta de eliminación, y si los puntajes de los síntomas GI y/o extraintestinales son >30% en comparación con cualquier eventual aumento determinado durante la administración del otro trigo. variedad. A los pacientes se les administrará una dosis diaria de 80 g de harina de Triticum Aestivum (equivalente a 10 g de gluten), que serán disueltos y cocinados por los propios pacientes. Durante el desafío, la gravedad de los síntomas se registrará utilizando una escala analógica visual (EVA) de 10 puntos. Las provocaciones se suspenderán cuando se produzcan reacciones clínicas durante al menos 2 días consecutivos (aumento >3 en EVA) para síntomas gastrointestinales o extraintestinales. Los desafíos se considerarán positivos si los síntomas que habían estado presentes inicialmente reaparecen después de su desaparición con la dieta de eliminación, y si los puntajes de los síntomas GI y/o extraintestinales son >30% en comparación con cualquier eventual aumento determinado durante la administración del otro trigo. variedad. |
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Experimental: Paquetes NCWS BA
Los pacientes del NCWS se someterán a un DBWC de desafío de trigo doble ciego con un trigo diploide antiguo (TM) o un trigo hexaploide moderno (TA).
Este DBWC se realizará con paquetes de harina codificados A o B, conteniendo cada uno respectivamente una de las variedades de trigo.
Los paquetes A o B se administrarán durante 1 semana y luego, después de 1 semana de lavado (o hasta que los pacientes informen un bienestar completo), los pacientes recibirán los otros paquetes durante 1 semana más (diseño cruzado).
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A los pacientes se les administrará una dosis diaria de 80 g de harina de Triticum Monococcum (equivalente a 10 g de gluten), que serán disueltos y cocinados por los propios pacientes. Durante el desafío, la gravedad de los síntomas se registrará utilizando una escala analógica visual (EVA) de 10 puntos. Las provocaciones se suspenderán cuando se produzcan reacciones clínicas durante al menos 2 días consecutivos (aumento >3 en EVA) para síntomas gastrointestinales o extraintestinales. Los desafíos se considerarán positivos si los síntomas que habían estado presentes inicialmente reaparecen después de su desaparición con la dieta de eliminación, y si los puntajes de los síntomas GI y/o extraintestinales son >30% en comparación con cualquier eventual aumento determinado durante la administración del otro trigo. variedad. A los pacientes se les administrará una dosis diaria de 80 g de harina de Triticum Aestivum (equivalente a 10 g de gluten), que serán disueltos y cocinados por los propios pacientes. Durante el desafío, la gravedad de los síntomas se registrará utilizando una escala analógica visual (EVA) de 10 puntos. Las provocaciones se suspenderán cuando se produzcan reacciones clínicas durante al menos 2 días consecutivos (aumento >3 en EVA) para síntomas gastrointestinales o extraintestinales. Los desafíos se considerarán positivos si los síntomas que habían estado presentes inicialmente reaparecen después de su desaparición con la dieta de eliminación, y si los puntajes de los síntomas GI y/o extraintestinales son >30% en comparación con cualquier eventual aumento determinado durante la administración del otro trigo. variedad. |
¿Qué mide el estudio?
Medidas de resultado primarias
Medida de resultado |
Medida Descripción |
Periodo de tiempo |
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Evaluación de síntomas gastrointestinales provocados por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum.
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Se administrará una versión modificada de la Escala de calificación de síntomas gastrointestinales (GSRS) a todos los pacientes durante cada visita ambulatoria para evaluar los síntomas gastrointestinales antes del desafío (T0, dieta sin trigo) y después de la exposición tanto a Triticum Monococcum (TM) como a Triticum Aestivum ( EJÉRCITO DE RESERVA). La diferencia se considerará relevante si se registrará GSRS >30% respecto a T0 y/o cualquier eventual aumento determinado durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Evaluación de síntomas extraintestinales provocados por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum.
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Se administrará a todos los pacientes una escala de calificación de síntomas extraintestinales, basada en los síntomas observados con mayor frecuencia en pacientes con NCWS, durante cada visita ambulatoria para evaluar los síntomas gastrointestinales antes del desafío (T0, dieta sin trigo) y después de la exposición a Triticum Monococcum ( TM) y Triticum Aestivum (TA). La diferencia se considerará relevante si la escala de calificación de síntomas extraintestinales se registrará >30% en comparación con T0 y/o cualquier eventual aumento determinado durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Evaluación de la modificación de la calidad de vida provocada por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum.
