Identificação de células reguladoras B por citometria de fluxo

A imunoterapia com alérgenos (AIT) é um tratamento modificador da doença para doenças alérgicas que promove a tolerância ao sistema imunológico, isto é, reduz as manifestações clínicas da alergia e é o único tratamento eficaz conhecido para prevenir anafilaxia em pacientes que tiveram anteriormente reações sérias a venenos de insetos. O AIT induz uma variedade de alterações no sistema imunológico para facilitar esse processo, cujo mecanismo é a produção de uma população de glóbulos brancos chamados células reguladoras B (Bregs). Essas células liberam um produto químico chamado interleucina-10 (IL-10) que inibe (controla) a resposta imune alérgica. O sucesso da AIT é difícil de estabelecer/monitorar durante o tratamento. Muitas vezes, o sucesso do tratamento só pode ser estabelecido no final de um longo período de tratamento (normalmente 3 anos) e atualmente os médicos dependem dos sintomas dos pacientes na exposição a alérgenos adicionais. Portanto, há um requisito para identificar um marcador (biomarcador) que pode ser testado durante o tratamento para ajudar os médicos a se estabelecer mais cedo, se o AIT estiver mostrando sucesso ou se for necessária um tratamento. Esta pesquisa medirá a produção de Breg e IL-10 em pacientes antes, em vários pontos durante e após a conclusão do AIT, para estabelecer se existe uma relação entre a concentração de Breg/IL-10 e o sucesso ou falha da AIT no controle dos sintomas do paciente de alergia. A esperança é que a medição de Breg possa ser usada no futuro como um biomarcador para a eficácia do AIT e, portanto, fornecer evidências de sucesso do AIT mais cedo que os protocolos atuais ou estabelecer falha do AIT e, portanto, acelerar uma mudança no tratamento. Este último provavelmente resultará em economizar tempo na busca de um tratamento que não está funcionando, mas também para entender quando o tratamento já atingiu a eficácia ideal e pode ser interrompida.

Objetivo geral:

Desenvolver um ensaio de citometria de fluxo para a identificação e quantificação de células reguladoras B humanas para permitir a avaliação de seu papel potencial como um biomarcador de eficácia do tratamento na imunoterapia específica para alérgenos.

Objetivos primários:

1. Identificação de um biomarcador que define o sucesso da imunoterapia com alérgenos
2. Desenvolvimento de um novo ensaio de citometria de fluxo para detectar e quantificar células reguladoras B em isolado de células mononucleares de sangue/sangue periférico inteiro (PBMC)
3. Determine os intervalos de referência para quantificação de células Breg nos grupos de teste e controle usando medidas paramétricas ou não paramétricas convencionais, dependendo das características dos dados obtidos

Objetivos secundários:

1. Avaliação do desempenho dos métodos de citometria de fluxo conforme o protocolo laboratório usual
2. Comparação da quantificação de células Breg no grupo controle versículos o grupo de teste e o grupo de teste nos versos da linha de base no AIT
3. Comparação da quantificação de células Breg em pacientes que recebem AIT subcutâneo e sublingual
4. Comparação de anticorpos de bloqueio específicos para alérgenos (IgG4 específica de alérgenos) no grupo de teste na linha de base e naqueles no AIT
5. Avalie a correlação da quantificação de anticorpos de bloqueio específica para alérgenos com alterações nas concentrações de células reguladoras do sangue inteiro B