Tolerabilidade de um grão antigo em pacientes com sensibilidade não celíaca ao trigo
Tolerabilidade de um grão antigo em pacientes com sensibilidade não celíaca ao trigo. Um estudo clínico e uma busca por biomarcadores diagnósticos.
Pacientes que sofrem de problemas relacionados ao trigo, na ausência de doença celíaca ou diagnóstico de alergia ao trigo, podem sofrer de sensibilidade não celíaca ao trigo (NCWS). Isto é caracterizado por sintomas gastrointestinais (GI) e extraintestinais, que melhoram com a eliminação da ingestão de trigo. Até o momento, nenhuma explicação definitiva dos mecanismos patogenéticos da NCWS foi comprovada e, da mesma forma, nenhum biomarcador diagnóstico não invasivo específico foi reconhecido. A prevalência da NCWS é estimada em uma ampla faixa, em todo o mundo, entre 0,6% e 13%, e sua apresentação clínica se sobrepõe à síndrome do intestino irritável (SII). Identificar pacientes com NCWS entre aqueles com apresentação clínica semelhante à SII pode permitir a cura desta condição crítica e a redução dos custos sociais. No entanto, nunca foi demonstrada uma necessidade real de adesão estrita à dieta isenta de trigo (DQA) no NCWS. Neste contexto, a investigação está a tentar ativamente encontrar variedades de trigo com reatividade imunitária ausente ou baixa para serem utilizadas no tratamento de pacientes com NCWS. Evidências preliminares apoiam a suposição de que espécies diplóides de trigo, como Triticum monococcum (TM), em comparação com as comuns (Triticum aestivum (TA)), poderiam possuir um potencial imunogênico menor em pacientes com NCWS.
O primeiro objetivo do nosso projeto é verificar se a utilização de um trigo diplóide (TM), com menores concentrações e bioatividade de Inibidores de Amilase-Tripsina (ATIs) e com proteínas gliadinas com melhor digestibilidade, comparado a um hexaplóide ( TA) poderia melhorar os sintomas e a qualidade de vida (QV) dos indivíduos com NCWS. O segundo objetivo é a identificação de biomarcadores sorológicos não invasivos para o diagnóstico de NCWS. O terceiro objetivo é identificar linfócitos de células T capazes de reconhecer peptídeos cognatos de proteínas de trigo para melhor classificar e monitorar pacientes afetados por NCWS.
Para alcançar esses resultados planejamos um ensaio clínico prospectivo, duplo-cego com crossover, no qual pacientes já diagnosticados com NCWS (de acordo com critérios internacionais e com desafio duplo-cego de trigo controlado por placebo), seguindo um rigoroso WFD, serão expostos em duplo-cego para TM e TA. Todos os pacientes serão avaliados clinicamente nos diferentes momentos com escalas validadas para avaliar a tolerabilidade da MT. Além disso, a sua permeabilidade intestinal, ativação imunológica e padrões da microbiota intestinal serão estudados tanto por técnicas in vitro como in vivo. Finalmente, um subconjunto de pacientes escolhido aleatoriamente será estudado por meio do sequenciamento do transcriptoma de célula única e do receptor de células T (TCR) em amostras de biópsia de retoscopia para identificar linfócitos de células T capazes de reconhecer peptídeos cognatos de proteínas de trigo. Se tivermos sucesso, provaremos que um regime alimentar com MT seria uma alternativa adequada e menos dispendiosa a uma DQA em indivíduos com NCWS, e também poderíamos desvendar a base fisiopatológica desta condição, identificando, ao mesmo tempo, um potencial não- biomarcador invasivo.
Visão geral do estudo
Status
Condições
Descrição detalhada
Estado da técnica A associação entre a ingestão de trigo e “distúrbios relacionados ao trigo” (DRT) é conhecida há muito tempo, incluindo patologias como doença celíaca (DC) e alergia ao trigo (AT). Recentemente, uma nova condição não alérgica e não autoimune foi identificada: sensibilidade ao glúten não celíaca (SGNC). Isto é caracterizado por sintomas gastrointestinais (GI), muito semelhantes aos da síndrome do intestino irritável (SII) (por exemplo, dores abdominais, diarreia, etc.) e extra-intestinais (ex. artromialgias, anemia, etc.), que melhoram com uma dieta sem trigo (DQA).
As taxas de prevalência da SGNC variam de 0,6% a 13% na população geral e, dada a falta de um biomarcador, seu diagnóstico é baseado em: 1) exclusão de DC e WA; 2) regressão dos sintomas na DQA; 3) recorrência dos sintomas em um desafio duplo-cego controlado por placebo (DBPCC) com trigo.
Os médicos reconhecem uma sobreposição significativa entre SGNC e SII e sabe-se que a SII afeta cerca de 25% da população em geral. Assim, se uma percentagem de pacientes com SII pudesse beneficiar de uma DQA, isso teria um impacto fundamental nos seus custos sociais de saúde, estimando-se que os seus custos indirectos (por exemplo, perda de trabalho e redução da produtividade) chegam a 20 mil milhões de dólares/ano nos EUA, com um custo anual de 9.933 dólares por paciente. Além disso, muitos pacientes com manifestações funcionais semelhantes à SII ou gastroesofágicas superiores relatam uma relação entre o início dos sintomas e a ingestão de trigo (intolerância ao trigo). No entanto, uma abordagem clínica com DQA para todos os pacientes com SII seria desmotivada e perigosa, determinando também um grande encargo económico.
