WT1-herkistettyjen T-solujen annoksen eskalaatiokoe jäännösleukemian tai uusiutuneen leukemian varalta allogeenisen hematopoieettisen esisolun siirron jälkeen

Sisällyttämiskriteerit:

• Ennen hoidon saamista joillekin potilaille voidaan tehdä diagnostisia ja/tai muita WT1-pahanlaatuisten kasvaimien testejä sen määrittämiseksi, reagoiko heidän sairautensa todennäköisesti hoitoon WT1-spesifisillä T-soluilla. Vaihtoehtoisesti voidaan vaatia verinäytteitä tutkimustesteihin sen varmistamiseksi, että WT1-spesifiset T-solut eivät sisällä soluja, jotka voisivat reagoida potilasta vastaan. Nämä potilaat allekirjoittavat erillisen hoitoa edeltävän suostumuksen. Jos todetaan, että potilas on oikeutettu WT1 CTL:n infuusioihin ja voi hyötyä niistä, hän allekirjoittaa MSKCC IRB # 07-055 -hoidon standardin suostumuksen ja hänet rekisteröidään ja hänet hoidetaan kokeessa, jos kaikki muut kelpoisuusvaatimukset ovat kriteerit täyttyvät.
• Tähän tutkimukseen kelpaavia potilaita ovat potilaat, joilla on patologisesti vahvistettu diagnoosi leukemiasta tai myelodysplastisesta oireyhtymästä (MDS), joilla on allogeenisen hematopoieettisen solunsiirron jälkeen uusiutunut leukemia, mikä on osoitettu morfologisesti perifeerisen veren kokeessa tai luuytimen aspiraatissa, tai joilla on toistuva sitkeä minimaalinen jäännössairaus, joka on osoitettu vähintään kahdella peräkkäisellä testillä, joiden välillä on vähintään 1 viikko ja jotka osoittavat jäännösleukemian tai MDS:n molekulaarista näyttöä FISH:n tai sytogenetiikan perusteella. Lisäksi potilaat, joille on määrä saada allogeeninen hematopoieettinen solusiirto leukemian tai myelodysplastisen oireyhtymän hoitoon, jonka uusiutumisen riski transplantaation jälkeen on >30 %, ovat oikeutettuja synnyttämään luovuttajaperäisiä WT1-peptidispesifisiä T-soluja ennen siirtoon tai sen aikana välittömään käyttöön siirron jälkeen silloin, kun potilaalla todetaan olevan vähäinen jäännössairaus tai uusiutuminen. Tämä kattaa potilaat, joilla on AML tai ALL, joka joko ei kestä primaarista induktiohoitoa tai on missä tahansa vaiheessa myöhemmässä kuin ensimmäinen AML:n tai ALL:n uusiutuminen, sekundaarisessa kroonisessa vaiheessa oleva KML, kiihtynyt sairaus tai blastikriisin tai RAEB- tai RAEBT-vaiheen hoidon jälkeen. MDS, jotka eivät ole reagoineet induktiohoitoon tai ovat uusiutuneet sen jälkeen. Lisäksi potilaan leukeemiset tai MDS-blastit tulee dokumentoida ekspressoimaan WT1-proteiinia, joka voidaan havaita immunohistopatologisella analyysillä diagnostisista parafiiniin upotetuista luuydinbiopsioista, jotka on saatu relapsin diagnosoinnissa, tai niiden tyyppiä, jonka tiedetään yleisesti ekspressoivan WT1:tä suurella taajuudella. WT1:n ilmentyminen arvioidaan modifioimalla Dupontin ja Soslow'n tekniikkaa (36) ja luokitellaan saksalaisen immunoreaktiivisen pisteen (IRS) mukautuksen mukaan, joka on immunoreaktiivisuuden intensiteetin (0-3+) ja alapisteiden tulos. immunoreaktiivisuuden jakautuminen (0-4+). Tässä tutkimuksessa leukeemiset blastit, joiden IRS-pisteet ovat 4–12, katsotaan positiivisiksi.
