Испытание с повышением дозы WT1-сенсибилизированных Т-клеток при остаточной или рецидивирующей лейкемии после аллогенной трансплантации гемопоэтических клеток-предшественников

Критерии включения:

• Перед лечением некоторые пациенты могут пройти диагностическое и/или другое тестирование своих злокачественных новообразований WT1, чтобы определить, может ли их заболевание ответить на лечение специфическими Т-клетками WT1. В качестве альтернативы могут потребоваться образцы крови для исследовательских тестов, чтобы убедиться, что Т-клетки, специфичные для WT1, не содержат каких-либо клеток, которые могут реагировать против пациента. Эти пациенты подпишут отдельное предварительное согласие. Если будет установлено, что пациент соответствует требованиям и может получить пользу от инфузий ЦТЛ WT1, он/она подпишет стандартное согласие на лечение для MSKCC IRB # 07-055 и будет включен в исследование и получит лечение, если все остальные критерии соответствуют требованиям. критерии соблюдены.
• Пациенты, имеющие право на участие в этом испытании, будут включать пациентов с патологически подтвержденным диагнозом лейкемии или миелодиспластического синдрома (МДС), у которых после аллогенной трансплантации гемопоэтических клеток возник рецидив лейкемии, что морфологически продемонстрировано в мазке периферической крови или аспирации костного мозга, или у которых рецидивирующая персистирующая минимальная остаточная болезнь, подтвержденная по крайней мере 2 последовательными тестами, разделенными по крайней мере 1 неделей, демонстрирующие молекулярные доказательства остаточного лейкоза или МДС с помощью FISH или цитогенетики. Кроме того, пациенты, которые должны получить аллогенную трансплантацию гемопоэтических клеток для лечения лейкемии или миелодиспластического синдрома с ожидаемым риском рецидива после трансплантации> 30%, будут иметь право на получение донорских Т-клеток, специфичных к пептиду WT1, созданных до до или во время трансплантации для немедленного использования после трансплантации в такое время, когда у пациента обнаруживается минимальное остаточное заболевание или рецидив. Сюда входят пациенты с ОМЛ или ОЛЛ, которые либо рефрактерны к первичной индукционной терапии, либо находятся на любой стадии позже первого рецидива ОМЛ или ОЛЛ, ХМЛ во вторичной хронической фазе, акселерации заболевания или после лечения по поводу бластного криза или стадии RAEB или RAEBT МДС, которые не ответили на индукционную терапию или рецидивировали после нее. Кроме того, лейкемические бласты или бласты МДС пациента должны быть задокументированы как экспрессирующие белок WT1, обнаруживаемый иммуногистопатологическим анализом диагностических парафиновых биопсий костного мозга, полученных при диагнозе рецидива, или быть того типа, который, как известно, обычно экспрессирует WT1 с высокой частотой. Экспрессию WT1 оценивают с помощью модификации метода Дюпона и Сослоу (36) и оценивают в соответствии с адаптацией Немецкой шкалы иммунореактивности (IRS), которая представляет собой произведение суббаллов для интенсивности иммунореактивности (0-3+) и распределение иммунореактивности (0-4+). Для этого исследования лейкемические бласты с оценкой IRS 4-12 будут считаться положительными.
• Патологоанатомически подтвержденный диагноз лейкемии или МДС.
• Пациенты, которые уже получили аллогенную трансплантацию гемопоэтических клеток и имеют либо документально подтвержденный рецидив лейкемии или МДС, либо рецидивирующую персистирующую минимальную остаточную болезнь, подтвержденную как минимум 2 последовательными тестами, разделенными 1 неделей, демонстрирующие молекулярные доказательства лейкемии или МДС с помощью FISH , цитогенетика или флуоресцентная иммуноцитометрия.
• Пациенты, которые должны получить аллогенную трансплантацию гемопоэтических клеток для лечения лейкемии или миелодиспластического синдрома с ожидаемым риском рецидива, превышающим 30%, будут иметь право на получение донорских Т-клеток, сенсибилизированных пептидом WT1, полученных до или во время трансплантации. для немедленного использования после трансплантации в такое время, когда у пациента обнаруживается минимальное остаточное заболевание или рецидив. Сюда входят пациенты с:
• ОЛЛ, ОМЛ или МДС, рефрактерные к первичной индукционной терапии
• ОЛЛ или ОМЛ на любой стадии после 1° рецидива
• ХМЛ в хронической фазе 2° или выше после химиотерапии
• ХМЛ в персистирующей ускоренной фазе или бластном кризе
• МДС высокого риска (РАИБ и РАИБ+), который не дал ответа или рецидивировал после индукционной химиотерапии.
• Бласты пациентов с лейкемией или МДС должны экспрессировать белок WT1, определяемый иммуногистопатологическим анализом, или; если адекватный образец недоступен для тестирования, у него должна быть форма лейкемии (ОЛЛ, ОМЛ, кроме M5) или МДС (2° MDS, RAEB, RAEBT), о которых известно, что в высокой доле случаев (> 60) наблюдается избыточная экспрессия WT1. %). У пациентов, у которых после трансплантации развился подтвержденный рецидив лейкемии или МДС, аспираты костного мозга следует оценивать на долю бластов, экспрессирующих WT1, с помощью иммуногистологии или FACS, когда это возможно.
• Донор трансплантата гемопоэтических клеток пациента должен дать согласие на 2-объемный лейкаферез или донорство цельной крови, полученное при одном кровопускании, что в сумме составит приблизительно 250 мл, из которых будут получены специфические Т-клетки WT-1, которые будут использоваться для адоптивного переноса.
• KPS или показатель Лански > или равен 40
• Адекватная функция костного мозга, почек и печени во время лечения специфическими Т-клетками WT1:
• Абсолютное количество нейтрофилов (АНЧ) > или равно 1000/мм3, с поддержкой Г-КСФ или без нее.