Na maioria dos pacientes com SII, a hipersensibilidade visceral pode contribuir para os sintomas gastrointestinais. A ativação imunológica, devido aos mastócitos da mucosa (MCs) próximos aos nervos intestinais, parece desempenhar um papel no início dos sintomas da SII. Foi descrita uma possível interação neuroimune na submucosa duodenal de pacientes com SGNC envolvendo MCs, a fim de explicar os sintomas gastrointestinais. Outros achados na SGNC incluem um aumento da infiltração de eosinófilos no trato GI, o que pode produzir vários sintomas inflamatórios (ou seja, proteína catiônica eosinófila (ECP) e triptase) e substâncias neuromoduladoras (por exemplo. substância P e VIP).
Vários estudos investigaram o desempenho de painéis de biomarcadores séricos na diferenciação de SII de SGNC e de indivíduos saudáveis. Estes incluíram citocinas inflamatórias, quimiocinas, neurotransmissores e anticorpos associados à DC. Portanto, é extremamente importante investigar o desempenho dos painéis de biomarcadores séricos para diferenciar a "SGNC real" de outras condições.
Não tendo sido definitivamente estabelecido se o glúten ou algum outro componente do trigo é responsável pelo desencadeamento dos sintomas, a SGNC foi renomeada como sensibilidade não celíaca ao trigo (NCWS), o que excluiria outros cereais relevantes, como a cevada e o centeio. Alguns componentes do trigo, além das proteínas do glúten, podem ser potencialmente deletérios para pacientes com NCWS, que incluem carboidratos fermentáveis de cadeia curta (FODMAPs) e inibidores de amilase tripsina (ATIs); o último, ativando o complexo receptor toll-like 4 em monócitos, macrófagos e células dendríticas da mucosa intestinal, pode induzir imunidade inata tanto em indivíduos com DC quanto em indivíduos saudáveis. Finalmente, alguns autores concentraram-se na ativação da imunidade inata e/ou adquirida, ou nas modificações da microbiota intestinal.
A pesquisa está tentando ativamente encontrar variedades de trigo com reatividade imunológica ausente ou baixa para serem usadas no tratamento de pacientes com NCWS. Evidências preliminares mostraram que espécies diplóides de trigo, como Triticum monococcum (TM), em comparação com as comuns (Triticum aestivum (TA) e Triticum durum), poderiam possuir um menor potencial imunogênico em pacientes com NCWS e IBS. Parece que os trigos modernos contêm maiores concentrações e bioatividade de ATIs em comparação com os diplóides, e que a gliadina da TM retém um número reduzido de peptídeos imunogênicos para pacientes com DC devido a uma alta digestibilidade in vitro. Descobrimos que os ATIs do TM são suficientemente diferentes daqueles do TA, para determinar a falta de toxicidade imunológica na DC após a digestão proteolítica. Além disso, alguns dados mostraram que na SII o consumo de trigo antigo pode reduzir os sintomas e as citocinas pró-inflamatórias e melhorar a disbiose intestinal. Neste contexto, demonstramos recentemente que pacientes com NCWS que consomem grãos antigos podem receber um diagnóstico tardio devido ao possível benefício clínico (tolerabilidade) obtido com estes grãos.
Todos estes dados, no entanto, devem ser considerados preliminares e os mecanismos patogenéticos e a real tolerabilidade clínica dos trigos antigos permanecem por confirmar. Assim, é muito importante avaliar a hipótese de que variedades antigas específicas de trigo poderiam ser toleradas e seguras para pacientes com NCWS, tentando identificar, ao mesmo tempo, possíveis biomarcadores não invasivos para diagnosticar e diferenciar pacientes com NCWS de pacientes com SII.
Hipóteses e objetivos Nossa hipótese é que uma abordagem dietética terapêutica baseada na utilização de um trigo diplóide (TM), com menores concentrações e bioatividade de ATIs e com proteínas gliadinas com melhor digestibilidade, poderia melhorar os sintomas e a qualidade de vida (QV) de pacientes com NCWS.
Planejamos realizar um Desafio Duplo-Cego de Trigo (DBWC), com cruzamento de 2 variedades de trigo (TM vs TA), em paciente com diagnóstico de NCWS de acordo com os critérios de Salerno (6), para avaliar a suposta tolerabilidade clínica do TM, e analisar as diferenças imunológicas, de permeabilidade intestinal e microbianas, tentando identificar tanto os mecanismos patogenéticos quanto os potenciais biomarcadores diagnósticos da NCWS, ajudando a distinguir os pacientes com NCWS dos pacientes com SII.
Se confirmado, um regime alimentar com MT seria uma alternativa mais adequada e menos dispendiosa a uma DQA, e a identificação de um biomarcador para NCWS reduzirá o número de consultas e exames médicos, com poupanças económicas substanciais para os sistemas nacionais de saúde. Além disso, o suposto efeito benéfico de uma dieta baseada numa antiga variedade regional de trigo contribuirá para a agricultura regional e para a economia alimentar.
O objetivo geral do estudo é investigar em pacientes com NCWS se um desafio com um trigo antigo (TM) em comparação com um trigo moderno (TA), tem uma resposta de sintomas mais baixa, refletindo hipersensibilidade visceral, ativação imunológica e perfis microbianos distintos, em ordem garantir a esses pacientes uma alternativa consistente à DQA e aumentar sua QV.
O segundo objetivo é a identificação de biomarcadores sorológicos não invasivos para o diagnóstico de NCWS.
O terceiro objetivo é identificar, por meio do sequenciamento do transcriptoma de célula única (sc) e do receptor de células T (TCR), linfócitos de células T capazes de reconhecer peptídeos cognatos de proteínas de trigo para melhor classificar os pacientes afetados por NCWS, com relevância translacional para futuros testes personalizados. terapias.
O plano experimental está dividido em 4 pacotes de trabalho (WPs). Dentro de cada WP foi definida uma série de tarefas.
WP1: avaliação da resposta clínica ao MT em comparação ao AT em pacientes com NCWS por meio de um DBWC com crossover.
Tarefa 1.1: avaliação dos sintomas gastrointestinais evocados pela exposição alimentar a MT e AT por meio de uma escala de avaliação de sintomas gastrointestinais validada.
