Dosiseskalationsstudie mit WT1-sensibilisierten T-Zellen bei Residual- oder rezidivierter Leukämie nach allogener Transplantation hämatopoetischer Vorläuferzellen

Einschlusskriterien:

• Vor der Behandlung können sich einige Patienten diagnostischen und/oder anderen Tests ihrer WT1-Malignome unterziehen, um festzustellen, ob ihre Krankheit wahrscheinlich auf eine Behandlung mit WT1-spezifischen T-Zellen anspricht. Alternativ können Blutproben für Forschungstests erforderlich sein, um sicherzustellen, dass die WT1-spezifischen T-Zellen keine Zellen enthalten, die gegen den Patienten reagieren könnten. Diese Patienten werden eine separate Einwilligung vor der Behandlung unterzeichnen. Wenn festgestellt wird, dass ein Patient für Infusionen von WT1-CTLs geeignet ist und davon profitieren könnte, wird er/sie die Standardbehandlungszustimmung für MSKCC IRB Nr. 07-055 unterzeichnen und bei allen anderen Voraussetzungen für die Studie eingeschrieben und behandelt Kriterien erfüllt sind.
• Zu den Patienten, die für diese Studie in Frage kommen, gehören Patienten mit einer pathologisch bestätigten Diagnose von Leukämie oder myelodysplastischem Syndrom (MDS), die nach einer allogenen hämatopoetischen Zelltransplantation einen Rückfall der Leukämie erlitten haben, wie morphologisch auf peripheren Blutausstrichen oder Knochenmarksaspiraten nachgewiesen wurde, oder die rezidivierend persistierend sind minimale Resterkrankung, nachgewiesen durch mindestens 2 aufeinanderfolgende Tests im Abstand von mindestens 1 Woche, die den molekularen Nachweis einer verbleibenden Leukämie oder MDS durch FISH oder Zytogenetik zeigen. Darüber hinaus haben Patienten, die eine allogene hämatopoetische Zelltransplantation zur Behandlung einer Leukämie oder eines myelodysplastischen Syndroms mit einem erwarteten Rückfallrisiko von > 30 % nach der Transplantation erhalten sollen, Anspruch auf die vorherige Generierung von Spender-abgeleiteten WT1-Peptid-spezifischen T-Zellen bis oder zum Zeitpunkt der Transplantation zur sofortigen Verwendung nach der Transplantation zu einem Zeitpunkt, an dem festgestellt wird, dass der Patient eine minimale Resterkrankung oder einen Rückfall aufweist. Dies schließt Patienten mit AML oder ALL ein, die entweder gegenüber einer primären Induktionstherapie refraktär sind oder sich in einem beliebigen Stadium nach dem ersten Rückfall bei AML oder ALL, CML in einer sekundären chronischen Phase, beschleunigter Erkrankung oder nach Behandlung einer Blastenkrise oder im RAEB- oder RAEBT-Stadium befinden MDS, die auf eine Induktionstherapie nicht angesprochen haben oder nach einer Induktionstherapie wieder aufgetreten sind. Darüber hinaus sollten die Leukämie- oder MDS-Blasten des Patienten dokumentiert werden, dass sie das WT1-Protein exprimieren, das durch immunhistopathologische Analyse von diagnostischen, in Paraffin eingebetteten Knochenmarksbiopsien nachweisbar ist, die bei der Diagnose eines Rückfalls gewonnen wurden, oder von einem Typ sein, von dem bekannt ist, dass er üblicherweise WT1 mit hoher Frequenz exprimiert. Die Expression von WT1 wird durch eine Modifikation der Technik von Dupont und Soslow (36) bewertet und gemäß einer Adaption des deutschen Immunreaktivitäts-Scores (IRS) eingestuft, der das Produkt der Subscores für die Intensität der Immunreaktivität (0–3+) und ist Verteilung der Immunreaktivität (0-4+). Für diese Studie werden leukämische Blasten mit IRS-Scores von 4-12 als positiv angesehen.
