Pilotti- ja toteutettavuustutkimus hematopoieettisten kantasolugeenien siirtämisestä Wiskott-Aldrichin oireyhtymään

Wiskott-Aldrichin oireyhtymä (WAS) (OMIM 301000) on harvinainen X-kytketty immuunipuutos, jonka aiheuttavat mutaatiot yksittäisessä geenissä, WAS, joka liittyy Xp11.22-Xp11.3:een. ja koodaa Wiskott-Aldrichin oireyhtymän proteiinia (WASP) 1. WASP on kriittinen aktiinisignaloinnin säätelijä, jonka ilmentyminen rajoittuu hematopoieettisiin soluihin, ja siksi sitä tarvitaan useisiin toimintoihin, mukaan lukien T-solujen aktivointi, dendriittisolujen migraatio ja podosomien muodostus sekä B. solupäätteen kehitys ja toiminta. WAS:lle on ominaista mikrotrombosytopenia, toistuvat infektiot, ihottuma ja siihen liittyy korkea autoimmuniteetin ja lymfaattisten pahanlaatuisten kasvainten ilmaantuvuus. Klassinen tai vaikea WAS havaitaan yleensä potilailla, joilla on nonsense-mutaatioita tai insertioita/deleetioita, jotka johtavat kehyssiirtymä- tai silmukointikohdan mutaatioihin tai missense-mutaatioihin ja jotka johtavat epästabiiliin proteiiniin 2. Muutamia poikkeuksia lukuun ottamatta WASP-negatiivisilla potilailla on klassinen sairaus. Sairastuneiden potilaiden elinajanodote on huomattavasti lyhentynyt.

Tällä hetkellä ainoa parantava vaihtoehto WAS-potilaille on hematopoieettinen kantasolusiirto (HSCT). Tämä hoito on menestynein, kun HLA:n kanssa identtinen sisarus tai vastaava ei-sukulainen luovuttaja on saatavilla, ja se johtaa mikrotrombosytopenian ja immuunijärjestelmän toimintahäiriön korjaamiseen, vaikka esiintyy stabiilia sekakimerismia. Kuitenkin jopa potilaat, joille tehdään sovitettu HSCT, voivat kärsiä huomattavasta sairastumisesta ja kuolleisuudesta graft versus host -taudin (GVHD) vuoksi, ja monilta potilailta puuttuu HLA-identtinen luovuttaja. Yhteensopimattomaan liittyvän HSCT:n tulos on jatkuvasti huono ja eloonjäämisaste on noin 50 %. Geenisiirto on houkutteleva vaihtoehtoinen hoito WAS:lle. Onnistunut geeninsiirto käyttämällä autologista geenikorjattua HSC:tä voittaisi GVHD:hen ja sen hoitoon liittyvät kliiniset komplikaatiot. Lisäksi, toisin kuin allogeeninen HSCT, geeninsiirtoa ei rajoita yhteensopivien luovuttajien saatavuus. Useat todisteet osoittavat, että osittainen uudelleenmuodostaminen geenikorjatuilla soluilla voi olla riittävää sairauden parantamiseksi.

Ehdotamme tässä pilotti- ja toteutettavuustutkimusta ex vivo -geeninsiirrosta käyttämällä lentivirusvektoria (LV) autologisen luuytimestä peräisin olevan CD34+ HSC:n transdusoimiseksi. Soluja infusoidaan potilaille, jotka on hoidettu sytoreduktiivisella kemoterapialla. Yhteistyötutkijamme Euroopassa ovat kehittäneet LV:n, joka koodaa ihmisen WAS-cDNA:ta WAS-promoottorin ohjaamana ja pseudotyypitetty vesicular Stomatitis Virus -glykoproteiinin (VSVg) vaippaan. Tämän w1.6_hWASP_WPRE (VSVg) LV:n (lyhennettynä w1.6W) on osoitettu olevan tehokas sekä in vitro että in vivo prekliinisissä malleissa. Turvallisuutta, mukaan lukien solutoksisuus, insertiomutageneesi ja kasvainten muodostuminen, on tutkittu useilla menetelmillä, mukaan lukien: 1) herkkä in vitro -transformaatiomääritys, 2) toksisuustutkimukset transdusoiduilla ihmisen CD34+-soluilla, 3) insertiomallin tutkiminen transdusoituneissa hiiren soluissa ja 4) pitkän aikavälin havainnointi- ja toissijaiset siirtotutkimukset hiirillä. Yhdysvalloissa aiomme rekisteröidä viisi poikaa, joilla on klassinen WAS, joilla ei ole vastaavaa sukua tai ei-sukulaista luovuttajaa. Rinnakkaiset tutkimukset (ei tutkiva uusi lääke -sovelluksemme), joissa käytetään samaa LV:tä, joka on tuotettu samassa laitoksessa, Genethonissa, suoritetaan Lontoossa, Yhdistyneessä kuningaskunnassa (5 henkilöä) ja Pariisissa, Ranskassa (5 henkilöä). Ensisijaisena tavoitteena on osoittaa toteutettavuus ja turvallisuus. Toissijaisena tavoitteena on arvioida terapeuttista tehoa.