Tarefa 1.2: avaliação dos sintomas extraintestinais evocados pela exposição alimentar ao MT e AT por meio de uma escala de avaliação de sintomas extraintestinais.
Tarefa 1.3: avaliação das modificações na qualidade de vida determinadas pela exposição alimentar ao MT e AT por meio de uma escala de qualidade de vida validada.
WP2: avaliação da permeabilidade intestinal e biomarcadores de danos em pacientes com NCWS sob 3 regimes dietéticos: desafio WFD, TM e TA.
Tarefa 2.1: avaliação in vivo da permeabilidade intestinal pelo teste da relação Lactulose/Manitol (La/Ma).
Tarefa 2.2: análise de índices sorológicos de dano e permeabilidade intestinal, por meio de ensaios ELISA.
WP 3: Avaliação da resposta de hipersensibilidade imunológica, inflamatória e visceral em pacientes com NCWS sob 3 regimes dietéticos: desafio WFD, TM e TA.
Tarefa 3.1: análise de biomarcadores fecais e plasmáticos de hipersensibilidade visceral por ensaios ELISA.
Tarefa 3.2: análise da resposta imune humoral ao glúten por ensaios ELISA Tarefa 3.3: análise de biomarcadores inflamatórios sorológicos por tecnologia Luminex baseada em microesferas de alta sensibilidade simultânea e ensaios ELISA.
Tarefa 3.4: imunofenotipagem de sangue total para quantificação de subpopulações de células imunes (IC) e seu status de ativação, avaliação de biomarcadores de localização intestinal e identificação de população celular específica envolvida na resposta imune sistêmica ao trigo.
Tarefa 3.5: Identificação, através do transcriptoma de célula única (sc) e sequenciamento de TCR, de linfócitos de células T capazes de reconhecer peptídeos cognatos de proteínas de trigo, na mucosa retal de indivíduos com NCWS.
WP4: avaliação da microbiota intestinal em pacientes com NCWS sob 3 regimes dietéticos diferentes: desafio WFD, TM e TA.
Tarefa 4.1: amplificação in vitro de materiais genéticos bacterianos de amostras fecais por métodos de reação em cadeia da polimerase (PCR) e identificação da composição da microbiota intestinal.
Tipo de estudo
Inscrição (Estimado)
Estágio
- Não aplicável
Contactos e Locais
Contato de estudo
- Nome: Pasquale Mansueto, MD
- Número de telefone: 00390916554815
- E-mail: pasquale.mansueto@unipa.it
Estude backup de contato
- Nome: Aurelio Seidita, MD
- Número de telefone: 00390916554815
- E-mail: aurelio.seidita@unipa.it
Locais de estudo
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Sicily
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Palermo, Sicily, Itália, 90127
- Recrutamento
- University Hospital of Palermo
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Contato:
- Pasquale Mansueto
- Número de telefone: 00390916554815
- E-mail: pasquale.mansueto@unipa.it
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Investigador principal:
- Pasquale Mansueto
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Subinvestigador:
- Antonio Carroccio
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Subinvestigador:
- Aurelio Seidita
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Critérios de participação
Critérios de elegibilidade
Idades elegíveis para estudo
- Adulto
- Adulto mais velho
Aceita Voluntários Saudáveis
Descrição
Critério de inclusão:
- idade >18 e <65 anos;
- negatividade da imunoglobulina (Ig) anti-gliadina desamidada (anti-DGP) classe A (IgA) e G (IgG); negatividade de IgA e IgG antitransglutaminase tecidual (anti-tTG) e anticorpos antiendomísio (EMA);
- ausência de atrofia das vilosidades intestinais, documentada em todos os pacientes portadores dos haplótipos de antígeno leucocitário humano DQ2 e/ou DQ8 (portanto, independentemente da negatividade dos anticorpos séricos específicos da doença celíaca);
- ausência de alergia ao trigo (teste de puntura negativo e/ou dosagem sérica de IgE específica para trigo, glúten e gliadina).
Critério de exclusão:
- idade <18 e >65 anos;
- autoexclusão do glúten/trigo da dieta e recusa em reintroduzi-lo, para fins diagnósticos, antes de ingressar no estudo;
- gravidez;
- abuso de álcool e/ou drogas;
- Helicobacter pylori e outras infecções bacterianas e/ou parasitárias;
- diagnóstico de doenças inflamatórias crónicas intestinais e outras patologias orgânicas que afectam o sistema digestivo (por exemplo, doenças hepáticas graves), doenças do sistema nervoso, perturbações psiquiátricas graves, défices imunológicos e deficiências que limitam a actividade física;
- Câncer
- pacientes submetidos à quimioterapia e/ou radioterapia.
Plano de estudo
Como o estudo é projetado?
Detalhes do projeto
- Finalidade Principal: Diagnóstico
- Alocação: Randomizado
- Modelo Intervencional: Atribuição cruzada
- Mascaramento: Quadruplicar
Armas e Intervenções
Grupo de Participantes / Braço |
Intervenção / Tratamento |
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Experimental: Pacotes NCWS AB
Os pacientes do NCWS serão submetidos a um DBWC Double-Blind Wheat Challenge com um trigo diplóide antigo (TM) ou um trigo hexaplóide moderno (TA).
Este DBWC será realizado com pacotes de farinha codificados A ou B, cada um contendo respectivamente uma das variedades de trigo.
Os pacotes A ou B serão administrados por 1 semana e então, após 1 semana de eliminação (ou até que os pacientes relatem bem-estar completo), os pacientes receberão os outros pacotes por mais 1 semana (desenho cruzado).
