Estudo piloto e de viabilidade da transferência de genes de células-tronco hematopoiéticas para a síndrome de Wiskott-Aldrich

A síndrome de Wiskott-Aldrich (WAS) (OMIM 301000) é uma rara imunodeficiência ligada ao cromossomo X causada por mutações em um único gene, WAS, mapeado para Xp11.22-Xp11.3 e codificando a proteína da síndrome de Wiskott-Aldrich (WASP) 1. WASP é um regulador crítico da sinalização de actina com expressão limitada a células hematopoiéticas e, portanto, é necessário para múltiplas funções, incluindo ativação de células T, migração de células dendríticas e formação de podossomas, e B desenvolvimento e função dos terminais celulares. WAS é caracterizada por microtrombocitopenia, infecções recorrentes, eczema e associada a uma alta incidência de auto-imunidade e de malignidades linfoides. WAS clássico ou grave é geralmente observado em pacientes com mutações sem sentido ou inserções/exclusões resultando em frameshift ou mutações no local de junção ou mutações sem sentido e resultando em proteína 2 instável. Com poucas exceções, pacientes WASP-negativos têm doença clássica. Os pacientes afetados têm uma expectativa de vida severamente reduzida.

Atualmente, a única opção curativa para pacientes WAS é o transplante de células-tronco hematopoiéticas (HSCT). Este tratamento é mais bem-sucedido quando um irmão HLA idêntico ou um doador não aparentado compatível está disponível e resulta na correção de microtrombocitopenia e disfunção imune, mesmo quando ocorre quimerismo misto estável. No entanto, mesmo os pacientes submetidos a HSCT podem sofrer de morbidade e mortalidade consideráveis ​​devido à doença do enxerto contra o hospedeiro (GVHD) e muitos pacientes não possuem um doador HLA idêntico. O resultado do HSCT relacionado incompatível é consistentemente ruim com sobrevida de aproximadamente 50%. A transferência de genes é um tratamento alternativo atraente para WAS. A transferência bem-sucedida de genes usando HSC corrigida por genes autólogos superaria as complicações clínicas ligadas à GVHD e seu tratamento. Além disso, em contraste com o HSCT alogênico, a transferência de genes não seria limitada pela disponibilidade de doadores compatíveis. Várias linhas de evidência indicam que a reconstituição parcial com células corrigidas por genes pode ser suficiente para melhorar a doença.

Propomos aqui um estudo piloto e de viabilidade da transferência de genes ex vivo usando um vetor lentiviral (LV) para transduzir células CD34+ HSC autólogas derivadas da medula óssea. As células serão infundidas em pacientes condicionados com quimioterapia citorredutora. Nossos investigadores colaboradores na Europa desenvolveram um LV que codifica o WAS cDNA humano sob controle do promotor WAS e pseudotipado com o envelope da glicoproteína do Vírus da Estomatite Vesicular (VSVg). Este w1.6_hWASP_WPRE (VSVg) LV (abreviado como w1.6W) demonstrou ser eficaz em modelos pré-clínicos in vitro e in vivo. A segurança, incluindo toxicidade celular, mutagênese insercional e formação de tumores, foi estudada por vários métodos, incluindo: 1) um ensaio sensível de transformação in vitro, 2) estudos de toxicidade em células CD34+ humanas transduzidas, 3) exame do padrão de inserção em células murinas transduzidas , e 4) observação de longo prazo e estudos secundários de transplante em camundongos. Nos Estados Unidos, planejamos inscrever 5 meninos com WAS clássico que não possuem um doador compatível ou não aparentado. Estudos paralelos (não sob nosso pedido de Novo Medicamento em Investigação) usando o mesmo LV produzido na mesma instalação, Genethon, serão conduzidos em Londres, Reino Unido (5 indivíduos) e Paris, França (5 indivíduos). O objetivo principal será demonstrar viabilidade e segurança. O objetivo secundário será avaliar a eficácia terapêutica.