Investigação Transformadora na Nefropatia Diabética 2.0 (TRIDENT 2)

O TRIDENT 2.0 é um estudo translacional observacional multicêntrico que caracteriza as características moleculares e histopatológicas renais em relação à exposição a terapias nefroprotetoras, com foco em inibidores do cotransportador de sódio-glucose 2 (SGLT2). O estudo aproveita material clínico de patologia renal arquivado e dados clínicos harmonizados para apoiar análises moleculares-histológicas integradas entre os locais participantes.

Fontes de tecido e fluxos de trabalho do repositório central:

Secções/lâminas de tecido renal fixadas em formol e incluídas em parafina (FFPE) são geradas a partir de material de patologia clínica arquivado (incluindo biópsias renais indicadas clinicamente e espécimes disponíveis de dadores ou nefrectomias) e transferidas sob identificadores codificados para um repositório central para ensaios moleculares subsequentes e patologia digital.

Transcriptómica espacial e perfil molecular:

Métodos de transcriptómica espacialmente resolvidos são utilizados para gerar mapas moleculares de alta resolução, preservando a arquitetura do tecido. Secções FFPE (ou congeladas a fresco, quando disponíveis) podem ser processadas utilizando plataformas de transcriptómica espacial disponíveis comercialmente (por exemplo, 10x Genomics Visium, NanoString CosMx, Xenium) ou tecnologias atualizadas implementadas sob a governação do estudo. Procedimentos padrão de controlo de qualidade avaliam a integridade do tecido, a qualidade do RNA, a eficiência de captura e a resolução dos principais compartimentos e tipos celulares renais. O sequenciamento é realizado em plataformas Illumina com profundidade adequada à plataforma, seguido de pré-processamento utilizando pipelines específicos da plataforma e análise subsequente em fluxos de trabalho R/Python (por exemplo, Seurat ou equivalente) com normalização e correção de lotes conforme necessário. Análises planeadas incluem a identificação de assinaturas de tipos celulares e subtipos celulares em contexto espacial, mapeamento de padrões de lesão (por exemplo, fibrose/inflamação/remodelação vascular) e perfil molecular comparativo entre categorias de doença e grupos de exposição terapêutica com ajuste para covariáveis relevantes.

Patologia digital e revisão histopatológica centralizada:

Colorações clínicas digitalizadas e imagens diagnósticas disponíveis são utilizadas para revisão centralizada e pontuação padronizada de lesões por patologistas renais. Quando aplicável, a doença renal diabética (DKD) é classificada utilizando critérios estabelecidos de patologia renal. Métricas de adequação do espécime são utilizadas para orientar a inclusão analítica e análises de sensibilidade.

Dados clínicos ligados (alto nível):

Os dados clínicos são harmonizados entre locais para apoiar a integração clinicopatológica e molecular, incluindo o histórico de exposição a medicamentos e variáveis laboratoriais e diagnósticas relevantes. Informação clínica longitudinal é utilizada para contextualizar os achados moleculares e histológicos para modelação subsequente.

Abordagem analítica estatística e integrativa:

Os métodos analíticos incluem análise de expressão diferencial e de vias com controlo apropriado de testes múltiplos e ajuste de covariáveis. A modelação integrativa pode combinar domínios moleculares, histológicos e clínicos utilizando abordagens de redução de dimensão e regularizadas para derivar assinaturas moleculares associadas ao estado da doença e à exposição terapêutica.