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Os pacientes receberão uma dose diária de 80g de farinha de Triticum Monococcum (equivalente a 10g de glúten), que será dissolvida e cozida pelos próprios pacientes. Durante o desafio, a gravidade dos sintomas será registrada por meio de uma escala visual analógica (VAS) de 10 pontos. Os desafios serão interrompidos quando ocorrerem reações clínicas por pelo menos 2 dias consecutivos (aumento >3 na VAS) para sintomas gastrointestinais ou extraintestinais. Os desafios serão considerados positivos se os sintomas, que estavam inicialmente presentes, reaparecerem após o seu desaparecimento na dieta de eliminação, e se as pontuações dos sintomas GI e/ou extraintestinais forem >30% em comparação com qualquer eventual aumento determinado durante a administração do outro trigo variedade. Os pacientes receberão uma dose diária de 80g de farinha de Triticum Aestivum (equivalente a 10g de glúten), que será dissolvida e cozida pelos próprios pacientes. Durante o desafio, a gravidade dos sintomas será registrada por meio de uma escala visual analógica (VAS) de 10 pontos. Os desafios serão interrompidos quando ocorrerem reações clínicas por pelo menos 2 dias consecutivos (aumento >3 na VAS) para sintomas gastrointestinais ou extraintestinais. Os desafios serão considerados positivos se os sintomas, que estavam inicialmente presentes, reaparecerem após o seu desaparecimento na dieta de eliminação, e se as pontuações dos sintomas GI e/ou extraintestinais forem >30% em comparação com qualquer eventual aumento determinado durante a administração do outro trigo variedade. |
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Experimental: Pacotes NCWS BA
Os pacientes do NCWS serão submetidos a um DBWC Double-Blind Wheat Challenge com um trigo diplóide antigo (TM) ou um trigo hexaplóide moderno (TA).
Este DBWC será realizado com pacotes de farinha codificados A ou B, cada um contendo respectivamente uma das variedades de trigo.
Os pacotes A ou B serão administrados por 1 semana e então, após 1 semana de eliminação (ou até que os pacientes relatem bem-estar completo), os pacientes receberão os outros pacotes por mais 1 semana (desenho cruzado).
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Os pacientes receberão uma dose diária de 80g de farinha de Triticum Monococcum (equivalente a 10g de glúten), que será dissolvida e cozida pelos próprios pacientes. Durante o desafio, a gravidade dos sintomas será registrada por meio de uma escala visual analógica (VAS) de 10 pontos. Os desafios serão interrompidos quando ocorrerem reações clínicas por pelo menos 2 dias consecutivos (aumento >3 na VAS) para sintomas gastrointestinais ou extraintestinais. Os desafios serão considerados positivos se os sintomas, que estavam inicialmente presentes, reaparecerem após o seu desaparecimento na dieta de eliminação, e se as pontuações dos sintomas GI e/ou extraintestinais forem >30% em comparação com qualquer eventual aumento determinado durante a administração do outro trigo variedade. Os pacientes receberão uma dose diária de 80g de farinha de Triticum Aestivum (equivalente a 10g de glúten), que será dissolvida e cozida pelos próprios pacientes. Durante o desafio, a gravidade dos sintomas será registrada por meio de uma escala visual analógica (VAS) de 10 pontos. Os desafios serão interrompidos quando ocorrerem reações clínicas por pelo menos 2 dias consecutivos (aumento >3 na VAS) para sintomas gastrointestinais ou extraintestinais. Os desafios serão considerados positivos se os sintomas, que estavam inicialmente presentes, reaparecerem após o seu desaparecimento na dieta de eliminação, e se as pontuações dos sintomas GI e/ou extraintestinais forem >30% em comparação com qualquer eventual aumento determinado durante a administração do outro trigo variedade. |
O que o estudo está medindo?
Medidas de resultados primários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
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Avaliação de sintomas gastrointestinais evocados pela exposição alimentar a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Uma versão modificada da Escala de Avaliação de Sintomas Gastrointestinais (GSRS) será administrada a todos os pacientes durante cada consulta ambulatorial para avaliar os sintomas gastrointestinais antes do desafio (T0, dieta sem trigo) e após a exposição a Triticum Monococcum (TM) e Triticum Aestivum ( TA). A diferença será considerada relevante se o GSRS for registrado >30% em relação ao T0 e/ou a qualquer eventual aumento determinado durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Avaliação de sintomas extraintestinais evocados pela exposição alimentar a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Uma escala de classificação de sintomas extraintestinais, baseada nos sintomas mais frequentemente observados em pacientes com NCWS, será administrada a todos os pacientes durante cada consulta ambulatorial para avaliar os sintomas gastrointestinais antes do desafio (T0, dieta sem trigo) e após a exposição a ambos Triticum Monococcum ( TM) e Triticum Aestivum (TA). A diferença será considerada relevante se a escala de classificação de sintomas extraintestinais for registrada >30% em relação a T0 e/ou a qualquer eventual aumento determinado durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Avaliação da modificação da qualidade de vida evocada pela exposição alimentar a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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A Síndrome do Cólon Irritável-Qualidade de Vida (IBS-QoL) será usada para avaliar a QV do paciente. É uma ferramenta específica de condição já validada para pacientes com SII, que incorpora subdomínios específicos, como evitar alimentos, hábitos intestinais e o efeito nas relações sociais/sexuais. O IBS-QoL será administrado a todos os pacientes durante cada consulta ambulatorial para avaliar os sintomas gastrointestinais antes do desafio (T0, dieta sem trigo) e após a exposição ao Triticum Monococcum (TM) e ao Triticum Aestivum (TA). A diferença será considerada relevante se o IBS-QoL for registrado >30% em relação ao T0 e/ou a qualquer eventual aumento determinado durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Medidas de resultados secundários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
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Avaliação in vivo da modificação da permeabilidade intestinal evocada pela exposição dietética a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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A avaliação in vivo da permeabilidade intestinal será realizada por meio do teste da relação Lactulose/Manitol (La/Ma), já validado para distúrbios relacionados ao glúten e outras doenças gastrointestinais com diarreia e má absorção. O teste baseia-se na administração oral (após 12 horas de jejum) de uma solução aquosa isosmolar (270mOsm) de 2 açúcares não absorvíveis (5g de lactulose e 2g de manitol), em 150ml de água. Não sendo metabolizáveis, os 2 açúcares são filtrados pelos rins e encontrados na urina; uma coleta de urina 5 horas após o bolus contém tudo o que foi filtrado, com relação La/Ma <0,035, que é considerado o índice de permeabilidade intestinal "normal" (valores ≥0,035 serão considerados como índice de permeabilidade GI aumentada). A diferença da relação La/Ma será considerada relevante para p<0,05 em relação aos valores de T0 e/ou aos valores determinados durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Análise da modificação dos índices sorológicos de permeabilidade intestinal evocados pela exposição dietética a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum: zonulina