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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El síndrome del intestino irritable-calidad de vida (IBS-QoL) se utilizará para evaluar la calidad de vida del paciente. Es una herramienta ya validada para condiciones específicas para pacientes con SII, que incorpora subdominios específicos, como evitar alimentos, hábitos intestinales y el efecto sobre las relaciones sociales/sexuales. Se administrará IBS-QoL a todos los pacientes durante cada visita ambulatoria para evaluar los síntomas gastrointestinales antes del desafío (T0, dieta sin trigo) y después de la exposición tanto a Triticum Monococcum (TM) como a Triticum Aestivum (TA). La diferencia se considerará relevante si la SII-QoL se registrará >30% en comparación con T0 y/o cualquier eventual aumento determinado durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Medidas de resultado secundarias
Medida de resultado |
Medida Descripción |
Periodo de tiempo |
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Evaluación in vivo de la modificación de la permeabilidad intestinal provocada por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum.
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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La evaluación in vivo de la permeabilidad intestinal se realizará mediante la prueba de relación lactulosa/manitol (La/Ma), que ya ha sido validada para trastornos relacionados con el gluten y otras enfermedades gastrointestinales con diarrea y malabsorción. La prueba se basa en la administración oral (tras 12 horas de ayuno) de una solución isosmolar acuosa (270 mOsm) de 2 azúcares no absorbibles (5 g de lactulosa y 2 g de manitol), en 150 ml de agua. Al no ser metabolizables, los 2 azúcares son filtrados por los riñones y se encuentran en la orina; una recolección de orina de 5 horas después del bolo contiene todo lo filtrado, con una relación La/Ma <0,035, que se considera el índice de permeabilidad intestinal "normal" (valores ≥0,035 se considerarán índice de permeabilidad gastrointestinal aumentada). La diferencia de la relación La/Ma se considerará relevante para p<0,05 respecto a los valores de T0 y/o a los valores determinados durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Análisis de la modificación de los índices serológicos de permeabilidad intestinal evocados por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum: zonulina
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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La dosificación de zonulina se realizará mediante kits ELISA comerciales de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se considerará relevante la diferencia de los valores de zonulina para p<0,05 respecto a los valores registrados en T0 y/o a los valores determinados durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Análisis de la modificación de los índices serológicos de permeabilidad intestinal evocados por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum: ocludina
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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La dosificación de ocludina se realizará mediante kits ELISA comerciales de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se considerará relevante la diferencia de los valores de ocludina para p<0,05 respecto a los valores registrados en T0 y/o a los valores determinados durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Análisis de la modificación de los índices serológicos de permeabilidad intestinal evocados por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum: claudina 1
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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La dosificación de Claudin 1 se realizará mediante kits ELISA comerciales de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se considerará relevante la diferencia de los valores de Claudina 1 para p<0,05 respecto a los valores registrados en T0 y/o a los valores determinados durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Análisis de la modificación de los índices serológicos de lesión intestinal provocada por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum: proteína transportadora de ácidos grasos intestinales.
