Investigación Transformadora en Nefropatía Diabética 2.0 (TRIDENT 2)

TRIDENT 2.0 es un estudio observacional traslacional multicéntrico que caracteriza las características moleculares e histopatológicas renales en relación con la exposición a terapias nefroprotectoras, con especial atención a los inhibidores del cotransportador sodio-glucosa 2 (SGLT2). El estudio aprovecha material de patología renal clínico archivado y datos clínicos armonizados para respaldar análisis moleculares e histológicos integrados en los centros participantes.

Fuentes de tejidos y flujos de trabajo del repositorio central:

Las secciones/láminas de tejido renal fijadas en formalina e incluidas en parafina (FFPE) se generan a partir de material de patología clínica archivado (incluidas biopsias renales indicadas clínicamente y muestras disponibles de donantes o nefrectomías) y se transfieren bajo identificadores codificados a un repositorio central para ensayos moleculares posteriores y patología digital.

Transcriptómica espacial y perfilación molecular:

Se utilizan métodos de transcriptómica espacialmente resueltos para generar mapas moleculares de alta resolución preservando la arquitectura tisular. Las secciones FFPE (o congeladas en fresco, cuando están disponibles) pueden procesarse utilizando plataformas de transcriptómica espacial disponibles comercialmente (por ejemplo, 10x Genomics Visium, NanoString CosMx, Xenium) o tecnologías actualizadas implementadas bajo la gobernanza del estudio. Los procedimientos estándar de control de calidad evalúan la integridad del tejido, la calidad del ARN, la eficiencia de captura y la resolución de los principales compartimentos y tipos celulares renales. La secuenciación se realiza en plataformas Illumina con una profundidad apropiada para la plataforma, seguida de un preprocesamiento utilizando flujos de trabajo específicos de la plataforma y análisis posteriores en flujos de trabajo de R/Python (por ejemplo, Seurat o equivalente) con normalización y corrección de lotes según sea necesario. Los análisis planificados incluyen la identificación de firmas de tipos y subtipos celulares en contexto espacial, el mapeo de patrones de lesión (por ejemplo, fibrosis/inflamación/remodelación vascular) y la perfilación molecular comparativa entre categorías de enfermedad y grupos de exposición a terapias, con ajuste por covariables relevantes.

Patología digital y revisión histopatológica centralizada:

Se utilizan tinciones clínicas digitalizadas e imágenes diagnósticas disponibles para la revisión centralizada y la puntuación estandarizada de lesiones por patólogos renales. Cuando sea aplicable, la nefropatía diabética (DKD) se clasifica utilizando criterios de patología renal establecidos. Las métricas de adecuación de la muestra se utilizan para guiar la inclusión analítica y los análisis de sensibilidad.

Datos clínicos vinculados (nivel superior):

Los datos clínicos se armonizan entre centros para respaldar la integración clinicopatológica y molecular, incluida la historia de exposición a medicamentos y variables de laboratorio y diagnósticas relevantes. La información clínica longitudinal se utiliza para contextualizar los hallazgos moleculares e histológicos para el modelado posterior.

Enfoque analítico estadístico e integrador:

Los métodos analíticos incluyen análisis de expresión diferencial y de vías con control apropiado de pruebas múltiples y ajuste de covariables. El modelado integrador puede combinar dominios moleculares, histológicos y clínicos utilizando enfoques de reducción de dimensión y regularizados para derivar firmas moleculares asociadas con el estado de la enfermedad y la exposición a terapias.