• Patologisesti vahvistettu leukemian tai MDS:n diagnoosi.
• Potilaat, joille on jo tehty allogeeninen hematopoieettinen solusiirto ja joilla on joko dokumentoitu leukemian tai MDS:n uusiutuminen tai toistuva jatkuva minimaalinen jäännössairaus, joka on dokumentoitu vähintään kahdella peräkkäisellä testillä, joiden ero on 1 viikko ja jotka osoittavat FISH-tutkimuksella molekyylitodisteita leukemiasta tai MDS:stä , sytogenetiikka tai fluoresoiva immunosytometria.
• Potilaat, joille on määrä saada allogeeninen hematopoieettinen solusiirto leukemian tai myelodysplastisen oireyhtymän hoitoon, jonka uusiutumisen riski on yli 30 %, voivat saada luovuttajaperäisiä WT1-peptidillä herkistettyjä T-soluja ennen siirtoa tai sen aikana. käytettäväksi välittömästi elinsiirron jälkeen, kun potilaalla todetaan vähäinen jäännössairaus tai uusiutuminen. Tämä koskee potilaita, joilla on:
• ALL, AML tai MDS kestä ensisijaista induktiohoitoa
• ALL tai AML missä tahansa vaiheessa 1°:n relapsin jälkeen
• KML 2°:ssa tai sitä suuremmassa kroonisessa vaiheessa kemoterapian jälkeen
• KML jatkuvassa kiihtyvässä vaiheessa tai räjähdyskriisissä
• Korkean riskin MDS (RAEB ja RAEB+), joka ei ole reagoinut tai on uusiutunut induktiokemoterapian jälkeen
• Potilaiden leukemia- tai MDS-blastien tulee ilmentää immunohistopatologisella analyysillä havaittavaa WT1-proteiinia tai; jos riittävää näytettä ei ole saatavilla testausta varten, hänellä on oltava jokin leukemian muoto (ALL, muut AML:t kuin M5) tai MDS (2° MDS, RAEB, RAEBT), joiden tiedetään yli-ilmentävän WT1:tä suuressa osassa tapauksia (> 60). %). Potilaille, joille kehittyy dokumentoitu leukemian tai MDS:n uusiutuminen elinsiirron jälkeen, luuytimen aspiraatit tulee arvioida WT1:tä ilmentävien blastien osuuden suhteen immunohistologialla tai FACS:lla aina kun mahdollista.
• Potilaan hematopoieettisten solujen siirron luovuttajan on suostuttava 2 tilavuuden leukafereesiin tai yhdellä flebotomialla saatuun kokoveren luovutukseen, jonka kokonaistilavuus on noin 250 ml, josta tuotetaan adoptiiviseen siirtoon käytettävät WT-1-spesifiset T-solut.
• KPS- tai Lansky-pisteet > tai yhtä suuri kuin 40
• Riittävä luuytimen, munuaisten ja maksan toiminta WT1-spesifisten T-solujen hoidon aikana:
• Absoluuttinen neutrofiilien määrä (ANC) > tai yhtä suuri kuin 1000/mm3, G-CSF-tuen kanssa tai ilman.