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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La dosificación de la proteína transportadora de ácidos grasos intestinales se realizará mediante kits ELISA comerciales de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se considerará relevante la diferencia en los valores de proteína fijadora de ácidos grasos intestinales para p<0,05 respecto a los valores registrados en T0 y/o a los valores determinados durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Análisis de la modificación de los índices serológicos de daño intestinal provocado por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum: lipopolisacárido
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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La dosificación de lipopolisacáridos se realizará mediante kits ELISA comerciales de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se considerará relevante la diferencia de los valores de lipopolisacáridos para p<0,05 respecto a los valores registrados en T0 y/o a los valores determinados durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Análisis de la modificación de los índices serológicos de lesión intestinal provocada por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum: proteína de unión a lipopolisacáridos
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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La dosis de proteína fijadora de lipopolisacáridos se realizará mediante kits ELISA comerciales de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se considerará relevante la diferencia de valores de proteína fijadora de lipopolisacáridos para p<0,05 respecto a los valores registrados en T0 y/o a los valores determinados durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Análisis de la modificación de los índices serológicos de lesión intestinal provocada por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum: inmunoglobulina (Ig)A de actina F
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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La dosificación de inmunoglobulina (Ig) A de actina F se realizará mediante kits ELISA comerciales de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se considerará relevante la diferencia de los valores de inmunoglobulina (Ig)A actina F para p<0,05 respecto a los valores registrados en T0 y/o a los valores determinados durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Análisis de la modificación de los índices serológicos de lesión intestinal provocada por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum: inmunoglobulina (Ig)G de actina F
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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La dosificación de inmunoglobulina (Ig)G de actina F se realizará mediante kits ELISA comerciales de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se considerará relevante la diferencia de los valores de inmunoglobulina (Ig)G de actina F para p<0,05 respecto a los valores registrados en T0 y/o a los valores determinados durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Análisis de la modificación de los índices de hipersensibilidad intestinal provocados por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum: proteína catiónica eosinófila
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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La dosificación de proteína catiónica de eosinófilos se realizará en muestras de heces siguiendo metodologías ya validadas. Se considerará relevante la diferencia en los valores de proteína catiónica de eosinófilos para p<0,05 respecto a los valores registrados en T0 y/o a los valores determinados durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Análisis de la modificación de los índices de hipersensibilidad intestinal provocados por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum: triptasa
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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La dosificación de triptasa se realizará en muestras de heces siguiendo metodologías ya validadas. Se considerará relevante la diferencia de los valores de triptasa para p<0,05 respecto a los valores registrados en T0 y/o a los valores determinados durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Análisis de la modificación de los índices de hipersensibilidad intestinal provocados por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum: sustancia P
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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La dosificación de la sustancia P se realizará en muestras de sangre mediante kits ELISA comerciales de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se considerará relevante la diferencia de los valores de la sustancia P para p<0,05 respecto a los valores registrados en T0 y/o a los valores determinados durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Análisis de la modificación de los índices de hipersensibilidad intestinal provocados por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum: somatostatina.
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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La dosificación de somatostatina se realizará en muestras de sangre mediante kits ELISA comerciales de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se considerará relevante la diferencia de los valores de somatostatina para p<0,05 respecto a los valores registrados en T0 y/o a los valores determinados durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Análisis de la modificación de los índices de hipersensibilidad intestinal provocados por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum: serotonina
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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La dosificación de serotonina se realizará en muestras de sangre mediante kits ELISA comerciales de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se considerará relevante la diferencia en los valores de serotonina para p<0,05 respecto a los valores registrados en T0 y/o a los valores determinados durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Análisis de la modificación de los índices de hipersensibilidad intestinal provocados por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum: péptido intestinal vasoactivo
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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La dosificación del péptido intestinal vasoactivo se realizará en muestras de sangre mediante kits ELISA comerciales de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se considerará relevante la diferencia de los valores de péptido intestinal vasoactivo para p<0,05 respecto a los valores registrados en T0 y/o a los valores determinados durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Análisis de la modificación de la respuesta inmune humoral al gluten provocada por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum: anticuerpos antigliadina inmunoglobulina A
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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La respuesta inmune humoral al gluten se evaluará dosificando niveles plasmáticos de inmunoglobulina A de anticuerpos antigliadina mediante ensayos ELISA comerciales, siguiendo las instrucciones del fabricante. Se considerará relevante la diferencia de los valores de anticuerpos antigliadina inmunoglobulina A para p<0,05 respecto a los valores registrados en T0 y/o a los valores determinados durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Análisis de la modificación de la respuesta inmune humoral al gluten provocada por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum: anticuerpos antigliadina inmunoglobulina G
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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La respuesta inmune humoral al gluten se evaluará dosificando niveles plasmáticos de anticuerpos antigliadina inmunoglobulina G mediante ensayos ELISA comerciales, siguiendo las instrucciones del fabricante. Se considerará relevante la diferencia de los valores de anticuerpos antigliadina inmunoglobulina G para p<0,05 respecto a los valores registrados en T0 y/o a los valores determinados durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Análisis de la modificación de los biomarcadores inflamatorios serológicos evocados por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum: factor estimulante de colonias de granulocitos.
