Zkouška s eskalací dávky T lymfocytů senzibilizovaných WT1 na reziduální nebo relapsující leukémii po alogenní transplantaci progenitorových hematopoetických buněk

Kritéria pro zařazení:

• Před přijetím léčby mohou někteří pacienti podstoupit diagnostické a/nebo jiné testování svých malignit WT1, aby se zjistilo, zda je pravděpodobné, že jejich onemocnění bude reagovat na léčbu T buňkami specifickými pro WT1. Alternativně mohou být pro výzkumné testy vyžadovány vzorky krve, aby se zjistilo, že T-buňky specifické pro WT1 neobsahují žádné buňky, které by mohly reagovat proti pacientovi. Tito pacienti podepíší samostatný souhlas před léčbou. Pokud se zjistí, že pacient bude mít nárok na infuze WT1 CTL a mohl by z nich mít prospěch, podepíše souhlas se standardní léčbou pro MSKCC IRB # 07-055 a bude zařazen a léčen ve studii, pokud všechny ostatní způsobilosti jsou splněna kritéria.
• Mezi pacienty vhodné pro tuto studii budou patřit pacienti s patologicky potvrzenou diagnózou leukémie nebo myelodysplastického syndromu (MDS), kteří po alogenní transplantaci krvetvorných buněk relabovali s leukémií, jak bylo morfologicky prokázáno na nátěru periferní krve nebo aspirátu kostní dřeně, nebo mají recidivující přetrvávající minimální reziduální onemocnění, jak bylo prokázáno alespoň 2 po sobě jdoucími testy oddělenými alespoň 1 týdnem prokazujícím molekulární důkaz reziduální leukémie nebo MDS pomocí FISH nebo cytogenetiky. Kromě toho pacienti, kteří mají podstoupit alogenní transplantaci krvetvorných buněk jako léčbu leukémie nebo myelodysplastického syndromu, u nichž se očekává riziko relapsu po transplantaci > 30 %, budou způsobilí k tomu, aby byly předtím vytvořeny T buňky specifické pro peptid WT1 od dárce. do nebo v době transplantace k okamžitému použití po transplantaci v době, kdy je u pacienta zjištěno minimální zbytkové onemocnění nebo relaps. To zahrnuje pacienty s AML nebo ALL, která je buď refrakterní na primární indukční léčbu, nebo je v jakémkoli stadiu pozdější než první relaps AML nebo ALL, CML v sekundární chronické fázi, akcelerované onemocnění nebo po léčbě blastické krize nebo RAEB nebo RAEBT stádií MDS, které nereagovaly na indukční terapii nebo se po indukční terapii opakovaly. Kromě toho by leukemické nebo MDS blasty pacienta měly být zdokumentovány tak, že exprimují protein WT1 detekovatelný imunohistopatologickou analýzou diagnostických biopsií dřeně zalitých do parafínu, získaných při diagnóze relapsu nebo jsou typu, o kterém je známo, že běžně exprimuje WT1 s vysokou frekvencí. Exprese WT1 bude hodnocena modifikací techniky Duponta a Soslowa (36) a odstupňována podle úpravy německého imunoreaktivního skóre (IRS), což je součin dílčích skóre intenzity imunoreaktivity (0-3+) a distribuce imunoreaktivity (0-4+). Pro tuto studii budou leukemické blasty s IRS skóre 4-12 považovány za pozitivní.
• Patologicky potvrzená diagnóza leukémie nebo MDS.
• Pacienti, kteří již podstoupili alogenní transplantaci krvetvorných buněk a mají buď zdokumentovaný relaps leukémie nebo MDS, nebo mají recidivující přetrvávající minimální reziduální onemocnění, jak bylo dokumentováno alespoň 2 sekvenčními testy, oddělenými 1 týdnem, prokazující molekulární důkazy leukémie nebo MDS pomocí FISH cytogenetika nebo fluorescenční imunocytometrie.
• Pacienti, kteří mají podstoupit alogenní transplantaci krvetvorných buněk jako léčbu leukémie nebo myelodysplastického syndromu, u nichž je očekávané riziko relapsu vyšší než 30 %, budou způsobilí k tomu, aby byly před transplantací nebo v době transplantace vytvořeny T buňky senzibilizované na peptid WT1 od dárce. k okamžitému použití po transplantaci v době, kdy je u pacienta zjištěno minimální zbytkové onemocnění nebo relaps. To zahrnuje pacienty s:
• ALL, AML nebo MDS refrakterní na primární indukční terapii
• ALL nebo AML v jakékoli fázi po 1° relapsu
• CML ve 2° nebo vyšší chronické fázi po chemoterapii
• CML v přetrvávající akcelerované fázi nebo blastické krizi
• Vysoce rizikové MDS (RAEB a RAEB+), které nereagovaly nebo se opakovaly po indukční chemoterapii
• Leukémie nebo MDS blasty pacientů musí exprimovat protein WT1 detekovatelný imunohistopatologickou analýzou, nebo; není-li k dispozici dostatečný vzorek pro testování, musí mít formu leukémie (ALL, AML jiné než M5) nebo MDS (2° MDS, RAEB, RAEBT), o nichž je známo, že nadměrně exprimují WT1 ve vysokém procentu případů (> 60 %). U pacientů, u kterých se po transplantaci rozvine zdokumentovaný relaps leukémie nebo MDS, by měly být aspiráty kostní dřeně vyhodnoceny na podíl blastů exprimujících WT1 imunohistologicky nebo FACS, kdykoli je to možné.
• Dárce transplantovaných hematopoetických buněk pacienta musí souhlasit s 2 objemovou leukaferézou nebo odběry plné krve získanými při jedné flebotomii, která bude celkem přibližně 250 ml, ze kterých budou generovány T buňky specifické pro WT-1, které mají být použity pro adoptivní přenos.
• Skóre KPS nebo Lansky > nebo rovné 40
• Přiměřená funkce kostní dřeně, ledvin a jater v době léčby T buňkami specifickými pro WT1:
• Absolutní počet neutrofilů (ANC) > nebo rovný 1000/mm3, s podporou G-CSF nebo bez ní.