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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A dosagem da zonulina será realizada por kits comerciais de ELISA de acordo com as instruções do fabricante. A diferença nos valores de zonulina será considerada relevante para p<0,05 em relação aos valores registrados em T0 e/ou aos valores determinados durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Análise da modificação dos índices sorológicos de permeabilidade intestinal evocados pela exposição dietética a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum: ocludina
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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A dosagem de ocludina será realizada por kits comerciais de ELISA de acordo com as instruções do fabricante. A diferença nos valores de ocludina será considerada relevante para p<0,05 em relação aos valores registrados em T0 e/ou aos valores determinados durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Análise da modificação dos índices sorológicos de permeabilidade intestinal evocados pela exposição dietética a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum: claudina 1
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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A dosagem de Claudin 1 será realizada por kits comerciais de ELISA de acordo com as instruções do fabricante. A diferença nos valores de Claudina 1 será considerada relevante para p<0,05 em relação aos valores registrados em T0 e/ou aos valores determinados durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Análise da modificação dos índices sorológicos de lesão intestinal evocados pela exposição dietética a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum: proteína ligadora de ácidos graxos intestinais
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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a dosagem de proteínas de ligação a ácidos graxos intestinais será realizada por kits comerciais de ELISA de acordo com as instruções do fabricante. A diferença nos valores da proteína ligadora de ácidos graxos intestinais será considerada relevante para p<0,05 em comparação aos valores registrados em T0 e/ou aos valores determinados durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Análise da modificação de índices sorológicos de lesão intestinal evocados pela exposição dietética a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum: lipopolissacarídeo
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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A dosagem de lipopolissacarídeos será realizada por kits comerciais de ELISA de acordo com as instruções do fabricante. a diferença nos valores dos lipopolissacarídeos será considerada relevante para p<0,05 em relação aos valores registrados em T0 e/ou aos valores determinados durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Análise da modificação dos índices sorológicos de lesão intestinal evocados pela exposição dietética a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum: proteína de ligação a lipopolissacarídeos
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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A dosagem da proteína de ligação aos lipopolissacarídeos será realizada por kits comerciais de ELISA de acordo com as instruções do fabricante. A diferença nos valores da proteína de ligação aos lipopolissacarídeos será considerada relevante para p<0,05 em comparação aos valores registrados em T0 e/ou aos valores determinados durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Análise da modificação dos índices sorológicos de lesão intestinal evocados pela exposição dietética a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum: imunoglobulina F-actina (Ig)A
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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A dosagem da imunoglobulina F-actina (Ig)A será realizada por kits comerciais de ELISA de acordo com as instruções do fabricante. A diferença nos valores da imunoglobulina F-actina (Ig)A será considerada relevante para p<0,05 em relação aos valores registrados em T0 e/ou aos valores determinados durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Análise da modificação dos índices sorológicos de lesão intestinal evocados pela exposição dietética a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum: imunoglobulina F-actina (Ig)G
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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A dosagem da imunoglobulina F-actina (Ig)G será realizada por kits comerciais de ELISA de acordo com as instruções do fabricante. A diferença nos valores da imunoglobulina F-actina (Ig)G será considerada relevante para p<0,05 em relação aos valores registrados em T0 e/ou aos valores determinados durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Análise da modificação dos índices de hipersensibilidade intestinal evocados pela exposição dietética a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum: proteína catiônica eosinófila
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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A dosagem da proteína catiônica eosinófila será realizada em amostras de fezes seguindo metodologias já validadas. A diferença nos valores da proteína catiônica eosinófila será considerada relevante para p<0,05 em relação aos valores registrados em T0 e/ou aos valores determinados durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Análise da modificação dos índices de hipersensibilidade intestinal evocados pela exposição dietética a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum: triptase
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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A dosagem de triptase será realizada em amostras de fezes seguindo metodologias já validadas. A diferença nos valores de triptase será considerada relevante para p<0,05 em relação aos valores registrados em T0 e/ou aos valores determinados durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Análise da modificação dos índices de hipersensibilidade intestinal evocados pela exposição dietética a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum: substância P
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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A dosagem da substância P será realizada em amostras de sangue por kits comerciais de ELISA de acordo com as instruções do fabricante. A diferença nos valores da substância P será considerada relevante para p<0,05 em relação aos valores registrados em T0 e/ou aos valores determinados durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Análise da modificação dos índices de hipersensibilidade intestinal evocados pela exposição dietética a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum: somatostatina
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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A dosagem de somatostatina será realizada em amostras de sangue por kits comerciais de ELISA de acordo com as instruções do fabricante. A diferença nos valores de somatostatina será considerada relevante para p<0,05 em relação aos valores registrados em T0 e/ou aos valores determinados durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Análise da modificação dos índices de hipersensibilidade intestinal evocados pela exposição dietética a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum: serotonina
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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A dosagem de serotonina será realizada em amostras de sangue por kits comerciais de ELISA de acordo com as instruções do fabricante. A diferença nos valores de serotonina será considerada relevante para p<0,05 em relação aos valores registrados em T0 e/ou aos valores determinados durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Análise da modificação dos índices de hipersensibilidade intestinal evocados pela exposição dietética a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum: peptídeo intestinal vasoativo