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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La expresión de biomarcadores inflamatorios serológicos se evaluará, en todas las muestras recolectadas, mediante multiplexación de análisis simultáneos con ensayos basados en microesferas de alta sensibilidad o ELISA. Se considerará relevante la diferencia en los valores del factor estimulante de colonias de granulocitos para p<0,05 respecto a los valores registrados en T0 y/o a los valores determinados durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Análisis de la modificación de los biomarcadores inflamatorios serológicos provocados por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum: factor estimulante de colonias de granulocitos-macrófagos
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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La expresión de biomarcadores inflamatorios serológicos se evaluará, en todas las muestras recolectadas, mediante multiplexación de análisis simultáneos con ensayos basados en microesferas de alta sensibilidad o ELISA. Se considerará relevante la diferencia de valores del factor estimulante de colonias de granulocitos-macrófagos para p<0,05 respecto a los valores registrados en T0 y/o a los valores determinados durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Análisis de la modificación de los biomarcadores serológicos inflamatorios provocados por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum: interferón (IFN)-γ
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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La expresión de biomarcadores inflamatorios serológicos se evaluará, en todas las muestras recolectadas, mediante multiplexación de análisis simultáneos con ensayos basados en microesferas de alta sensibilidad o ELISA. Se considerará relevante la diferencia de los valores de Interferón (IFN)-γ para p<0,05 respecto a los valores registrados en T0 y/o a los valores determinados durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Análisis de la modificación de los biomarcadores inflamatorios serológicos provocados por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum: interleucina (IL)-1β
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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La expresión de biomarcadores inflamatorios serológicos se evaluará, en todas las muestras recolectadas, mediante multiplexación de análisis simultáneos con ensayos basados en microesferas de alta sensibilidad o ELISA. Se considerará relevante la diferencia de los valores de interleucina (IL)-1β para p<0,05 respecto a los valores registrados en T0 y/o a los valores determinados durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Análisis de la modificación de los biomarcadores inflamatorios serológicos provocados por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum: interleucina (IL)-2
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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La expresión de biomarcadores inflamatorios serológicos se evaluará, en todas las muestras recolectadas, mediante multiplexación de análisis simultáneos con ensayos basados en microesferas de alta sensibilidad o ELISA. Se considerará relevante la diferencia de los valores de interleucina (IL)-2 para p<0,05 respecto a los valores registrados en T0 y/o a los valores determinados durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Análisis de la modificación de los biomarcadores inflamatorios serológicos provocados por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum: interleucina (IL)-4
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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La expresión de biomarcadores inflamatorios serológicos se evaluará, en todas las muestras recolectadas, mediante multiplexación de análisis simultáneos con ensayos basados en microesferas de alta sensibilidad o ELISA. Se considerará relevante la diferencia de los valores de interleucina (IL)-4 para p<0,05 respecto a los valores registrados en T0 y/o a los valores determinados durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Análisis de la modificación de los biomarcadores inflamatorios serológicos provocados por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum: interleucina (IL)-5
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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La expresión de biomarcadores inflamatorios serológicos se evaluará, en todas las muestras recolectadas, mediante multiplexación de análisis simultáneos con ensayos basados en microesferas de alta sensibilidad o ELISA. Se considerará relevante la diferencia de los valores de interleucina (IL)-5 para p<0,05 respecto a los valores registrados en T0 y/o a los valores determinados durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Análisis de la modificación de los biomarcadores inflamatorios serológicos provocados por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum: interleucina (IL)-6
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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La expresión de biomarcadores inflamatorios serológicos se evaluará, en todas las muestras recolectadas, mediante multiplexación de análisis simultáneos con ensayos basados en microesferas de alta sensibilidad o ELISA. Se considerará relevante la diferencia de los valores de interleucina (IL)-6 para p<0,05 respecto a los valores registrados en T0 y/o a los valores determinados durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Análisis de la modificación de los biomarcadores inflamatorios serológicos provocados por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum: interleucina (IL)-8
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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La expresión de biomarcadores inflamatorios serológicos se evaluará, en todas las muestras recolectadas, mediante multiplexación de análisis simultáneos con ensayos basados en microesferas de alta sensibilidad o ELISA. Se considerará relevante la diferencia de los valores de interleucina (IL)-8 para p<0,05 respecto a los valores registrados en T0 y/o a los valores determinados durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Análisis de la modificación de los biomarcadores inflamatorios serológicos provocados por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum: interleucina (IL)-9
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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La expresión de biomarcadores inflamatorios serológicos se evaluará, en todas las muestras recolectadas, mediante multiplexación de análisis simultáneos con ensayos basados en microesferas de alta sensibilidad o ELISA. Se considerará relevante la diferencia de los valores de interleucina (IL)-9 para p<0,05 respecto a los valores registrados en T0 y/o a los valores determinados durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Análisis de la modificación de los biomarcadores inflamatorios serológicos provocados por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum: interleucina (IL)-10