• Eine pathologisch bestätigte Diagnose von Leukämie oder MDS.
• Patienten, die bereits eine allogene hämatopoetische Zelltransplantation erhalten haben und entweder einen dokumentierten Leukämie- oder MDS-Rückfall oder eine rezidivierende persistierende minimale Resterkrankung haben, die durch mindestens 2 aufeinanderfolgende Tests im Abstand von 1 Woche dokumentiert ist, die molekulare Hinweise auf Leukämie oder MDS durch FISH zeigen B. Zytogenetik oder Fluoreszenz-Immunzytometrie.
• Patienten, die eine allogene hämatopoetische Zelltransplantation zur Behandlung einer Leukämie oder eines myelodysplastischen Syndroms mit einem erwarteten Rückfallrisiko von mehr als 30 % erhalten sollen, haben Anspruch auf Spender-abgeleitete WT1-Peptid-sensibilisierte T-Zellen, die vor oder zum Zeitpunkt der Transplantation generiert werden zur sofortigen Verwendung nach der Transplantation zu einem Zeitpunkt, zu dem festgestellt wird, dass der Patient eine minimale Resterkrankung oder einen Rückfall aufweist. Dazu gehören Patienten mit:
• ALL, AML oder MDS, die gegenüber einer primären Induktionstherapie refraktär sind
• ALL oder AML in jedem Stadium nach 1° Rückfall
• CML in der chronischen Phase 2° oder höher nach Chemotherapie
• CML in anhaltender akzelerierter Phase oder Explosionskrise
• Hochrisiko-MDS (RAEB und RAEB+), das nach einer Induktionschemotherapie nicht angesprochen hat oder erneut aufgetreten ist
• Die Leukämie oder MDS-Blasten des Patienten müssen das durch immunhistopathologische Analyse nachweisbare WT1-Protein exprimieren, oder; wenn keine adäquate Probe zum Testen verfügbar ist, muss eine Form von Leukämie (ALL, andere AMLs als M5) oder MDS (2. MDS, RAEB, RAEBT) vorliegen, von der bekannt ist, dass sie WT1 in einem hohen Anteil der Fälle überexprimiert (>60 %). Bei Patienten, die nach einer Transplantation einen dokumentierten Rückfall von Leukämie oder MDS entwickeln, sollten Knochenmarksaspirate nach Möglichkeit durch Immunhistologie oder FACS auf den Anteil der Blasten untersucht werden, die WT1 exprimieren.
• Der Spender des hämatopoetischen Zelltransplantats des Patienten muss einer 2-Volumen-Leukapherese oder Vollblutspenden zustimmen, die bei einer Phlebotomie erhalten werden und insgesamt etwa 250 ml umfassen, aus denen die WT-1-spezifischen T-Zellen generiert werden, die für den adoptiven Transfer verwendet werden sollen
• KPS- oder Lansky-Score > oder gleich 40
• Angemessene Knochenmark-, Nieren- und Leberfunktion zum Zeitpunkt der Behandlung mit WT1-spezifischen T-Zellen:
• Absolute Neutrophilenzahl (ANC) > oder gleich 1000/mm3, mit oder ohne G-CSF-Unterstützung.