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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A dosagem do peptídeo intestinal vasoativo será realizada em amostras de sangue por kits comerciais de ELISA de acordo com as instruções do fabricante. A diferença nos valores do peptídeo intestinal vasoativo será considerada relevante para p<0,05 em relação aos valores registrados em T0 e/ou aos valores determinados durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Análise da modificação da resposta imune humoral ao glúten evocada pela exposição dietética a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum: anticorpos anti-gliadina imunoglobulina A
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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A resposta imune humoral ao glúten será avaliada pela dosagem dos níveis plasmáticos de anticorpos anti-gliadina imunoglobulina A por ensaios ELISA comerciais, seguindo as instruções do fabricante. A diferença nos valores de anticorpos antigliadina e imunoglobulina A será considerada relevante para p<0,05 em relação aos valores registrados em T0 e/ou aos valores determinados durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Análise da modificação da resposta imune humoral ao glúten evocada pela exposição dietética a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum: anticorpos anti-gliadina imunoglobulina G
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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A resposta imune humoral ao glúten será avaliada pela dosagem dos níveis plasmáticos de anticorpos anti-gliadina imunoglobulina G por ensaios ELISA comerciais, seguindo as instruções do fabricante. A diferença nos valores de imunoglobulina G de anticorpos antigliadina será considerada relevante para p<0,05 em comparação aos valores registrados em T0 e/ou aos valores determinados durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Análise da modificação dos biomarcadores inflamatórios sorológicos evocados pela exposição dietética a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum: fator estimulador de colônias de granulócitos
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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A expressão de biomarcadores inflamatórios sorológicos será avaliada, em todas as amostras coletadas, por multiplexação de análise simultânea com ensaios baseados em microesferas de alta sensibilidade ou ELISA. A diferença nos valores do fator estimulador de colônias de granulócitos será considerada relevante para p<0,05 em comparação aos valores registrados em T0 e/ou aos valores determinados durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Análise da modificação dos biomarcadores inflamatórios sorológicos evocados pela exposição dietética a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum: fator estimulador de colônias de granulócitos-macrófagos
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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A expressão de biomarcadores inflamatórios sorológicos será avaliada, em todas as amostras coletadas, por multiplexação de análise simultânea com ensaios baseados em microesferas de alta sensibilidade ou ELISA. A diferença nos valores do fator estimulador de colônias de granulócitos-macrófagos será considerada relevante para p<0,05 em comparação aos valores registrados em T0 e/ou aos valores determinados durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Análise da modificação dos biomarcadores inflamatórios sorológicos evocados pela exposição dietética a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum: interferon (IFN)-γ
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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A expressão de biomarcadores inflamatórios sorológicos será avaliada, em todas as amostras coletadas, por multiplexação de análise simultânea com ensaios baseados em microesferas de alta sensibilidade ou ELISA. A diferença nos valores de interferon (IFN)-γ será considerada relevante para p<0,05 em relação aos valores registrados em T0 e/ou aos valores determinados durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Análise da modificação dos biomarcadores inflamatórios sorológicos evocados pela exposição dietética a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum: interleucina (IL)-1β
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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A expressão de biomarcadores inflamatórios sorológicos será avaliada, em todas as amostras coletadas, por multiplexação de análise simultânea com ensaios baseados em microesferas de alta sensibilidade ou ELISA. A diferença nos valores de interleucina (IL)-1β será considerada relevante para p<0,05 em relação aos valores registrados em T0 e/ou aos valores determinados durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Análise da modificação dos biomarcadores inflamatórios sorológicos evocados pela exposição dietética a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum: interleucina (IL)-2
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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A expressão de biomarcadores inflamatórios sorológicos será avaliada, em todas as amostras coletadas, por multiplexação de análise simultânea com ensaios baseados em microesferas de alta sensibilidade ou ELISA. A diferença nos valores de interleucina (IL)-2 será considerada relevante para p<0,05 em relação aos valores registrados em T0 e/ou aos valores determinados durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Análise da modificação dos biomarcadores inflamatórios sorológicos evocados pela exposição dietética a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum: interleucina (IL)-4
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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A expressão de biomarcadores inflamatórios sorológicos será avaliada, em todas as amostras coletadas, por multiplexação de análise simultânea com ensaios baseados em microesferas de alta sensibilidade ou ELISA. A diferença nos valores de interleucina (IL)-4 será considerada relevante para p<0,05 em relação aos valores registrados em T0 e/ou aos valores determinados durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Análise da modificação dos biomarcadores inflamatórios sorológicos evocados pela exposição dietética a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum: interleucina (IL)-5
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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A expressão de biomarcadores inflamatórios sorológicos será avaliada, em todas as amostras coletadas, por multiplexação de análise simultânea com ensaios baseados em microesferas de alta sensibilidade ou ELISA. A diferença nos valores de interleucina (IL)-5 será considerada relevante para p<0,05 em relação aos valores registrados em T0 e/ou aos valores determinados durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Análise da modificação dos biomarcadores inflamatórios sorológicos evocados pela exposição dietética a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum: interleucina (IL)-6
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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A expressão de biomarcadores inflamatórios sorológicos será avaliada, em todas as amostras coletadas, por multiplexação de análise simultânea com ensaios baseados em microesferas de alta sensibilidade ou ELISA. A diferença nos valores de interleucina (IL)-6 será considerada relevante para p<0,05 em relação aos valores registrados em T0 e/ou aos valores determinados durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Análise da modificação dos biomarcadores inflamatórios sorológicos evocados pela exposição dietética a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum: interleucina (IL)-8