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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La expresión de biomarcadores inflamatorios serológicos se evaluará, en todas las muestras recolectadas, mediante multiplexación de análisis simultáneos con ensayos basados en microesferas de alta sensibilidad o ELISA. Se considerará relevante la diferencia de los valores de interleucina (IL)-10 para p<0,05 respecto a los valores registrados en T0 y/o a los valores determinados durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Análisis de la modificación de los biomarcadores inflamatorios serológicos provocados por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum: interleucina (IL)-12
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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La expresión de biomarcadores inflamatorios serológicos se evaluará, en todas las muestras recolectadas, mediante multiplexación de análisis simultáneos con ensayos basados en microesferas de alta sensibilidad o ELISA. Se considerará relevante la diferencia de los valores de interleucina (IL)-12 para p<0,05 respecto a los valores registrados en T0 y/o a los valores determinados durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Análisis de la modificación de los biomarcadores inflamatorios serológicos provocados por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum: interleucina (IL)-13
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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La expresión de biomarcadores inflamatorios serológicos se evaluará, en todas las muestras recolectadas, mediante multiplexación de análisis simultáneos con ensayos basados en microesferas de alta sensibilidad o ELISA. Se considerará relevante la diferencia de los valores de interleucina (IL)-13 para p<0,05 respecto a los valores registrados en T0 y/o a los valores determinados durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Análisis de la modificación de los biomarcadores inflamatorios serológicos provocados por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum: interleucina (IL)-15
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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La expresión de biomarcadores inflamatorios serológicos se evaluará, en todas las muestras recolectadas, mediante multiplexación de análisis simultáneos con ensayos basados en microesferas de alta sensibilidad o ELISA. Se considerará relevante la diferencia de los valores de interleucina (IL)-15 para p<0,05 respecto a los valores registrados en T0 y/o a los valores determinados durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Análisis de la modificación de los biomarcadores inflamatorios serológicos provocados por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum: interleucina (IL)-17
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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La expresión de biomarcadores inflamatorios serológicos se evaluará, en todas las muestras recolectadas, mediante multiplexación de análisis simultáneos con ensayos basados en microesferas de alta sensibilidad o ELISA. Se considerará relevante la diferencia de los valores de interleucina (IL)-17 para p<0,05 respecto a los valores registrados en T0 y/o a los valores determinados durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Análisis de la modificación de los biomarcadores inflamatorios serológicos provocados por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum: interleucina (IL)-21
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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La expresión de biomarcadores inflamatorios serológicos se evaluará, en todas las muestras recolectadas, mediante multiplexación de análisis simultáneos con ensayos basados en microesferas de alta sensibilidad o ELISA. Se considerará relevante la diferencia de los valores de interleucina (IL)-21 para p<0,05 respecto a los valores registrados en T0 y/o a los valores determinados durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Análisis de la modificación de los biomarcadores inflamatorios serológicos provocados por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum: interleucina (IL)-22
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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La expresión de biomarcadores inflamatorios serológicos se evaluará, en todas las muestras recolectadas, mediante multiplexación de análisis simultáneos con ensayos basados en microesferas de alta sensibilidad o ELISA. Se considerará relevante la diferencia de los valores de interleucina (IL)-22 para p<0,05 respecto a los valores registrados en T0 y/o a los valores determinados durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Análisis de la modificación de los biomarcadores serológicos inflamatorios provocados por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum: interleucina (IL)-33
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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La expresión de biomarcadores inflamatorios serológicos se evaluará, en todas las muestras recolectadas, mediante multiplexación de análisis simultáneos con ensayos basados en microesferas de alta sensibilidad o ELISA. Se considerará relevante la diferencia de los valores de interleucina (IL)-33 para p<0,05 respecto a los valores registrados en T0 y/o a los valores determinados durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Análisis de la modificación de los biomarcadores inflamatorios serológicos provocados por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum: factor de necrosis tumoral (TNF)-α
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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La expresión de biomarcadores inflamatorios serológicos se evaluará, en todas las muestras recolectadas, mediante multiplexación de análisis simultáneos con ensayos basados en microesferas de alta sensibilidad o ELISA. Se considerará relevante la diferencia de los valores del factor de necrosis tumoral (TNF)-α para p<0,05 respecto a los valores registrados en T0 y/o a los valores determinados durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Análisis de inmunofenotipado de sangre total para la cuantificación de la modificación de subpoblaciones de células inmunes (CI) y su estado de activación provocado por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum.