Auf diese Anforderung kann verzichtet werden, wenn der Patient einen hämatologischen Rückfall der Krankheit hat oder wenn der Patient sich noch nicht von der Chemotherapie erholt hat.

• Blutplättchen > oder gleich 20.000/mm3. Auf diese Anforderung kann verzichtet werden, wenn der Patient einen hämatologischen Rückfall der Krankheit hat oder wenn der Patient sich noch nicht von der Chemotherapie erholt hat.
• Kreatinin < als oder gleich 2,0 mg/dL
• ALT, AST < 3,0 und Gesamtbilirubin alle < 2,5 x ULN der Institution
• Es gibt keine Altersbeschränkungen für dieses Protokoll.
• Patienten mit Rückfall, der auch im ZNS festgestellt wird, können nach diesem Protokoll behandelt werden. Wenn jedoch eine intrathekale Chemotherapie verabreicht wird, sollten T-Zellen frühestens 24 Stunden danach verabreicht werden.

Ausschlusskriterien:

• Patienten mit aktiver (Grad 2–4) akuter Graft-versus-Host-Disease (GVHD), chronischer GVHD oder offenkundiger Autoimmunerkrankung (z. hämolytische Anämie), die als Behandlung hohe Dosen von Glukokortikosteroiden (> 0,5 mg/kg/Tag Prednison oder dessen Äquivalent) erfordern.
• Patienten mit anderen Erkrankungen, die nicht mit einem Leukämierückfall zusammenhängen (z. Venenverschlusskrankheit oder unkontrollierte bakterielle, virale oder invasive Pilzinfektion), die ebenfalls lebensbedrohlich sind und die Bewertung der Wirkungen einer T-Zell-Infusion ausschließen würden.
• Patienten, die schwanger sind.

Eignung des Spenders für die Spende von Blut-Lymphozyten zur Erzeugung von WT-1-spezifischen T-Zellen, die vom Spender stammen.

Die Eignungskriterien für den Blutspender, der zur Generierung von WT1-Peptid-sensibilisierten T-Zellen verwendet werden soll, sind:

• Der Spender von WT-1-spezifischen T.-Lymphozyten ist derselbe Spender, der die hämatopoetische Stammzelltransplantation (HSCT) des Patienten bereitgestellt hat. Diese normalen Spender werden anhand der EBV-Serologie auf Anzeichen einer früheren Sensibilisierung gegenüber EBV untersucht. Wenn der Spender seropositiv ist und Spender-T-Zellen mit WT-1-Peptid-beladenen EBV-transformierten B-Zellen des Spenders sensibilisiert werden, werden EBV-spezifische T-Zellen auch von seropositiven Spendern generiert, die WT-1-spezifische T-Zellen erzeugen, und deren Wachstum und Persistenz nach dem Transfer werden mit denen der WT-1-spezifischen T-Zellen verglichen.
• Da sich der Spender bereits einer umfassenden Beurteilung seines Gesundheitszustands unterzogen hat, um die Eignung für die Spende des HSCT des Patienten festzustellen, beschränkt sich die erneute Beurteilung dieser Blutspende auf eine Anamnese, körperliche Untersuchung und Bluttests, um sich gegen einen neuen Zustand abzusichern die nach Ansicht des Arztes des Spenders den Spender daran hindern, das erforderliche Blut zu spenden.
• Neue Gesundheitszustände, die einen Transplantatspender von einer zweiten Blutspende ausschließen würden, sind begrenzt, umfassen jedoch:
• Neuauftreten einer HIV-Infektion
• Andere unkontrollierte Infektionen, die durch Blutzellen auf den Patienten übertragen werden könnten und den Patienten einem erheblich erhöhten Risiko für schwere Morbidität oder Tod aussetzen würden.
• Signifikante Anämie mit Hgb < als oder gleich 10 g/dl, die seit dem Zeitpunkt der ursprünglichen Transplantatspende anhält.
• Vorgeschichte von Myokardinfarkt oder Schlaganfall seit dem Zeitpunkt der HSCT-Spende, was das Risiko einer Blutspende erhöhen könnte. Ein potenzieller Spender wird über den Zweck dieser Studie und ihre Anforderungen informiert. Wenn er/sie zustimmt, wird der Spender aufgefordert, zwei Blutentnahmen abzugeben.
• Eine anfängliche Spende von 25 ml mit Heparin oder ACD antikoaguliertem Blut. Dieses Blut wird verwendet, um eine B-Zelllinie zu etablieren, die mit den B95.8-Laborstämmen von EBV transfundiert wurde. Diese EBV+ B-Zelllinie/ (EBVBLCL) wird als Antigen-präsentierende Zelle verwendet. Wenn das EBVBLCL mit dem Pool von WT-1-Pentadecapeptiden beladen wird, sensibilisiert es effizient T-Zellen von denselben Spendern sowohl gegen WT-1 als auch gegen EBV.