Tästä vaatimuksesta voidaan poiketa, jos potilaalla on hematologinen taudin uusiutuminen tai jos potilas ei ole vielä toipunut kemoterapiasta.

• Verihiutaleet > tai yhtä suuri kuin 20 000/mm3. Tästä vaatimuksesta voidaan poiketa, jos potilaalla on hematologinen sairauden uusiutuminen tai jos potilas ei ole vielä toipunut kemoterapiasta.
• Kreatiniini < tai yhtä suuri kuin 2,0 mg/dl
• ALT, ASAT <3,0 ja kokonaisbilirubiini ovat kaikki < 2,5 x laitoksen ULN
• Tässä protokollassa ei ole ikärajoituksia.
• Potilaita, joilla on myös keskushermoston relapsi, voidaan hoitaa tällä protokollalla. Kuitenkin, jos intratekaalista kemoterapiaa annetaan, T-soluja ei tulisi antaa ennen kuin vähintään 24 tuntia sen jälkeen.

Poissulkemiskriteerit:

• Potilaat, joilla on aktiivinen (asteet 2–4) akuutti graft vs. host -tauti (GVHD), krooninen GVHD tai ilmeinen autoimmuunisairaus (esim. hemolyyttinen anemia), joka vaatii hoitona suuria glukokortikosteroidiannoksia (> 0,5 mg/kg/vrk prednisonia tai sitä vastaavaa).
• Potilaat, joilla on muita sairauksia, jotka eivät liity leukemiarelapsiin (esim. laskimotukoksen aiheuttama sairaus tai hallitsematon bakteeri-, virus- tai invasiivinen sieni-infektio), jotka ovat myös hengenvaarallisia ja jotka estävät T-soluinfuusion vaikutusten arvioinnin.
• Potilaat, jotka ovat raskaana.

Luovuttajien kelpoisuus veren lymfosyyttien luovuttamiseen luovuttajaperäisten WT-1-spesifisten T-solujen luomiseksi.

WT1-peptidillä herkistettyjen T-solujen tuottamiseen käytettävän verenluovuttajan kelpoisuuskriteerit ovat:

• WT-1-spesifisten T. lymfosyyttien luovuttaja on sama luovuttaja, joka teki potilaan hematopoieettisen kantasolusiirron (HSCT). Näistä normaaleista luovuttajista arvioidaan todisteita aiemmasta herkistymisestä EBV:lle EBV-serologialla. Jos luovuttaja on seropositiivinen ja luovuttajan T-solut herkistetään luovuttajan WT-1-peptidillä ladatuilla EBV-transformoiduilla B-soluilla, EBV-spesifisiä T-soluja syntyy myös seropositiivisista luovuttajista, jotka tuottavat WT-1-spesifisiä T-soluja, ja niiden kasvua ja pysyvyyttä siirron jälkeen verrataan WT 1 -spesifisten T-solujen vastaavaan.
• Koska luovuttaja on jo käynyt läpi laajan terveydentilansa arvioinnin varmistaakseen potilaan HSCT-luovutuksen kelpoisuuden, tämän verenluovutuksen uudelleenarviointi rajoittuu kliiniseen historiaan, fyysiseen tutkimukseen ja verikokeisiin uusien sairauksien varalta. mikä luovuttajan lääkärin näkemyksen mukaan estää luovuttajaa luovuttamasta tarvittavaa verta.
• Uudet terveydelliset olosuhteet, jotka sulkevat siirtoluovuttajan pois toisesta verenluovutuksesta, ovat rajoitettuja, mutta ne sisältävät:
• Uusi HIV-infektio
• Muu hallitsematon infektio, joka voisi tarttua potilaaseen verisolujen välityksellä ja joka saattaisi potilaalle merkittävästi lisääntyneen vakavan sairastuvuuden tai kuoleman riskin.
• Merkittävä anemia, jonka Hgb < tai yhtä suuri kuin 10 gm/dl, jatkunut alkuperäisen elinsiirtoluovutuksen jälkeen.
• Sydäninfarkti tai aivohalvaus HSCT-luovutuksen jälkeen, mikä saattaa lisätä verenluovutuksen riskiä. Mahdolliselle luovuttajalle tiedotetaan tämän tutkimuksen tavoitteista ja sen vaatimuksista. Jos hän suostuu, luovuttajaa pyydetään ottamaan kaksi verinäytettä.
• Ensimmäinen luovutus 25 ml hepariinilla tai ACD:llä antikoaguloitua verta. Tätä verta käytetään EBV:n B95.8-laboratoriokannoilla transformoidun B-solulinjan muodostamiseen. Tätä EBV+ B-solulinjaa/ (EBVBLCL) käytetään antigeeniä esittelevänä soluna. Kun EBVBLCL ladataan WT-1-pentadekapeptidien poolilla, se herkistää tehokkaasti samojen luovuttajien T-soluja WT-1:tä ja EBV:tä vastaan.