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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A expressão de biomarcadores inflamatórios sorológicos será avaliada, em todas as amostras coletadas, por multiplexação de análise simultânea com ensaios baseados em microesferas de alta sensibilidade ou ELISA. A diferença nos valores de interleucina (IL)-8 será considerada relevante para p<0,05 em relação aos valores registrados em T0 e/ou aos valores determinados durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Análise da modificação dos biomarcadores inflamatórios sorológicos evocados pela exposição dietética a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum: interleucina (IL)-9
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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A expressão de biomarcadores inflamatórios sorológicos será avaliada, em todas as amostras coletadas, por multiplexação de análise simultânea com ensaios baseados em microesferas de alta sensibilidade ou ELISA. A diferença nos valores de interleucina (IL)-9 será considerada relevante para p<0,05 em relação aos valores registrados em T0 e/ou aos valores determinados durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Análise da modificação dos biomarcadores inflamatórios sorológicos evocados pela exposição dietética a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum: interleucina (IL)-10
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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A expressão de biomarcadores inflamatórios sorológicos será avaliada, em todas as amostras coletadas, por multiplexação de análise simultânea com ensaios baseados em microesferas de alta sensibilidade ou ELISA. A diferença nos valores de interleucina (IL)-10 será considerada relevante para p<0,05 em relação aos valores registrados em T0 e/ou aos valores determinados durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Análise da modificação dos biomarcadores inflamatórios sorológicos evocados pela exposição dietética a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum: interleucina (IL)-12
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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A expressão de biomarcadores inflamatórios sorológicos será avaliada, em todas as amostras coletadas, por multiplexação de análise simultânea com ensaios baseados em microesferas de alta sensibilidade ou ELISA. A diferença nos valores de interleucina (IL)-12 será considerada relevante para p<0,05 em relação aos valores registrados em T0 e/ou aos valores determinados durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Análise da modificação dos biomarcadores inflamatórios sorológicos evocados pela exposição dietética a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum: interleucina (IL)-13
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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A expressão de biomarcadores inflamatórios sorológicos será avaliada, em todas as amostras coletadas, por multiplexação de análise simultânea com ensaios baseados em microesferas de alta sensibilidade ou ELISA. A diferença nos valores de interleucina (IL)-13 será considerada relevante para p<0,05 em relação aos valores registrados em T0 e/ou aos valores determinados durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Análise da modificação dos biomarcadores inflamatórios sorológicos evocados pela exposição dietética a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum: interleucina (IL)-15
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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A expressão de biomarcadores inflamatórios sorológicos será avaliada, em todas as amostras coletadas, por multiplexação de análise simultânea com ensaios baseados em microesferas de alta sensibilidade ou ELISA. A diferença nos valores de interleucina (IL)-15 será considerada relevante para p<0,05 em relação aos valores registrados em T0 e/ou aos valores determinados durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Análise da modificação dos biomarcadores inflamatórios sorológicos evocados pela exposição dietética a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum: interleucina (IL)-17
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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A expressão de biomarcadores inflamatórios sorológicos será avaliada, em todas as amostras coletadas, por multiplexação de análise simultânea com ensaios baseados em microesferas de alta sensibilidade ou ELISA. A diferença nos valores de interleucina (IL)-17 será considerada relevante para p<0,05 em relação aos valores registrados em T0 e/ou aos valores determinados durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Análise da modificação dos biomarcadores inflamatórios sorológicos evocados pela exposição dietética a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum: interleucina (IL)-21
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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A expressão de biomarcadores inflamatórios sorológicos será avaliada, em todas as amostras coletadas, por multiplexação de análise simultânea com ensaios baseados em microesferas de alta sensibilidade ou ELISA. A diferença nos valores de interleucina (IL)-21 será considerada relevante para p<0,05 em relação aos valores registrados em T0 e/ou aos valores determinados durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Análise da modificação dos biomarcadores inflamatórios sorológicos evocados pela exposição dietética a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum: interleucina (IL)-22
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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A expressão de biomarcadores inflamatórios sorológicos será avaliada, em todas as amostras coletadas, por multiplexação de análise simultânea com ensaios baseados em microesferas de alta sensibilidade ou ELISA. A diferença nos valores de interleucina (IL)-22 será considerada relevante para p<0,05 em relação aos valores registrados em T0 e/ou aos valores determinados durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Análise da modificação dos biomarcadores inflamatórios sorológicos evocados pela exposição dietética a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum: interleucina (IL)-33
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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A expressão de biomarcadores inflamatórios sorológicos será avaliada, em todas as amostras coletadas, por multiplexação de análise simultânea com ensaios baseados em microesferas de alta sensibilidade ou ELISA. A diferença nos valores de interleucina (IL)-33 será considerada relevante para p<0,05 em relação aos valores registrados em T0 e/ou aos valores determinados durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Análise da modificação dos biomarcadores inflamatórios sorológicos evocados pela exposição dietética a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum: fator de necrose tumoral (TNF)-α
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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A expressão de biomarcadores inflamatórios sorológicos será avaliada, em todas as amostras coletadas, por multiplexação de análise simultânea com ensaios baseados em microesferas de alta sensibilidade ou ELISA. A diferença nos valores do fator de necrose tumoral (TNF)-α será considerada relevante para p<0,05 em relação aos valores registrados em T0 e/ou aos valores determinados durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Análise de imunofenotipagem de sangue total para quantificação de modificação de subpopulações de células imunes (CI) e seu estado de ativação evocado pela exposição dietética a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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A imunofenotipagem será realizada por citometria de fluxo multicolorida.