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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El inmunofenotipado se realizará mediante citometría de flujo multicolor.
La sangre se teñirá con anticuerpos conjugados con fluorocromo específicos para marcadores de superficie de linajes de poblaciones celulares y activación inmune para permitir la cuantificación de las poblaciones de células inmunes y su estado de activación. La diferencia en las poblaciones de células inmunes se considerará relevante para p<0,05 en comparación con los valores registrados en T0 y /o a los valores determinados durante la administración de la otra variedad de trigo.
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Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Identificación de linfocitos de células T capaces de reconocer péptidos afines de proteínas del trigo
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Para identificar células T capaces de reconocer péptidos afines de las proteínas del trigo, se recolectarán células inmunes CD45+ de muestras de biopsia rectal obtenidas de 10 pacientes, al inicio del estudio y cuando informarán la recurrencia de los síntomas en la exposición al trigo doble ciego.
Las biopsias rectales se transferirán en medio de cultivo completo, trituradas en trozos pequeños, seguidas de digestión enzimática.
Luego, la fracción CD45+ se clasificará y utilizará para análisis -ómicos posteriores.
Las células inmunes obtenidas de las biopsias se someterán a una caracterización de células individuales, con el objetivo de investigar cambios en el microambiente inmunológico, mediante análisis CITE-seq y TCR-seq.
Para obtener información sobre las secuencias de los receptores de células T capaces de reconocer supuestos péptidos originados a partir de las principales proteínas del trigo (gluten, etc.), desarrollaremos una red neuronal/modelo predictivo de acoplamiento para la interacción TCR/epítopo.
Los candidatos finales a péptidos de trigo se validarán in vitro mediante el uso de un ensayo Elispot.
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Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Análisis de la modificación de la microbiota intestinal provocada por la exposición dietética a Triticum Monococcum y Triticum Aestivum
Periodo de tiempo: Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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La identificación in vitro de la microbiota intestinal se realizará mediante amplificación, análisis y cuantificación del microbioma intestinal en muestras de heces. Después de la recolección de heces, el ADN bacteriano se extraerá mediante bromuro de cetiltrimetilamonio y la secuenciación del ADNr 16S se realizará mediante métodos de reacción en cadena de la polimerasa (PCR), utilizando cebadores universales. Los fragmentos resultantes se secuenciarán luego mediante pirosecuenciación. Cada lectura se comparará con una base de datos de secuencias conocidas de ADNr 16S, utilizando el programa BLAT asignando filogenéticamente los nodos más específicos y confiables. Este método de asignación de los datos obtenidos conduce a un árbol filogenético "ponderado" que caracteriza bien el contenido bacteriano de la muestra. La diferencia de microbiota intestinal se considerará relevante para p<0,05 en comparación con los valores registrados en T0 y/o con los valores determinados durante la administración de la otra variedad de trigo. |
Días 0 (antes del inicio del desafío), 7 (después de la ingesta del primer tipo de harina según la aleatorización) y 21 (después de la ingesta del segundo tipo de harina según la aleatorización)
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Colaboradores e Investigadores
Patrocinador
Colaboradores
Investigadores
- Silla de estudio: Antonio Carroccio, MD, University of Palermo
Publicaciones y enlaces útiles
Publicaciones Generales
- Carroccio A, Giannone G, Mansueto P, Soresi M, La Blasca F, Fayer F, Iacobucci R, Porcasi R, Catalano T, Geraci G, Arini A, D'Alcamo A, Villanacci V, Florena AM. Duodenal and Rectal Mucosa Inflammation in Patients With Non-celiac Wheat Sensitivity. Clin Gastroenterol Hepatol. 2019 Mar;17(4):682-690.e3. doi: 10.1016/j.cgh.2018.08.043. Epub 2018 Aug 21.
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- Seidita A, Mansueto P, Giuliano A, Chiavetta M, Mandreucci F, Soresi M, Pistone M, Compagnoni S, Castellucci D, Bisso G, Faraci F, Maestri S, Disclafani R, Sapone A, Fasano A, Carroccio A. Potential tolerability of ancient grains in non-celiac wheat sensitivity patients: A preliminary evaluation. Front Med (Lausanne). 2022 Sep 28;9:995019. doi: 10.3389/fmed.2022.995019. eCollection 2022.
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