Koska EBV-transformoidun B-solulinjan muodostaminen ja testaus, joka soveltuu käytettäväksi antigeeniä esittelevänä soluna, vaatii 4-5 viikon in vitro -viljelyn, on tärkeää, että tämä näyte saadaan mahdollisimman aikaisin potilailta, joilla on riski saada leukemia uusiutumiseen. , koska taudin uusiutuminen tapahtuu useimmiten 2–6 kuukautta elinsiirron jälkeen. Näin ollen tämä verinäyte olisi otettava luovuttajalta ennen hematopoieettisten esisolujen siirron luovuttamista aina kun mahdollista.

• Luovutus joko yksittäisestä standardinmukaisesta 2 veritilavuuden leukafereesistä, joka on kerätty tavalliseen ACD-antikoagulanttiin. Jos leukafereesin kerääminen joiltakin luovuttajilta on mahdotonta, AICTF (Adoptive Immune Cell Therapy Facility, joka valmistaa kliinisen laadun solutuotteita GMP-olosuhteissa MSKCC:ssä) hyväksyy yksikön kokoverta rajoitetun määrän luomiseksi. T-solut. Tätä verta tarvitaan sellaisten T-solujen eristämiseen, jotka on herkistettävä autologisiin dendriittisoluihin tai autologiseen EBVBLCL:ään ladatulla WT-1 15-meerien poolilla ja lisättävä in vitro. Lisäksi vaaditaan autologisia syöttäjäsoluja, jotka ovat välttämättömiä T-solukasvun ylläpitämiselle ilman riskiä stimuloida alloreaktiivisten T-solujen kasvua, jotka kykenevät indusoimaan GVHD:tä.
• Tämä leukafereesin tai veriyksikön luovutus hankitaan etuyhteydettömiltä HSCT-luovuttajilta vähintään 2 viikkoa heidän HSCT-luovutuksensa jälkeen, mutta mahdollisimman pian sen jälkeen.

Sen lisäksi, että annetaan kirjallinen suostumus näille verenluovutuksille WT-1-spesifisten T-solujen tuottamiseksi mahdollisesti käytettäväksi toistuvan leukemian tai pysyvän jäännössairauden hoidossa potilaalla, jolle luovuttaja on antanut HSCT:n, jokaiselle luovuttajalle ilmoitetaan ja pyydetään antamaan erillinen suostumus jokaiseen seuraavista mahdollisista luovutettujen verisolujen käyttötavoista:

• Eristetyistä soluista olevan osan käyttö sellaisten immuuni-T-solujen tuottamiseen, jotka ovat spesifisiä viruksille, kuten Epstein-Barr-virukselle (EBV) ja sytomegalovirukselle (CMV), jotka voivat aiheuttaa tappavia infektioita tai lymfoomia elinsiirtojen vastaanottajille. Tällaisia ​​T-soluja voitaisiin sitten käyttää erillisten protokollien mukaisesti EBV:hen liittyvien sairauksien (IRB 95-024) ja/tai CMV-infektioiden (IRB 05-065) hoitamiseen potilaalla, joka saa luovuttajan hematopoieettisen esisolun siirron.

Tämän hakemuksen hyväksyminen rajoittaa kaikilta luovuttajilta vaadittavien verenluovutusten määrää, koska leukafereesissä luovutettujen valkosolujen pitäisi tarjota riittävästi soluja immuuni-T-solujen kasvattamiseksi WT-1:tä, EBV:tä ja CMV:tä vastaan.

Luovuttajalta peräisin olevien EBV- tai CMV-spesifisten immuuni-T-solujen luovutus, joita ei käytetä tai joita potilas, jolle ne alun perin oli tarkoitettu, tarvitse, immuunisolupankkiin, joka käynnistetään ja jota säilytetään kylmäsäilytettyinä GMP-olosuhteissa. Adoptive Immune Cell Therapy Facility MSKCC:ssä, mahdollisesti käytettäväksi muiden potilaiden hoidossa, joilla on EBV-lymfoomia tai sytomegalovirusinfektioita, jotka ilmentävät luovuttajan yhteisiä HLA-alleeleja.