Это требование может быть отменено, если у пациента наблюдается гематологический рецидив заболевания или если у пациента еще не восстановились показатели после химиотерапии.

• Тромбоциты > или равны 20 000/мм3. Это требование может быть отменено, если у пациента наблюдается гематологический рецидив заболевания или если у пациента еще не восстановились показатели после химиотерапии.
• Креатинин < или равен 2,0 мг/дл
• АЛТ, АСТ <3,0 и общий билирубин < 2,5 x ВГН учреждения
• Этот протокол не имеет возрастных ограничений.
• Пациентов с рецидивом, также обнаруженным в ЦНС, можно лечить по этому протоколу. Однако, если проводится интратекальная химиотерапия, Т-клетки не следует вводить, по крайней мере, через 24 часа после этого.

Критерий исключения:

• Пациенты с активной (2-4 степени) острой реакцией «трансплантат против хозяина» (РТПХ), хронической РТПХ или явным аутоиммунным заболеванием (например, гемолитическая анемия), требующая высоких доз глюкокортикостероидов (>0,5 мг/кг/день преднизолона или его эквивалента) в качестве лечения.
• Пациенты с другими состояниями, не связанными с рецидивом лейкемии (например, веноокклюзионная болезнь или неконтролируемая бактериальная, вирусная или инвазивная грибковая инфекция), которые также опасны для жизни и не позволяют оценить эффекты инфузии Т-клеток.
• Пациенты, которые беременны.

Право донора на донорство лимфоцитов крови для получения донорских Т-клеток, специфичных для WT-1.

Критериями пригодности донора крови для получения Т-клеток, сенсибилизированных пептидом WT1, являются:

• Донором специфичных для WT-1 Т. лимфоцитов будет тот же донор, который предоставил пациенту трансплантацию гемопоэтических стволовых клеток (ТГСК). Эти нормальные доноры будут оцениваться на наличие признаков предшествующей сенсибилизации к ВЭБ с помощью серологии ВЭБ. Если донор является серопозитивным и донорские Т-клетки сенсибилизированы В-клетками донора, нагруженными пептидом WT-1, трансформированными EBV, EBV-специфические Т-клетки также будут генерироваться от серопозитивных доноров, генерирующих WT-1-специфические Т-клетки, и их рост и устойчивость после переноса будут сравниваться с таковыми у специфических Т-клеток WT 1.
• Поскольку донор уже прошел обширную оценку своего здоровья, чтобы установить право на донорство ТГСК пациента, повторная оценка для этого донорства крови будет ограничена историей болезни, физическим осмотром и анализами крови, чтобы застраховаться от любого нового состояния. которые, по мнению врача донора, мешают донору сдать требуемую кровь.
• Новые состояния здоровья, которые исключают донора трансплантата от повторной сдачи крови, ограничены, но включают:
• Новое начало ВИЧ-инфекции
• Другая неконтролируемая инфекция, которая может передаваться пациенту через клетки крови и подвергать пациента значительному повышенному риску тяжелой болезни или смерти.
• Значительная анемия с уровнем Hgb < или равным 10 г/дл, сохраняющаяся с момента первичного донорства трансплантата.
• История инфаркта миокарда или инсульта с момента донорства ТГСК, что может увеличить риск донорства крови. Потенциальный донор будет проинформирован о целях этого исследования и его требованиях. Если он / она дает согласие, донору будет предложено предоставить два образца крови.
• Первоначальное донорство 25 мл крови, антикоагулированной гепарином или ACD. Эта кровь используется для создания линии В-клеток, трансфузированных лабораторными штаммами В95.8 ВЭБ. Эта линия В-клеток EBV+ (EBVBLCL) будет использоваться в качестве антиген-презентирующей клетки. При загрузке пулом пентадекапептидов WT-1 EBVBLCL эффективно сенсибилизирует Т-клетки от одних и тех же доноров против WT-1, а также против EBV.

Поскольку для создания и тестирования В-клеточной линии, трансформированной ВЭБ, пригодной для использования в качестве антиген-презентирующих клеток, требуется 4-5 недель культивирования in vitro, важно, чтобы этот образец был получен как можно раньше для пациентов с риском рецидива лейкемии. , так как рецидив заболевания чаще всего происходит через 2-6 месяцев после трансплантации. Соответственно, этот образец крови должен быть получен от донора до сдачи трансплантата гемопоэтических клеток-предшественников, когда это возможно.

• Сдача либо одного стандартного лейкафереза ​​в 2 объема крови, собранного в стандартном антикоагулянте ACD. Если невозможно получить лейкаферез от некоторых доноров, единица цельной крови будет принята AICTF (Объект адоптивной иммуноклеточной терапии, производящий клеточные продукты клинического качества в условиях GMP в MSKCC) для создания ограниченного количества Т-клетки. Эта кровь требуется для выделения Т-клеток, которые должны быть сенсибилизированы пулом 15-меров WT-1, нагруженных на аутологичные дендритные клетки или аутологичный EBVBLCL, и размножены in vitro. Кроме того, необходимо обеспечить аутологичные фидерные клетки, необходимые для поддержания роста Т-клеток без риска стимуляции роста аллореактивных Т-клеток, способных индуцировать РТПХ.
• Это донорство лейкафереза ​​или единицы крови будет получено от неродственных доноров ТГСК по крайней мере через 2 недели после их донорства ТГСК, но как можно скорее после этого.

В дополнение к предоставлению письменного согласия на эти донорства крови с целью получения WT-1-специфических Т-клеток для потенциального использования в лечении рецидивирующего лейкоза или стойкого остаточного заболевания, развивающегося у пациента, которому донор сделал ТГСК, каждый донор будет проинформирован и попрошен дать отдельное согласие на каждое из следующих возможных применений донорских клеток крови:

• Использование фракции выделенных клеток для создания иммунных Т-клеток, специфичных к вирусам, таким как вирус Эпштейна-Барр (EBV) и цитомегаловирус (CMV), которые могут вызывать летальные инфекции или лимфомы у реципиентов трансплантата. Затем такие Т-клетки можно было бы использовать по отдельным протоколам для лечения заболеваний, связанных с EBV (IRB 95-024) и/или для лечения ЦМВ-инфекций (IRB 05-065) у пациента, получающего трансплантат донорских гемопоэтических клеток-предшественников.

Согласие на эту заявку ограничит количество донаций крови, которые потребуются от любого донора, поскольку лейкоциты, донорские при лейкаферезе, должны обеспечить достаточное количество клеток для выращивания иммунных Т-клеток против WT-1, EBV и CMV.

Пожертвование иммунных Т-клеток, специфичных к ВЭБ или ЦМВ, полученных от донора, которые не используются или не требуются пациенту, для которого они изначально предназначались, в банк иммунных клеток, который будет создан и будет храниться криоконсервированным в условиях GMP в Центр адоптивной иммуноклеточной терапии в MSKCC для потенциального использования в лечении других пациентов с EBV-лимфомами или цитомегаловирусными инфекциями, которые экспрессируют аллели HLA, общие с донором.