O sangue será corado com anticorpos conjugados com fluorocromo específicos para marcadores de superfície de linhagens de populações celulares e ativação imunológica para permitir a quantificação das populações de células imunes e seu status de ativação A diferença das populações de células imunes será considerada relevante para p<0,05 em comparação aos valores registrados em T0 e /ou aos valores determinados durante a administração da outra variedade de trigo.
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Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Identificação de linfócitos de células T capazes de reconhecer peptídeos cognatos de proteínas de trigo
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Para identificar células T capazes de reconhecer peptídeos cognatos de proteínas de trigo, células imunes CD45+ serão coletadas de amostras de biópsia retal obtidas de 10 pacientes, no início do estudo e quando relatarão a recorrência dos sintomas no desafio duplo-cego do trigo.
As biópsias retais serão transferidas em meio de cultura completo, picado em pequenos pedaços, seguido de digestão enzimática.
Em seguida, a fração CD45+ será classificada e usada para análises -ômicas subsequentes.
As células imunes obtidas nas biópsias serão submetidas à caracterização Single Cell, com o objetivo de investigar alterações no microambiente imunológico, por meio de análises CITE-seq e TCR-seq.
Para obter informações sobre sequências de receptores de células T capazes de reconhecer supostos peptídeos originados das principais proteínas do trigo (glúten, etc.), desenvolveremos um modelo preditivo de rede neural/docking para interação TCR/epítopo.
Os candidatos finais aos peptídeos de trigo serão então validados in vitro usando um ensaio Elispot.
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Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Análise da modificação da microbiota intestinal evocada pela exposição alimentar a Triticum Monococcum e Triticum Aestivum
Prazo: Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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a identificação in vitro da microbiota intestinal será realizada por amplificação, análise e quantificação do microbioma intestinal em amostras de fezes. Após a coleta de fezes, o DNA bacteriano será extraído por brometo de cetiltrimetil amônio e o sequenciamento do rDNA 16S será realizado pelos métodos de reação em cadeia da polimerase (PCR), utilizando primers universais. Os fragmentos resultantes serão então sequenciados por pirosequenciamento. Cada leitura será comparada com um banco de dados de sequências conhecidas de rDNA 16S, utilizando o programa BLAT, atribuindo filogeneticamente os nós mais específicos e confiáveis. Este método de atribuição dos dados obtidos conduz a uma árvore filogenética “ponderada” que caracteriza bem o conteúdo bacteriano da amostra. A diferença da microbiota intestinal será considerada relevante para p<0,05 em comparação aos valores registrados em T0 e/ou aos valores determinados durante a administração da outra variedade de trigo. |
Dias 0 (antes do início do desafio), 7 (após ingestão do primeiro tipo de farinha conforme randomização) e 21 (após ingestão do segundo tipo de farinha conforme randomização)
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Colaboradores e Investigadores
Patrocinador
Colaboradores
Investigadores
- Cadeira de estudo: Antonio Carroccio, MD, University of Palermo
Publicações e links úteis
Publicações Gerais
- Carroccio A, Giannone G, Mansueto P, Soresi M, La Blasca F, Fayer F, Iacobucci R, Porcasi R, Catalano T, Geraci G, Arini A, D'Alcamo A, Villanacci V, Florena AM. Duodenal and Rectal Mucosa Inflammation in Patients With Non-celiac Wheat Sensitivity. Clin Gastroenterol Hepatol. 2019 Mar;17(4):682-690.e3. doi: 10.1016/j.cgh.2018.08.043. Epub 2018 Aug 21.
- Schuppan D, Pickert G, Ashfaq-Khan M, Zevallos V. Non-celiac wheat sensitivity: differential diagnosis, triggers and implications. Best Pract Res Clin Gastroenterol. 2015 Jun;29(3):469-76. doi: 10.1016/j.bpg.2015.04.002. Epub 2015 May 8.
- Dieterich W, Schuppan D, Schink M, Schwappacher R, Wirtz S, Agaimy A, Neurath MF, Zopf Y. Influence of low FODMAP and gluten-free diets on disease activity and intestinal microbiota in patients with non-celiac gluten sensitivity. Clin Nutr. 2019 Apr;38(2):697-707. doi: 10.1016/j.clnu.2018.03.017. Epub 2018 Apr 4.
- Rotondi Aufiero V, Fasano A, Mazzarella G. Non-Celiac Gluten Sensitivity: How Its Gut Immune Activation and Potential Dietary Management Differ from Celiac Disease. Mol Nutr Food Res. 2018 May;62(9):e1700854. doi: 10.1002/mnfr.201700854. Epub 2018 Apr 20.
- Sofi F, Whittaker A, Gori AM, Cesari F, Surrenti E, Abbate R, Gensini GF, Benedettelli S, Casini A. Effect of Triticum turgidum subsp. turanicum wheat on irritable bowel syndrome: a double-blinded randomised dietary intervention trial. Br J Nutr. 2014 Jun 14;111(11):1992-9. doi: 10.1017/S000711451400018X. Epub 2014 Feb 13.
- Seidita A, Mansueto P, Giuliano A, Chiavetta M, Mandreucci F, Soresi M, Pistone M, Compagnoni S, Castellucci D, Bisso G, Faraci F, Maestri S, Disclafani R, Sapone A, Fasano A, Carroccio A. Potential tolerability of ancient grains in non-celiac wheat sensitivity patients: A preliminary evaluation. Front Med (Lausanne). 2022 Sep 28;9:995019. doi: 10.3389/fmed.2022.995019. eCollection 2022.
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Termos MeSH relevantes adicionais
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- ACPM33
Plano para dados de participantes individuais (IPD)
Planeja compartilhar dados de participantes individuais (IPD)?
Informações sobre medicamentos e dispositivos, documentos de estudo
Estuda um medicamento regulamentado pela FDA dos EUA
Estuda um produto de dispositivo regulamentado pela FDA dos EUA
produto fabricado e exportado dos EUA
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