Od tohoto požadavku lze upustit, pokud má pacient hematologický relaps onemocnění nebo pokud se u pacienta ještě neobnovily počty po chemoterapii.

• Krevní destičky > nebo rovné 20 000/mm3. Od tohoto požadavku lze upustit, pokud má pacient hematologický relaps onemocnění nebo pokud se u pacienta ještě neobnovily počty po chemoterapii.
• Kreatinin < nebo rovný 2,0 mg/dl
• ALT, AST < 3,0 a celkový bilirubin všechny < 2,5 x institucionální ULN
• Tento protokol nemá žádná věková omezení.
• Pacienti s relapsem zjištěným také v CNS mohou být léčeni tímto protokolem. Pokud je však podávána intratekální chemoterapie, T buňky by neměly být podávány dříve než 24 hodin poté.

Kritéria vyloučení:

• Pacienti s aktivní (stupeň 2-4) akutní reakcí štěpu vs. hostitel (GVHD), chronickou GVHD nebo zjevným autoimunitním onemocněním (např. hemolytická anémie) vyžadující jako léčbu vysoké dávky glukokortikosteroidů (>0,5 mg/kg/den prednisonu nebo jeho ekvivalentu).
• Pacienti s jinými stavy, které nesouvisejí s relapsem leukémie (např. venookluzivní onemocnění nebo nekontrolovaná bakteriální, virová nebo invazivní plísňová infekce), které jsou rovněž život ohrožující a které by znemožnily hodnocení účinků infuze T buněk.
• Pacientky, které jsou těhotné.

Způsobilost dárce pro dárcovství krevních lymfocytů pro generování WT-1-specifických T-buněk od dárce.

Kritéria způsobilosti pro dárce krve, která má být použita k vytvoření T buněk senzibilizovaných peptidem WT1, jsou:

• Dárcem T. lymfocytů specifických pro WT-1 bude stejný dárce, který poskytl pacientovi transplantaci hematopoetických kmenových buněk (HSCT). Tito normální dárci budou hodnoceni na důkaz předchozí senzibilizace na EBV sérologií EBV. Pokud je dárce séropozitivní a dárcovské T lymfocyty jsou senzibilizovány dárcovskými WT-1 peptidem naloženými EBV transformovanými B buňkami, EBV-specifické T-buňky budou také generovány ze séropozitivních dárců vytvářejících T-buňky specifické pro WT-1 a jejich růst a perzistence po přenosu budou porovnány s růstem a perzistencí T-buněk specifických pro WT 1.
• Vzhledem k tomu, že dárce již prošel rozsáhlým hodnocením svého zdravotního stavu, aby se ujistil, že je způsobilý darovat pacientovi HSCT, přehodnocení tohoto darování krve bude omezeno na klinickou anamnézu, fyzikální vyšetření a krevní testy, aby se zajistilo proti jakémukoli novému stavu. které podle názoru lékaře dárce vylučují, aby dárce daroval potřebnou krev.
• Nové zdravotní stavy, které by vylučovaly dárce po transplantaci z druhého darování krve, jsou omezené, ale zahrnují:
• Nový nástup infekce HIV
• Jiná nekontrolovaná infekce, která by mohla být na pacienta přenesena krevními buňkami a která by pacienta vystavila významně zvýšenému riziku závažné morbidity nebo smrti.
• Významná anémie s Hgb < nebo rovnou 10 gm/dl, přetrvávající od doby původního darování transplantátu.
• Anamnéza infarktu myokardu nebo cévní mozkové příhody od doby darování HSCT, což může zvýšit riziko dárcovství krve. Perspektivní dárce bude informován o účelech této studie a jejích požadavcích. Pokud bude souhlasit, bude dárce požádán o dva odběry krve.
• Počáteční darování 25 ml krve antikoagulované heparinem nebo ACD. Tato krev se použije k vytvoření linie B lymfocytů transfuzovaných transformovaných laboratorními kmeny B95.8 EBV. Tato EBV+ B buněčná linie/ (EBVBLCL) bude použita jako buňka prezentující antigen. Když se naplní směsí pentadekapeptidů WT-1, EBVBLCL účinně senzitizuje T buňky od stejných dárců proti WT-1 i EBV.

Protože vytvoření a testování EBV transformované B buněčné linie vhodné pro použití jako buňky prezentující antigen vyžaduje 4-5 týdnů kultivace in vitro, je důležité, aby byl tento vzorek získán co nejdříve pro pacienty s rizikem relapsu leukémie. , protože k relapsu onemocnění dochází nejčastěji 2-6 měsíců po transplantaci. V souladu s tím by tento vzorek krve měl být získán od dárce před darováním transplantátu hematopoetických progenitorových buněk, kdykoli je to možné.

• Darování buď jednoho standardního leukaferézy o dvou objemech krve odebrané ve standardním antikoagulantu ACD. Pokud není možné odebrat leukaferézu od některých dárců, bude jednotka plné krve přijata AICTF (Adoptive Immune Cell Therapy Facility vyrábějící buněčné produkty klinické kvality za podmínek GMP v MSKCC) pro vytvoření omezeného počtu T buňky. Tato krev je nutná pro izolaci T-buněk, které mají být senzibilizovány poolem WT-1 15-merů naložených na autologní dendritické buňky nebo autologní EBVBLCL a propagované in vitro. Kromě toho je nutné poskytnout autologní podpůrné buňky nezbytné pro udržení růstu T-buněk bez rizika stimulace růstu aloreaktivních T-buněk schopných indukovat GVHD.
• Toto darování leukaferézy nebo jednotky krve bude získáno od nepříbuzných dárců HSCT alespoň 2 týdny po jejich darování HSCT, ale co nejdříve poté.

Kromě poskytnutí písemného souhlasu s těmito dary krve za účelem generování WT-1-specifických T-buněk pro potenciální použití při léčbě rekurentní leukémie nebo přetrvávajícího reziduálního onemocnění rozvíjejícího se u pacienta, kterému dárce poskytl HSCT, každý dárce bude informován a požádán o poskytnutí samostatného souhlasu s každou z následujících potenciálních aplikací darovaných krvinek:

• Použití frakce izolovaných buněk k vytvoření imunitních T-buněk specifických pro viry, jako je virus Epstein-Barrové (EBV) a cytomegalovirus (CMV), které mohou způsobit letální infekce nebo lymfomy u příjemců transplantátu. Takové T-buňky by pak mohly být použity podle samostatných protokolů k léčbě onemocnění spojených s EBV (IRB 95-024) a/nebo k léčbě infekcí CMV (IRB 05-065) u pacienta, který dostává transplantaci dárcovských hematopoetických progenitorových buněk.

Souhlas s touto žádostí omezí počet dárcovství krve, který by byl vyžadován od jakéhokoli dárce, protože bílé krvinky darované při leukaferéze by měly poskytnout dostatek buněk pro růst imunitních T-buněk proti WT-1, EBV a CMV.

Darování imunitních T-buněk specifických pro EBV nebo CMV vytvořených od dárce, které nejsou použity nebo vyžadovány pacientem, pro kterého byly původně určeny, bance imunitních buněk, která bude spuštěna a udržována kryokonzervována za podmínek GMP v Zařízení pro adoptivní imunobuněčnou terapii v MSKCC pro potenciální použití při léčbě jiných pacientů s EBV lymfomy nebo cytomegalovirovými infekcemi, které exprimují alely HLA sdílené dárcem.