Identificación de células reguladoras B por citometría de flujo

La inmunoterapia con alérgeno (AIT) es un tratamiento modificador de la enfermedad para la enfermedad alérgica que promueve la tolerancia al sistema inmune, es decir, reduce las manifestaciones clínicas de la alergia y es el único tratamiento efectivo conocido para prevenir la anafilaxia en pacientes que previamente han tenido reacciones graves a las venenos insectos. AIT induce una variedad de cambios de sistema inmune para facilitar este proceso, un mecanismo es la producción de una población de glóbulos blancos llamadas células B-reguladoras (Bregs). Estas células liberan un químico llamado interleucina-10 (IL-10) que inhibe (controla) la respuesta inmune alérgica. El éxito de AIT es difícil de establecer/monitorear durante el tratamiento. A menudo, el éxito del tratamiento solo puede establecerse al final de un largo período de tratamiento (generalmente 3 años) y actualmente los médicos confían en los síntomas del paciente en la exposición a alérgenos adicionales. Por lo tanto, existe el requisito de identificar un marcador (biomarcador) que se pueda probar durante el tratamiento para ayudar a los médicos a establecer en un momento anterior, si el AIT muestra éxito o si se requiere un cambio en el tratamiento. Esta investigación medirá la producción de Breg e IL-10 en pacientes antes, en múltiples puntos durante, y después de completar AIT, para establecer si existe una relación entre la concentración Breg/IL-10 y el éxito o el fracaso de AIT en el control de los síntomas de alergia del paciente. La esperanza es que la medición de Breg podría usarse en el futuro como biomarcador para la eficacia de AIT y, por lo tanto, proporcionar evidencia del éxito de AIT antes que los protocolos actuales, o establecer la falla de AIT y, por lo tanto, acelerar un cambio en el tratamiento. Esto último probablemente dará como resultado un ahorro de tiempo en la búsqueda de un tratamiento que no funcione, pero también para comprender cuándo el tratamiento ya ha alcanzado una efectividad óptima y puede detenerse.

Objetivo general:

Desarrollar un ensayo de citometría de flujo para la identificación y cuantificación de células reguladoras B humanas para permitir la evaluación de su papel potencial como biomarcador de eficacia del tratamiento en la inmunoterapia específica de alérgenos.

Objetivos principales:

1. Identificación de un biomarcador que define el éxito de la inmunoterapia con alérgenos
2. Desarrollo de un nuevo ensayo de citometría de flujo para detectar y cuantificar las células reguladoras B en la sangre completa/célula mononuclear de sangre periférica (PBMC) aislar
3. Determine los intervalos de referencia para la cuantificación de células Breg en los grupos de prueba y control utilizando medidas paramétricas o no paramétricas convencionales, dependiendo de las características de los datos obtenidos

Objetivos secundarios:

1. Evaluación del rendimiento de los métodos de citometría de flujo según el protocolo de laboratorio habitual
2. Comparación de la cuantificación de células Breg en el grupo de control versos el grupo de prueba y el grupo de prueba en los versos de línea de base en AIT
3. Comparación de la cuantificación de células Breg en pacientes que reciben AIT subcutáneo y sublingual
4. Comparación de anticuerpos de bloqueo específicos de alérgenos (IgG4 específico de alérgenos) en el grupo de prueba al inicio y en los de AIT
5. Evaluar la correlación de la cuantificación de anticuerpos de bloqueo específicos de alérgenos con cambios en las concentraciones de células reguladoras B de sangre completa B