Da die Etablierung und Testung einer EBV-transformierten B-Zelllinie, die zur Verwendung als Antigen-präsentierende Zelle geeignet ist, eine 4-5-wöchige In-vitro-Kultur erfordert, ist es wichtig, dass diese Probe so früh wie möglich für Patienten mit einem Risiko für einen Leukämierückfall entnommen wird , da ein Krankheitsrückfall am häufigsten 2-6 Monate nach der Transplantation auftritt. Dementsprechend sollte diese Blutprobe nach Möglichkeit vor der Spende des hämatopoetischen Vorläuferzelltransplantats vom Spender erhalten werden.

• Eine Spende von entweder einem einzelnen Standard-2-Blutvolumen-Leukapherese, gesammelt in Standard-ACD-Antikoagulans. Wenn es nicht möglich ist, von einigen Spendern eine Leukapherese zu entnehmen, wird eine Einheit Vollblut von der AICTF (Einrichtung für adoptive Immunzelltherapie, die Zellprodukte in klinischer Qualität unter GMP-Bedingungen in MSKCC herstellt) für die Generierung einer begrenzten Anzahl akzeptiert T-Zellen. Dieses Blut wird für die Isolierung der T-Zellen benötigt, die mit dem Pool von WT-1-15-meren, die auf autologe dendritische Zellen oder autologes EBVBLCL geladen und in vitro vermehrt werden sollen, sensibilisiert werden sollen. Darüber hinaus ist es erforderlich, autologe Feeder-Zellen bereitzustellen, die für die Aufrechterhaltung des T-Zellwachstums unerlässlich sind, ohne das Risiko einzugehen, das Wachstum alloreaktiver T-Zellen zu stimulieren, die GVHD induzieren können.
• Diese Spende einer Leukapherese oder einer Bluteinheit wird von nicht verwandten HSCT-Spendern mindestens 2 Wochen nach ihrer Spende eines HSCT, aber bald danach wie möglich, erhalten.

Zusätzlich zur schriftlichen Zustimmung zu diesen Blutspenden zum Zweck der Generierung WT-1-spezifischer T-Zellen zur potenziellen Verwendung bei der Behandlung von rezidivierender Leukämie oder persistierender Resterkrankung, die sich bei dem Patienten entwickeln, für den der Spender ein HSCT bereitgestellt hat, Jeder Spender wird über jede der folgenden potenziellen Anwendungen der gespendeten Blutzellen informiert und gebeten, eine separate Einwilligung zu erteilen:

• Die Verwendung eines Teils der isolierten Zellen zur Erzeugung von Immun-T-Zellen, die spezifisch für Viren wie Epstein-Barr-Virus (EBV) und Cytomegalovirus (CMV) sind, die bei Transplantatempfängern tödliche Infektionen oder Lymphome verursachen können. Solche T-Zellen könnten dann unter separaten Protokollen zur Behandlung von EBV-assoziierten Krankheiten (IRB 95-024) und/oder zur Behandlung von CMV-Infektionen (IRB 05-065) bei dem Patienten verwendet werden, der die hämatopoetische Vorläuferzelltransplantation des Spenders erhält.

Die Zustimmung zu diesem Antrag wird die Anzahl der Blutspenden begrenzen, die von jedem Spender benötigt würden, da die bei einer Leukapherese gespendeten weißen Blutkörperchen genügend Zellen liefern sollten, um Immun-T-Zellen gegen WT-1, EBV und CMV zu züchten.

Die Spende von EBV- oder CMV-spezifischen Immun-T-Zellen des Spenders, die nicht für den Patienten, für den sie ursprünglich bestimmt waren, verwendet oder von diesem benötigt werden, an eine Bank von Immunzellen, die unter GMP-Bedingungen in der Kryokonservierung angelegt und gehalten wird Adoptive Immun Cell Therapy Facility am MSKCC für den potenziellen Einsatz bei der Behandlung anderer Patienten mit EBV-Lymphomen oder Cytomegalovirus-Infektionen, die HLA-Allele exprimieren, die vom Spender geteilt werden.